论文部分内容阅读
牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)于1946年在美国纽约首次被发现,随后,世界各地均报道了本病的发生,BVDV主要发生于养殖业大国,如美国、澳大利亚等。20世纪80年代传入我国,李佑民首次在我国吉林省发现了牛病毒性腹泻病例,并成功分离出毒株。2011年,张淑琴等再次在吉林地区发病牛体内分离到该病毒,并命名为BVDV-JL株,为流行强毒株。
本实验调查了2017-2018年间吉林省19个市、县、区牛场的BVD流行情况,结果显示,位于吉林省北部靠近黑龙江省界地区的宁江区、扶余市、榆树市的血清抗体阳性率整体低于吉林省西部、南部和西南部靠近辽宁省界地区(四平市、梨树县、东丰县、梅河口市、柳河县),大部分地区牛血清BVDV抗体阳性率均处于较高水平,抗体水平高的地区普遍抗原阳性率较低,其中,吉林市与丰满区抗原阳性率最高,选取某牛场作为牛病毒性腹泻病毒净化示范牛场,对比免疫前后BVDV抗原抗体水平,结果显示,某牛场免疫牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗后BVDV抗体水平明显升高,由77.07%上升至95.10%,血清抗原阳性率由12.10%下降至1.92%。全省各县、市、区BVDV流行抗原均以1型为主,部分地区存在BVDV2型病毒感染。
对某牛场冷冻精液中检测出的BVDV进行了分离鉴定,并命名为BVDV-semen株,通过细胞驯化培养发现,BVDV-semen能较好的适应MDBK细胞,属于非细胞病变型(NCP),间接免疫荧光测定盲传12代后病毒效价为107.4TCID50/0.1mL。参考GenBank上发表的NADL毒株全基因序列,设计了12对特异性引物,每对引物扩增序列均有200-300bp的重合,对BVDV-semen株进行全基因组测序分析。测序结果显示,BVDV-semen株全长12.2kb,编码3686个氨基酸。与JL-1株亲缘关系最近,同源性高达99.9%,属于BVDV1b亚型。
E2基因为BVDV的主要致病基因,是研制BVDV亚单位疫苗的优秀抗原。E2基因也是国内外学者研究的热点。本研究通过对E2基因的检测,了解其核酸序列,继而翻译为蛋白质序列,通过对该蛋白质基本理化性质、空间结构、疏水性、跨膜区等的预测,全方位的了解该蛋白,通过分析发现,所检测的6份样品同源性在97.3%-99.9%之间,选取分离毒株BVDV-semen样本作为后续研究的目的蛋白,该蛋白在301-323位氨基酸形成一个跨膜区,此蛋白为亲水蛋白。
本实验结果可为吉林省BVDV的防控提供技术支持。
本实验调查了2017-2018年间吉林省19个市、县、区牛场的BVD流行情况,结果显示,位于吉林省北部靠近黑龙江省界地区的宁江区、扶余市、榆树市的血清抗体阳性率整体低于吉林省西部、南部和西南部靠近辽宁省界地区(四平市、梨树县、东丰县、梅河口市、柳河县),大部分地区牛血清BVDV抗体阳性率均处于较高水平,抗体水平高的地区普遍抗原阳性率较低,其中,吉林市与丰满区抗原阳性率最高,选取某牛场作为牛病毒性腹泻病毒净化示范牛场,对比免疫前后BVDV抗原抗体水平,结果显示,某牛场免疫牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗后BVDV抗体水平明显升高,由77.07%上升至95.10%,血清抗原阳性率由12.10%下降至1.92%。全省各县、市、区BVDV流行抗原均以1型为主,部分地区存在BVDV2型病毒感染。
对某牛场冷冻精液中检测出的BVDV进行了分离鉴定,并命名为BVDV-semen株,通过细胞驯化培养发现,BVDV-semen能较好的适应MDBK细胞,属于非细胞病变型(NCP),间接免疫荧光测定盲传12代后病毒效价为107.4TCID50/0.1mL。参考GenBank上发表的NADL毒株全基因序列,设计了12对特异性引物,每对引物扩增序列均有200-300bp的重合,对BVDV-semen株进行全基因组测序分析。测序结果显示,BVDV-semen株全长12.2kb,编码3686个氨基酸。与JL-1株亲缘关系最近,同源性高达99.9%,属于BVDV1b亚型。
E2基因为BVDV的主要致病基因,是研制BVDV亚单位疫苗的优秀抗原。E2基因也是国内外学者研究的热点。本研究通过对E2基因的检测,了解其核酸序列,继而翻译为蛋白质序列,通过对该蛋白质基本理化性质、空间结构、疏水性、跨膜区等的预测,全方位的了解该蛋白,通过分析发现,所检测的6份样品同源性在97.3%-99.9%之间,选取分离毒株BVDV-semen样本作为后续研究的目的蛋白,该蛋白在301-323位氨基酸形成一个跨膜区,此蛋白为亲水蛋白。
本实验结果可为吉林省BVDV的防控提供技术支持。