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目的:
本研究通过观察IFRD1蛋白和IFRD1mRNA在不同宫颈病变组织中的表达情况,及在不同临床病理参数的宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况,探讨IFRD1基因与宫颈病变发生发展机制的关系,为宫颈病变的预防、诊断、治疗探索新的生物标记物及基因治疗靶点。
方法:
收集116例不同宫颈病变患者的宫颈组织,其中包括慢性宫颈炎病例20例(Control组)、低级别鳞状上皮瘤变病例20例(LSIL组)、高级别鳞状上皮内瘤变病例20例(HSIL组)、宫颈鳞状细胞癌病例48例(SCC组)、宫颈腺癌病例8例(AUC组)。采用免疫组织化学(IHC)技术检测不同宫颈病变组织石蜡切片中IFRD1蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR(Qrt-PCR)技术检测不同宫颈病变新鲜组织中IFRD1mRNA的表达水平,利用这两种方法对比慢性宫颈炎组织、LSIL组织、HSIL组织和SCC组织之间IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达差异;分析不同临床病理参数SCC分组中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达差异;分析宫颈腺癌(AUC)组织和慢性宫颈炎组织之间IFRD1mRNA的表达差异及AUC组织和正常宫颈腺体组织之间IFRD1蛋白的表达差异。同时分别选取慢性宫颈炎组织和SCC组织各6例,采用蛋白质印迹(WB)技术检测IFRD1蛋白在慢性宫颈炎组织及SCC组织中的表达,对本实验做进一步验证。实验数据按照宫颈病变的级别、临床病理参数进行不同层面的分析,实验结果采用统计软件SPSS20.0进行统计学分析,各组间比较结果以P<0.05认为差异有统计学意义。
结果:
1、IHC实验结果显示:IFRD1蛋白在慢性宫颈炎组织、LSIL组织、HSIL组织中的表达主要在鳞状上皮层内,位于细胞浆中,呈棕褐色颗粒状,各组着色程度无明显差异,慢性宫颈炎组织中主要表达在鳞状上皮的基底层和副基底层,在CIN组织中主要不同程度的表达在鳞状上皮层内,且随着病变程度的加重而由基底层至表层表达逐渐加厚,在SCC癌巢组织中100%弥漫表达,宫颈鳞状上皮外的宫颈间质及宫颈癌灶以外的组织中仅有少量散在点状表达。数据结果进行秩和检验和Spearman相关分析显示:在Control组、LSIL组、HSIL组、SCC组中IFRD1蛋白的表达,呈逐渐上升的趋势,差异有显著性意义(x2=83.44,P=0.000,P<0.05,r=0.884);各组两两比较,随着宫颈病变程度的加重,IFRD1蛋白表达呈现逐渐增强趋势,SCC组强于HSIL组,HSIL组强于LSIL组,LSIL组强于Control组,各组间比较P值均<0.05,差异具有统计学意义。IFRD1蛋白在AUC及正常宫颈腺体组织中的腺体细胞浆中均有不同程度表达,在AUC组织的腺体细胞浆中表达更加明显,呈深棕色,采用t-检验进行统计学分析,IFRD1蛋白在AUC组织中的表达量高于正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P=0030,P<0.05)。
2、Qrt-PCR实验结果显示:IFRD1mRNA的相对表达量的2-ΔΔCT值在Control组为1.40±0.39;LSIL组为2.93±0.94;HSIL组为5.37±1.56;SCC组为11.32±2.59;AUC组为11.04±2.62,单因素方差分析显示各组差异具有显著性意义(F值=131.78、P=0.000,P<0.05);各组两两比较采用Dunnett-t法检验,IFRD1mRNA在LSIL组、HSIL组、SCC组、AUC组中的表达量均高于Control组,在LSIL组、HSIL组、SCC组和AUC组中的表达,随着病变程度的加重而呈现逐渐升高趋势,各组间比较,P值均<0.05,差异具有统计学意义。
3、WB检测结果t检验显示:IFRD1蛋白在SCC组织中的相对表达量高于慢性宫颈炎组织,差异具有统计学意义(P=0.0002,P<0.05)。
4、IHC和Qrt-PCR在SCC的检测结果中,采用单因素方差分析对不同病理分级和临床分期的数据进行统计学分析,采用t检验对有无深肌层间质浸润、脉管间隙浸润、神经侵犯、盆腔淋巴结转移的数据进行统计学分析,上述不同临床病理参数SCC分组中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达水平各组间比较,P值均>0.05,差异无统计学意义。
结论:
1、IFRD1蛋白表达量和IFRD1mRNA的相对表达量均随宫颈病变的程度的加重而呈现逐渐增加趋势,提示IFRD1基因与在CIN和SCC的发病过程中发挥了重要作用。
2、免疫组化检测中,随宫颈病变程度的加重,IFRDI蛋白的表达由宫颈鳞状上皮的基底层至表层逐渐加厚,在SCC癌巢组织中100%弥漫表达,提示该基因与宫颈鳞状上皮细胞和SCC细胞的增殖有关。
3、SCC组织中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达水平与SCC的临床病理参数(临床分期、肿瘤分化程度、病理侵袭范围)未见统计学意义,提示IFRD1基因可能未参与SCC的侵袭、转移、进展及预后。
4、IFRDI蛋白在正常宫颈腺体及AUC中腺体的细胞浆均有表达,且AUC中的表达强度高于正常宫颈腺体组,IFRD1mRNA在AUC组中的表达强度高于Control组,提示IFRD1基因在AUC发病过程中发挥了一定作用。
本研究通过观察IFRD1蛋白和IFRD1mRNA在不同宫颈病变组织中的表达情况,及在不同临床病理参数的宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况,探讨IFRD1基因与宫颈病变发生发展机制的关系,为宫颈病变的预防、诊断、治疗探索新的生物标记物及基因治疗靶点。
方法:
收集116例不同宫颈病变患者的宫颈组织,其中包括慢性宫颈炎病例20例(Control组)、低级别鳞状上皮瘤变病例20例(LSIL组)、高级别鳞状上皮内瘤变病例20例(HSIL组)、宫颈鳞状细胞癌病例48例(SCC组)、宫颈腺癌病例8例(AUC组)。采用免疫组织化学(IHC)技术检测不同宫颈病变组织石蜡切片中IFRD1蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR(Qrt-PCR)技术检测不同宫颈病变新鲜组织中IFRD1mRNA的表达水平,利用这两种方法对比慢性宫颈炎组织、LSIL组织、HSIL组织和SCC组织之间IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达差异;分析不同临床病理参数SCC分组中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达差异;分析宫颈腺癌(AUC)组织和慢性宫颈炎组织之间IFRD1mRNA的表达差异及AUC组织和正常宫颈腺体组织之间IFRD1蛋白的表达差异。同时分别选取慢性宫颈炎组织和SCC组织各6例,采用蛋白质印迹(WB)技术检测IFRD1蛋白在慢性宫颈炎组织及SCC组织中的表达,对本实验做进一步验证。实验数据按照宫颈病变的级别、临床病理参数进行不同层面的分析,实验结果采用统计软件SPSS20.0进行统计学分析,各组间比较结果以P<0.05认为差异有统计学意义。
结果:
1、IHC实验结果显示:IFRD1蛋白在慢性宫颈炎组织、LSIL组织、HSIL组织中的表达主要在鳞状上皮层内,位于细胞浆中,呈棕褐色颗粒状,各组着色程度无明显差异,慢性宫颈炎组织中主要表达在鳞状上皮的基底层和副基底层,在CIN组织中主要不同程度的表达在鳞状上皮层内,且随着病变程度的加重而由基底层至表层表达逐渐加厚,在SCC癌巢组织中100%弥漫表达,宫颈鳞状上皮外的宫颈间质及宫颈癌灶以外的组织中仅有少量散在点状表达。数据结果进行秩和检验和Spearman相关分析显示:在Control组、LSIL组、HSIL组、SCC组中IFRD1蛋白的表达,呈逐渐上升的趋势,差异有显著性意义(x2=83.44,P=0.000,P<0.05,r=0.884);各组两两比较,随着宫颈病变程度的加重,IFRD1蛋白表达呈现逐渐增强趋势,SCC组强于HSIL组,HSIL组强于LSIL组,LSIL组强于Control组,各组间比较P值均<0.05,差异具有统计学意义。IFRD1蛋白在AUC及正常宫颈腺体组织中的腺体细胞浆中均有不同程度表达,在AUC组织的腺体细胞浆中表达更加明显,呈深棕色,采用t-检验进行统计学分析,IFRD1蛋白在AUC组织中的表达量高于正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P=0030,P<0.05)。
2、Qrt-PCR实验结果显示:IFRD1mRNA的相对表达量的2-ΔΔCT值在Control组为1.40±0.39;LSIL组为2.93±0.94;HSIL组为5.37±1.56;SCC组为11.32±2.59;AUC组为11.04±2.62,单因素方差分析显示各组差异具有显著性意义(F值=131.78、P=0.000,P<0.05);各组两两比较采用Dunnett-t法检验,IFRD1mRNA在LSIL组、HSIL组、SCC组、AUC组中的表达量均高于Control组,在LSIL组、HSIL组、SCC组和AUC组中的表达,随着病变程度的加重而呈现逐渐升高趋势,各组间比较,P值均<0.05,差异具有统计学意义。
3、WB检测结果t检验显示:IFRD1蛋白在SCC组织中的相对表达量高于慢性宫颈炎组织,差异具有统计学意义(P=0.0002,P<0.05)。
4、IHC和Qrt-PCR在SCC的检测结果中,采用单因素方差分析对不同病理分级和临床分期的数据进行统计学分析,采用t检验对有无深肌层间质浸润、脉管间隙浸润、神经侵犯、盆腔淋巴结转移的数据进行统计学分析,上述不同临床病理参数SCC分组中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达水平各组间比较,P值均>0.05,差异无统计学意义。
结论:
1、IFRD1蛋白表达量和IFRD1mRNA的相对表达量均随宫颈病变的程度的加重而呈现逐渐增加趋势,提示IFRD1基因与在CIN和SCC的发病过程中发挥了重要作用。
2、免疫组化检测中,随宫颈病变程度的加重,IFRDI蛋白的表达由宫颈鳞状上皮的基底层至表层逐渐加厚,在SCC癌巢组织中100%弥漫表达,提示该基因与宫颈鳞状上皮细胞和SCC细胞的增殖有关。
3、SCC组织中IFRD1蛋白和IFRD1mRNA的表达水平与SCC的临床病理参数(临床分期、肿瘤分化程度、病理侵袭范围)未见统计学意义,提示IFRD1基因可能未参与SCC的侵袭、转移、进展及预后。
4、IFRDI蛋白在正常宫颈腺体及AUC中腺体的细胞浆均有表达,且AUC中的表达强度高于正常宫颈腺体组,IFRD1mRNA在AUC组中的表达强度高于Control组,提示IFRD1基因在AUC发病过程中发挥了一定作用。