论文部分内容阅读
随着畜牧业的发展，抗生素过度使用导致细菌耐药性增加，药物残留和养殖成本增加引发了人们的广泛关注。益生菌具有改善动物体内环境、减少药物残留、调节胃肠道平衡、增强机体免疫力、降低疾病发生率等特点，已成为许多国家抗生素的新替代品。罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri, L.reuteri)是专性异型发酵乳酸杆菌，主要定殖在人和动物肠道中，具有抑制病原菌、改善肠道环境、调节肠道菌群、降低血清胆固醇等功能，是广泛应用于食品、药品和饲料添加剂的一种重要微生物。本实验从狐狸的肠道中分离到的乳酸菌，通过形态学、革兰氏染色、触酶试验、生理生化特性和分子生物学方法进行鉴定，研究了罗伊氏乳杆菌生物学特性及其对小鼠生长性能、血液生化指标和免疫功能的影响。研究结果如下：
(Ⅰ)菌株ZJF036培养4-10h进入对数生长期，稳定期培养液的最低pH为3.80，生理生化实验结果表现为乳酸菌生化反应特征，16SrDNA测序分析鉴定菌株ZJF036为罗伊氏乳杆菌。
(Ⅱ)ZJF036对麦迪霉素、头孢曲松和素氯霉敏感，对万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那和氨苄西林不敏感；细菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌作用；ZJF036在人工胃液和肠液中3h存活率可达90%以上，能够耐受0.4%的胆盐环境；ZJF036的疏水性为82.27%；在2h和4h自凝聚率分别为32.47%和41.70%；对狐狸小肠上皮细胞的黏附数为77.0±8.0CFU/cell。结果说明，ZJF036具有良好的抑菌能力，能耐受人工胃肠道液和胆汁盐，对狐狸小肠上皮细胞有很强的粘附力。
(Ⅲ)本研究旨在评估从狐狸中分离出的益生菌罗伊氏乳杆菌ZJF036对健康小鼠肠道形态和免疫功能的影响。将120只雌性昆明小鼠随机均分为高剂量组(T1)、中剂量组(T2)、低剂量组(T3)和对照组(NC)4组。每天分别给予NC组、T1组、T2组、T3组小鼠0.2mL生理盐水、109CFU/mL细菌悬液、108CFU/mL细菌悬液和107CFU/mL细菌悬液。试验持续四周。结果表明，各组之间脏器指数、血常规和血生化差异不显著(P＞0.05)，但109CFU/mL组可显著降低小鼠血糖水平(P＜0.05)。与对照组相比，高剂量组小鼠的最终体重明显增加(P＜0.05)。此外，高、中、低剂量组小鼠体重和ADG均显著增加(P＜0.05)。同时，高、中剂量组与对照组相比，IL-2、IL-6、IL-12水平显著升高(P＜0.05)，低剂量组与对照组相比，IL-6、IL-12水平显著升高(P＜0.05)。高剂量组与对照组相比，绒毛高度和隐窝深度明显增加(P＜0.05)。中剂量组与对照组相比，绒毛高度/隐窝深度比值明显降低(P＜0.05)。结果表明，罗伊氏乳杆菌ZJF036能够提高小鼠生长性能，增加机体免疫能力，改善肠道形态。
综上，罗伊氏乳杆菌ZJF036具有广谱抑菌能力、能够耐受胃肠液作用、具有较强的黏附能力，能够提高小鼠生长性能，增加机体免疫能力，改善肠道形态。因此，本研究为犬科动物益生菌制剂的研发提供了基础数据。
(Ⅰ)菌株ZJF036培养4-10h进入对数生长期，稳定期培养液的最低pH为3.80，生理生化实验结果表现为乳酸菌生化反应特征，16SrDNA测序分析鉴定菌株ZJF036为罗伊氏乳杆菌。
(Ⅱ)ZJF036对麦迪霉素、头孢曲松和素氯霉敏感，对万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那和氨苄西林不敏感；细菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌作用；ZJF036在人工胃液和肠液中3h存活率可达90%以上，能够耐受0.4%的胆盐环境；ZJF036的疏水性为82.27%；在2h和4h自凝聚率分别为32.47%和41.70%；对狐狸小肠上皮细胞的黏附数为77.0±8.0CFU/cell。结果说明，ZJF036具有良好的抑菌能力，能耐受人工胃肠道液和胆汁盐，对狐狸小肠上皮细胞有很强的粘附力。
(Ⅲ)本研究旨在评估从狐狸中分离出的益生菌罗伊氏乳杆菌ZJF036对健康小鼠肠道形态和免疫功能的影响。将120只雌性昆明小鼠随机均分为高剂量组(T1)、中剂量组(T2)、低剂量组(T3)和对照组(NC)4组。每天分别给予NC组、T1组、T2组、T3组小鼠0.2mL生理盐水、109CFU/mL细菌悬液、108CFU/mL细菌悬液和107CFU/mL细菌悬液。试验持续四周。结果表明，各组之间脏器指数、血常规和血生化差异不显著(P＞0.05)，但109CFU/mL组可显著降低小鼠血糖水平(P＜0.05)。与对照组相比，高剂量组小鼠的最终体重明显增加(P＜0.05)。此外，高、中、低剂量组小鼠体重和ADG均显著增加(P＜0.05)。同时，高、中剂量组与对照组相比，IL-2、IL-6、IL-12水平显著升高(P＜0.05)，低剂量组与对照组相比，IL-6、IL-12水平显著升高(P＜0.05)。高剂量组与对照组相比，绒毛高度和隐窝深度明显增加(P＜0.05)。中剂量组与对照组相比，绒毛高度/隐窝深度比值明显降低(P＜0.05)。结果表明，罗伊氏乳杆菌ZJF036能够提高小鼠生长性能，增加机体免疫能力，改善肠道形态。
综上，罗伊氏乳杆菌ZJF036具有广谱抑菌能力、能够耐受胃肠液作用、具有较强的黏附能力，能够提高小鼠生长性能，增加机体免疫能力，改善肠道形态。因此，本研究为犬科动物益生菌制剂的研发提供了基础数据。