论文部分内容阅读
目的
建立高盐大鼠暴露模型，观察母鼠及仔鼠血压、24h尿蛋白及血尿生化的变化，并探讨其引起心血管改变的可能机制。
方法
1.动物模型：3周龄(断乳后)无特定病原体级SpragueDawley大鼠雌性42只，适应性饲养1周后随机分为三组，分别给予高盐饲料、低盐饲料、正常盐饲料喂养，均单笼饲养，自由饮水。喂养至12周龄开始配种，按雌雄2:1合笼。次日检查雌鼠阴道栓及做分泌物涂片检查，显微镜下见雄鼠精子满视野记为妊娠第0天。孕鼠在妊娠20-22天自然分娩，仔鼠记为出生后第1天，哺乳4周后仔鼠断乳，断乳后仔鼠继续分组饲养，将高盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠高盐子代高盐组(HH组)、母鼠高盐子代低盐组(HL组)、母鼠高盐子代正常盐组(HN组)；将低盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠低盐子代低盐组(LL组)；将正常盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠正常盐子代正常盐组(NN组)。
2.用电子天平称量各时段母鼠及仔鼠的体重及用游标卡尺测量新生1天仔鼠的身长、尾长。
3.用智能无创大鼠血压仪检测母鼠及仔鼠的血压，采集母鼠及仔鼠的血液用于生化检测，用代谢笼收集母鼠及仔鼠的尿液检测24h尿蛋白、尿钠浓度。
4.Masson染色观察产后3周母鼠、4周龄仔鼠、8周龄仔鼠、12周龄仔鼠心肌纤维化改变，探讨纤维化改变的可能机制，Westernblot检测母鼠及仔鼠心脏组织EndMT的标志性物质a-SMA、vimentin的蛋白表达水平。
5.检测RAAS及NO/cGMP/PKGI介导的心血管功能改变的相关机制：用Westernblot检测母鼠及仔鼠心脏组织中AT1R、AT2R、PKGI、sGC、eNOS的蛋白表达水平。
6.用DNA甲基化试剂盒检测母鼠及仔鼠心脏组织DNA总甲基化水平的变化。
结果
1.高盐暴露后，母鼠产后2周时，H组体重高于L组体重，其余不同时段母鼠各组的体重之间的比较均无差异，在仔鼠中，HH_4W组体重低于NN_4W及LL_4W组；HH_8W组体重低于其余三组；而在新生1天仔鼠及12周龄仔鼠中各组体重无差别。且各组新生1天仔鼠身长、尾长无差别。
2.母鼠第8周、9周、10周、11周、孕7天、孕14天、产后1周、产后2周、产后3周高盐组的血压均高于正常盐组，母鼠第9周、10周、11周、孕7天、产后1周、产后2周、产后3周高盐组的血压均高于低盐组，在仔鼠中，NN_12W组血压最低，HH_12W组血压最高。NN_8W、HL_8W、HH_8W、HN_12W、HL_12W、HH_12W组的收缩压高于NN_12W组。7周、11周、孕18天，H组24h尿蛋白含量分别高于N组及L组。仔鼠中，HH_12W组24h尿蛋白含量达最高，HN_8W、HL_8W组24h尿蛋白含量高于NN_8W组，HH_12W组24h尿蛋白含量高于NN_8W、HN_8W、HH_8W及NN_12W、HN_12W、HL_12W组，且在总体水平上，高盐组母鼠及仔鼠血Na浓度、血浆渗透压、尿Na浓度高于正常盐组。
3.母鼠H组心肌纤维化指数明显高于N组，在仔鼠中，HH_4W与LL_4W组心肌纤维化指数高于NN_4W组；HH_8W与HN_8W组心肌纤维化水平高于NN_8W组，HH_12W心肌纤维化水平高于NN_12W与HN_12W组。Westernblot结果显示：高盐暴露的母鼠及仔鼠心脏组织a-SMA和vimentin的蛋白表达水平上调。
4.Westernblot结果显示，母鼠H组AT1R和eNOS的蛋白表达水平高于N组及L组，H组PKGI的蛋白表达水平高于L组，H组AT2R的蛋白表达水平低于N组。仔鼠HH_8W组AT1R的蛋白表达水平高于NN_8W组，仔鼠HH_12W组AT1R的蛋白表达水平高于其余三组；NN_8W及HL_8W组AT2R的蛋白表达水平高于HH_8W，NN_12W组AT2R的蛋白表达水平高于HH_12W和HL_12W组；在8周仔鼠中，HH_8W组PKGI、eNOS的蛋白表达水平高于其余三组，在12周仔鼠中，HH_12W组PKGI、eNOS的蛋白表达水平高于其余三组；各组母鼠及仔鼠中sGC的蛋白表达水平无差异。
5.对母鼠及仔鼠心脏组织DNA总甲基化水平进行检测发现，母鼠中，N组DNA总甲基化的水平高于H组、L组；NN_12W与HN_12W组DNA总甲基化的水平高于NN_8W组；NN_12W组DNA总甲基化的水平高于HN_8W组、HL_8W组、HH_8W组、HL_12W组、HH_12W组；HN_12W组DNA总甲基化的水平高于HL_12W组、HH_12W组。
结论
1.母源性高盐暴露可影响4周龄及8周龄仔鼠的生长发育。
2.母源性高盐暴露可对母鼠及仔鼠的心血管及肾脏功能造成损害，导致高盐组母鼠及仔鼠高血压形成，及24h尿蛋白含量、血Na浓度、血浆渗透压、尿Na浓度增加。
3.母源性高盐暴露可能通过上调心脏组织a-SMA和vimentin的表达，促进内皮-间质转化(EndMT)，从而导致母鼠及仔鼠的心肌纤维化。
4.母源性高盐暴露所致的母体及仔鼠心血管功能的改变可能是由NO/cGMP/PKGI信号转导通路及RAAS系统共同介导调控的。
5.高盐暴露导致母鼠及仔鼠表观遗传发生了改变。
建立高盐大鼠暴露模型，观察母鼠及仔鼠血压、24h尿蛋白及血尿生化的变化，并探讨其引起心血管改变的可能机制。
方法
1.动物模型：3周龄(断乳后)无特定病原体级SpragueDawley大鼠雌性42只，适应性饲养1周后随机分为三组，分别给予高盐饲料、低盐饲料、正常盐饲料喂养，均单笼饲养，自由饮水。喂养至12周龄开始配种，按雌雄2:1合笼。次日检查雌鼠阴道栓及做分泌物涂片检查，显微镜下见雄鼠精子满视野记为妊娠第0天。孕鼠在妊娠20-22天自然分娩，仔鼠记为出生后第1天，哺乳4周后仔鼠断乳，断乳后仔鼠继续分组饲养，将高盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠高盐子代高盐组(HH组)、母鼠高盐子代低盐组(HL组)、母鼠高盐子代正常盐组(HN组)；将低盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠低盐子代低盐组(LL组)；将正常盐组断乳后的仔鼠随机分为母鼠正常盐子代正常盐组(NN组)。
2.用电子天平称量各时段母鼠及仔鼠的体重及用游标卡尺测量新生1天仔鼠的身长、尾长。
3.用智能无创大鼠血压仪检测母鼠及仔鼠的血压，采集母鼠及仔鼠的血液用于生化检测，用代谢笼收集母鼠及仔鼠的尿液检测24h尿蛋白、尿钠浓度。
4.Masson染色观察产后3周母鼠、4周龄仔鼠、8周龄仔鼠、12周龄仔鼠心肌纤维化改变，探讨纤维化改变的可能机制，Westernblot检测母鼠及仔鼠心脏组织EndMT的标志性物质a-SMA、vimentin的蛋白表达水平。
5.检测RAAS及NO/cGMP/PKGI介导的心血管功能改变的相关机制：用Westernblot检测母鼠及仔鼠心脏组织中AT1R、AT2R、PKGI、sGC、eNOS的蛋白表达水平。
6.用DNA甲基化试剂盒检测母鼠及仔鼠心脏组织DNA总甲基化水平的变化。
结果
1.高盐暴露后，母鼠产后2周时，H组体重高于L组体重，其余不同时段母鼠各组的体重之间的比较均无差异，在仔鼠中，HH_4W组体重低于NN_4W及LL_4W组；HH_8W组体重低于其余三组；而在新生1天仔鼠及12周龄仔鼠中各组体重无差别。且各组新生1天仔鼠身长、尾长无差别。
2.母鼠第8周、9周、10周、11周、孕7天、孕14天、产后1周、产后2周、产后3周高盐组的血压均高于正常盐组，母鼠第9周、10周、11周、孕7天、产后1周、产后2周、产后3周高盐组的血压均高于低盐组，在仔鼠中，NN_12W组血压最低，HH_12W组血压最高。NN_8W、HL_8W、HH_8W、HN_12W、HL_12W、HH_12W组的收缩压高于NN_12W组。7周、11周、孕18天，H组24h尿蛋白含量分别高于N组及L组。仔鼠中，HH_12W组24h尿蛋白含量达最高，HN_8W、HL_8W组24h尿蛋白含量高于NN_8W组，HH_12W组24h尿蛋白含量高于NN_8W、HN_8W、HH_8W及NN_12W、HN_12W、HL_12W组，且在总体水平上，高盐组母鼠及仔鼠血Na浓度、血浆渗透压、尿Na浓度高于正常盐组。
3.母鼠H组心肌纤维化指数明显高于N组，在仔鼠中，HH_4W与LL_4W组心肌纤维化指数高于NN_4W组；HH_8W与HN_8W组心肌纤维化水平高于NN_8W组，HH_12W心肌纤维化水平高于NN_12W与HN_12W组。Westernblot结果显示：高盐暴露的母鼠及仔鼠心脏组织a-SMA和vimentin的蛋白表达水平上调。
4.Westernblot结果显示，母鼠H组AT1R和eNOS的蛋白表达水平高于N组及L组，H组PKGI的蛋白表达水平高于L组，H组AT2R的蛋白表达水平低于N组。仔鼠HH_8W组AT1R的蛋白表达水平高于NN_8W组，仔鼠HH_12W组AT1R的蛋白表达水平高于其余三组；NN_8W及HL_8W组AT2R的蛋白表达水平高于HH_8W，NN_12W组AT2R的蛋白表达水平高于HH_12W和HL_12W组；在8周仔鼠中，HH_8W组PKGI、eNOS的蛋白表达水平高于其余三组，在12周仔鼠中，HH_12W组PKGI、eNOS的蛋白表达水平高于其余三组；各组母鼠及仔鼠中sGC的蛋白表达水平无差异。
5.对母鼠及仔鼠心脏组织DNA总甲基化水平进行检测发现，母鼠中，N组DNA总甲基化的水平高于H组、L组；NN_12W与HN_12W组DNA总甲基化的水平高于NN_8W组；NN_12W组DNA总甲基化的水平高于HN_8W组、HL_8W组、HH_8W组、HL_12W组、HH_12W组；HN_12W组DNA总甲基化的水平高于HL_12W组、HH_12W组。
结论
1.母源性高盐暴露可影响4周龄及8周龄仔鼠的生长发育。
2.母源性高盐暴露可对母鼠及仔鼠的心血管及肾脏功能造成损害，导致高盐组母鼠及仔鼠高血压形成，及24h尿蛋白含量、血Na浓度、血浆渗透压、尿Na浓度增加。
3.母源性高盐暴露可能通过上调心脏组织a-SMA和vimentin的表达，促进内皮-间质转化(EndMT)，从而导致母鼠及仔鼠的心肌纤维化。
4.母源性高盐暴露所致的母体及仔鼠心血管功能的改变可能是由NO/cGMP/PKGI信号转导通路及RAAS系统共同介导调控的。
5.高盐暴露导致母鼠及仔鼠表观遗传发生了改变。