吉林省部分地区肉牛牛病毒性腹泻病毒流行病学调查及主要流行毒株基因序列分析

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牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)于1946年在美国纽约首次被发现,随后,世界各地均报道了本病的发生,BVDV主要发生于养殖业大国,如美国、澳大利亚等。20世纪80年代传入我国,李佑民首次在我国吉林省发现了牛病毒性腹泻病例,并成功分离出毒株。2011年,张淑琴等再次在吉林地区发病牛体内分离到该病毒,并命名为BVDV-JL株,为流行强毒株。
  本实验调查了2017-2018年间吉林省19个市、县、区牛场的BVD流行情况,结果显示,位于吉林省北部靠近黑龙江省界地区的宁江区、扶余市、榆树市的血清抗体阳性率整体低于吉林省西部、南部和西南部靠近辽宁省界地区(四平市、梨树县、东丰县、梅河口市、柳河县),大部分地区牛血清BVDV抗体阳性率均处于较高水平,抗体水平高的地区普遍抗原阳性率较低,其中,吉林市与丰满区抗原阳性率最高,选取某牛场作为牛病毒性腹泻病毒净化示范牛场,对比免疫前后BVDV抗原抗体水平,结果显示,某牛场免疫牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗后BVDV抗体水平明显升高,由77.07%上升至95.10%,血清抗原阳性率由12.10%下降至1.92%。全省各县、市、区BVDV流行抗原均以1型为主,部分地区存在BVDV2型病毒感染。
  对某牛场冷冻精液中检测出的BVDV进行了分离鉴定,并命名为BVDV-semen株,通过细胞驯化培养发现,BVDV-semen能较好的适应MDBK细胞,属于非细胞病变型(NCP),间接免疫荧光测定盲传12代后病毒效价为107.4TCID50/0.1mL。参考GenBank上发表的NADL毒株全基因序列,设计了12对特异性引物,每对引物扩增序列均有200-300bp的重合,对BVDV-semen株进行全基因组测序分析。测序结果显示,BVDV-semen株全长12.2kb,编码3686个氨基酸。与JL-1株亲缘关系最近,同源性高达99.9%,属于BVDV1b亚型。
  E2基因为BVDV的主要致病基因,是研制BVDV亚单位疫苗的优秀抗原。E2基因也是国内外学者研究的热点。本研究通过对E2基因的检测,了解其核酸序列,继而翻译为蛋白质序列,通过对该蛋白质基本理化性质、空间结构、疏水性、跨膜区等的预测,全方位的了解该蛋白,通过分析发现,所检测的6份样品同源性在97.3%-99.9%之间,选取分离毒株BVDV-semen样本作为后续研究的目的蛋白,该蛋白在301-323位氨基酸形成一个跨膜区,此蛋白为亲水蛋白。
  本实验结果可为吉林省BVDV的防控提供技术支持。
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