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【背景】
银屑病是临床上常见的慢性炎症性皮肤病，由角质形成细胞异常增殖以及免疫系统紊乱相互作用引起的，银屑病与多基因遗传及细胞异常凋亡、增殖、免疫、神经介质等因素密切相关，其中辅助性T细胞(T helper cell, Th cell)及其分泌产物介导的自身免疫紊乱是主要影响因素，Th17和Th22细胞及相关细胞因子参与介导银屑病的发生发展并发挥重要作用。近年来IL-22是银屑病发病机制的研究热点，IL-22的水平与银屑病的严重程度密切相关，由于IL-22属于少数的终末细胞因子，仅作用于组织器官的细胞，对其他免疫细胞的功能无明显影响，不产生免疫级联反应，因此IL-22将可能成为治疗银屑病非常重要且有效的靶点。
细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication，GJIC)参与调控细胞增殖、分化、迁移及维持细胞稳态、实现新陈代谢等生理功能，是多细胞生物体内普遍存在的通讯方式。GJIC的生物效应通过间隙连接蛋白(connexin，Cx)实现，由于Cx的类型多样，不同Cx在不同的细胞、组织及内环境中发挥不同特性，通过GJIC的分子的不同也会影响其功能。因此间隙连接通讯的调节机制呈现其复杂性及多样性。目前研究认为，Cx的表达水平与银屑病的疾病严重程度有明显的相关性。
目前为止，国内外尚未发现IL-22对Cx表达和对GJIC影响的研究报道。因此，研究IL-22对细胞GJIC功能和Cx表达的影响对探讨银屑病发病的新分子作用机制，为银屑病发病机制的探讨和新药物研发提供新的理论基础，也将为银屑病发病机制研究开辟新方向。
【目的】
本研究以在外体培养的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)为研究对象，观察IL-22对GJIC功能的影响；研究IL-22对不同Cx的mRNA和蛋白表达水平的影响，分析GJIC功能变化与Cx表达水平之间的关系；同时探究IL-22介导Cx影响GJIC功能的信号通路及其作用机制。从影响GJIC调控功能的层面上，揭示IL-22调控Cx表达的机制，并探讨IL-22信号通路对Cx表达的影响，以期望进一步阐明IL-22在银屑病的分子作用机制。
【方法】
本研究对IL-22影响细胞GJIC功能的最适浓度和处理时间进行筛选，并观察IL-22对细胞GJIC功能的影响，分析IL-22的浓度和细胞处理时间与GJIC功能之间的关系。利用Q-PCR实验，观察IL-22对多种Cx的mRNA表达水平的影响，再通过Westernblot法观察IL-22对Cx的蛋白水平影响，运用免疫荧光试验观察IL-22处理细胞后，Cx在细胞内的表达情况。通过JNK抑制剂(SP600125)和NF-κB抑制剂(BAY 11 - 7082)，观察IL-22是否通过JNK通路和/或NF-κB通路介导HaCaT细胞中Cx表达，从而影响GJIC功能。分析和探究IL-22调控细胞Cx表达和GJIC功能的作用机制。
【结果】
1.IL-22对HaCaT细胞有浓度和时间依赖性抑制作用。其中，浓度为50ng/ml的IL-22处理24h后，HaCaT细胞GJIC功能明显下降(p＜0.01)。
2.50ng/mlIL-22对HaCaT细胞处理24h后，Cx26、Cx30和Cx31的mRNA表达水平与对照组比较无明显差异，而Cx43的mRNA和蛋白表达水平有明显减少(p＜0.01)。
3.抑制JNK信号通道后，IL-22对HaCaT细胞GJIC功能的抑制作用减弱(p＜0.01)，而抑制NF-κB信号通路后，IL-22对GJIC功能的抑制作用与IL-22处理组无明显差异(p＞0.05)。
4.抑制JNK信号通路，可阻断IL-22对Cx43表达水平(下调)的影响，而NF-κB信号通路的阻断与否，对IL-22作用Cx43的表达水平无明显影响。
5.通过Westernblot法检测JNK信号通路对细胞中Cx43、p-JNK、JNK蛋白表达水平的影响。IL-22处理组的细胞中，p-JNK被激活，Cx43表达下降，p-JNK水平与Cx43水平呈反比关系，当阻断JNK信号通路时，p-JNK活性降低，Cx43表达增加。
【结论】
1.IL-22对HaCaT细胞GJIC功能呈浓度、时间依赖性抑制作用。
2.IL-22对HaCaT细胞Cx43的mRNA及蛋白表达水平有下调作用，IL-22可能通过抑制Cx43的表达影响细胞GJIC的功能。
3.IL-22对HaCaT细胞Cx26、Cx30、Cx31的mRNA表达水平无明显影响。
4.IL-22可能通过激活JNK信号通路介导HaCaT细胞的Cx43的表达水平，从而影响GJIC功能。
银屑病是临床上常见的慢性炎症性皮肤病，由角质形成细胞异常增殖以及免疫系统紊乱相互作用引起的，银屑病与多基因遗传及细胞异常凋亡、增殖、免疫、神经介质等因素密切相关，其中辅助性T细胞(T helper cell, Th cell)及其分泌产物介导的自身免疫紊乱是主要影响因素，Th17和Th22细胞及相关细胞因子参与介导银屑病的发生发展并发挥重要作用。近年来IL-22是银屑病发病机制的研究热点，IL-22的水平与银屑病的严重程度密切相关，由于IL-22属于少数的终末细胞因子，仅作用于组织器官的细胞，对其他免疫细胞的功能无明显影响，不产生免疫级联反应，因此IL-22将可能成为治疗银屑病非常重要且有效的靶点。
细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication，GJIC)参与调控细胞增殖、分化、迁移及维持细胞稳态、实现新陈代谢等生理功能，是多细胞生物体内普遍存在的通讯方式。GJIC的生物效应通过间隙连接蛋白(connexin，Cx)实现，由于Cx的类型多样，不同Cx在不同的细胞、组织及内环境中发挥不同特性，通过GJIC的分子的不同也会影响其功能。因此间隙连接通讯的调节机制呈现其复杂性及多样性。目前研究认为，Cx的表达水平与银屑病的疾病严重程度有明显的相关性。
目前为止，国内外尚未发现IL-22对Cx表达和对GJIC影响的研究报道。因此，研究IL-22对细胞GJIC功能和Cx表达的影响对探讨银屑病发病的新分子作用机制，为银屑病发病机制的探讨和新药物研发提供新的理论基础，也将为银屑病发病机制研究开辟新方向。
【目的】
本研究以在外体培养的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)为研究对象，观察IL-22对GJIC功能的影响；研究IL-22对不同Cx的mRNA和蛋白表达水平的影响，分析GJIC功能变化与Cx表达水平之间的关系；同时探究IL-22介导Cx影响GJIC功能的信号通路及其作用机制。从影响GJIC调控功能的层面上，揭示IL-22调控Cx表达的机制，并探讨IL-22信号通路对Cx表达的影响，以期望进一步阐明IL-22在银屑病的分子作用机制。
【方法】
本研究对IL-22影响细胞GJIC功能的最适浓度和处理时间进行筛选，并观察IL-22对细胞GJIC功能的影响，分析IL-22的浓度和细胞处理时间与GJIC功能之间的关系。利用Q-PCR实验，观察IL-22对多种Cx的mRNA表达水平的影响，再通过Westernblot法观察IL-22对Cx的蛋白水平影响，运用免疫荧光试验观察IL-22处理细胞后，Cx在细胞内的表达情况。通过JNK抑制剂(SP600125)和NF-κB抑制剂(BAY 11 - 7082)，观察IL-22是否通过JNK通路和/或NF-κB通路介导HaCaT细胞中Cx表达，从而影响GJIC功能。分析和探究IL-22调控细胞Cx表达和GJIC功能的作用机制。
【结果】
1.IL-22对HaCaT细胞有浓度和时间依赖性抑制作用。其中，浓度为50ng/ml的IL-22处理24h后，HaCaT细胞GJIC功能明显下降(p＜0.01)。
2.50ng/mlIL-22对HaCaT细胞处理24h后，Cx26、Cx30和Cx31的mRNA表达水平与对照组比较无明显差异，而Cx43的mRNA和蛋白表达水平有明显减少(p＜0.01)。
3.抑制JNK信号通道后，IL-22对HaCaT细胞GJIC功能的抑制作用减弱(p＜0.01)，而抑制NF-κB信号通路后，IL-22对GJIC功能的抑制作用与IL-22处理组无明显差异(p＞0.05)。
4.抑制JNK信号通路，可阻断IL-22对Cx43表达水平(下调)的影响，而NF-κB信号通路的阻断与否，对IL-22作用Cx43的表达水平无明显影响。
5.通过Westernblot法检测JNK信号通路对细胞中Cx43、p-JNK、JNK蛋白表达水平的影响。IL-22处理组的细胞中，p-JNK被激活，Cx43表达下降，p-JNK水平与Cx43水平呈反比关系，当阻断JNK信号通路时，p-JNK活性降低，Cx43表达增加。
【结论】
1.IL-22对HaCaT细胞GJIC功能呈浓度、时间依赖性抑制作用。
2.IL-22对HaCaT细胞Cx43的mRNA及蛋白表达水平有下调作用，IL-22可能通过抑制Cx43的表达影响细胞GJIC的功能。
3.IL-22对HaCaT细胞Cx26、Cx30、Cx31的mRNA表达水平无明显影响。
4.IL-22可能通过激活JNK信号通路介导HaCaT细胞的Cx43的表达水平，从而影响GJIC功能。