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目的：
优化新型纳米微流控芯片分离循环肿瘤细胞实验条件，建立循环肿瘤细胞的检测体系；比较纳米微流控芯片法及CellSearch法在检测胰腺癌循环肿瘤细胞的敏感性差异，初步探讨该技术用于胰腺癌循环肿瘤细胞检测的可行性；比较胰腺癌患者、胰腺良性病变患者及健康自愿者循环肿瘤细胞数量，初步探讨循环肿瘤细胞检测对胰腺癌诊断及预后的临床意义。
方法：
采集健康自愿者外周静脉血7.5ml，利用GFP预转染的肿瘤细胞株模拟循环肿瘤细胞，分别以1.0ml/min、1.5ml/min、2.0ml/min、2.5ml/min、3.0ml/min的进样速度进样，分别计算纳米微流控芯片捕获效率，获得最佳进样速度；同时采集胰腺癌患者晨起外周静脉血7.5ml分别送检CellSearch及纳米微流控芯片富集胰腺癌循环肿瘤细胞，利用免疫荧光（EpCAM、CK-18、CD-45、DAPI）鉴定，比较两者在胰腺癌CTCs捕获中的优劣；采集良性胰腺病变患者及健康自愿者晨起外周静脉血7.5ml，利用纳米微流控芯片检测循环肿瘤细胞，结合临床数据，分析外周血中循环肿瘤细胞数量与胰腺癌诊断及预后的相关性。
结果：
在1.0ml/min、1.5ml/min、2.0ml/min进样速度下纳米微流控芯片的平均富集率各为57.7%、66.3%、75.2%；2.5ml/min及3.0ml/min因进样过程中多次出现纳米芯片中分离管堵塞，反复重启影响流体稳定，予以剔除；综合纳米微流控芯片捕获效率及通畅性，确定2.0ml/min为最佳进样速度。2015年10月至2017年3月共收集胰腺癌患者26例，胰腺良性疾病患者10例，健康自愿者10例。其中20例胰腺癌患者同时送检CellSearch，比较Cellsearch与纳米微流控芯片检测胰腺癌CTCs阳性率分别为20%及100%，两组检测阳性率存在显著差异（P＜0.0001）。
结论及意义：
纳米微流控芯片在CTCs分离捕获中具有高通量、高富集率等特点，在进样速度为2.0ml/min时富集率较高；对比CellSearch，纳米微流芯片在检测胰腺癌CTCs上有更高的阳性率；纳米微流控芯片胰腺癌CTCs检测的敏感性为96.6%，特异性为86.7%，CTCs检测可做为临床胰腺癌诊断的重要补充；临床分析显示胰腺癌CTCs计数与肿瘤远处转移存在相关关系，CTCs检测可做为预测胰腺癌远处转移的重要指标。
优化新型纳米微流控芯片分离循环肿瘤细胞实验条件，建立循环肿瘤细胞的检测体系；比较纳米微流控芯片法及CellSearch法在检测胰腺癌循环肿瘤细胞的敏感性差异，初步探讨该技术用于胰腺癌循环肿瘤细胞检测的可行性；比较胰腺癌患者、胰腺良性病变患者及健康自愿者循环肿瘤细胞数量，初步探讨循环肿瘤细胞检测对胰腺癌诊断及预后的临床意义。
方法：
采集健康自愿者外周静脉血7.5ml，利用GFP预转染的肿瘤细胞株模拟循环肿瘤细胞，分别以1.0ml/min、1.5ml/min、2.0ml/min、2.5ml/min、3.0ml/min的进样速度进样，分别计算纳米微流控芯片捕获效率，获得最佳进样速度；同时采集胰腺癌患者晨起外周静脉血7.5ml分别送检CellSearch及纳米微流控芯片富集胰腺癌循环肿瘤细胞，利用免疫荧光（EpCAM、CK-18、CD-45、DAPI）鉴定，比较两者在胰腺癌CTCs捕获中的优劣；采集良性胰腺病变患者及健康自愿者晨起外周静脉血7.5ml，利用纳米微流控芯片检测循环肿瘤细胞，结合临床数据，分析外周血中循环肿瘤细胞数量与胰腺癌诊断及预后的相关性。
结果：
在1.0ml/min、1.5ml/min、2.0ml/min进样速度下纳米微流控芯片的平均富集率各为57.7%、66.3%、75.2%；2.5ml/min及3.0ml/min因进样过程中多次出现纳米芯片中分离管堵塞，反复重启影响流体稳定，予以剔除；综合纳米微流控芯片捕获效率及通畅性，确定2.0ml/min为最佳进样速度。2015年10月至2017年3月共收集胰腺癌患者26例，胰腺良性疾病患者10例，健康自愿者10例。其中20例胰腺癌患者同时送检CellSearch，比较Cellsearch与纳米微流控芯片检测胰腺癌CTCs阳性率分别为20%及100%，两组检测阳性率存在显著差异（P＜0.0001）。
结论及意义：
纳米微流控芯片在CTCs分离捕获中具有高通量、高富集率等特点，在进样速度为2.0ml/min时富集率较高；对比CellSearch，纳米微流芯片在检测胰腺癌CTCs上有更高的阳性率；纳米微流控芯片胰腺癌CTCs检测的敏感性为96.6%，特异性为86.7%，CTCs检测可做为临床胰腺癌诊断的重要补充；临床分析显示胰腺癌CTCs计数与肿瘤远处转移存在相关关系，CTCs检测可做为预测胰腺癌远处转移的重要指标。