【摘 要】
：
本研究拟从上述这两方面来探讨Rb1对钙超载影响的可能机制。方法：应用全细胞膜片钳技术通过设定的不同刺激方案记录原代培养7d海马神经元上的电压门控的钙通道电流(voltage-gated calcium channel current，VGCC)。利用细胞外灌流、细胞内液给药及预孵育等给药方式，同时分别应用各型钙通道特异性阻断剂或各种蛋白激酶的抑制剂，通过比较加药前后或不同组间电流幅度的变化探讨Aβ
论文部分内容阅读
本研究拟从上述这两方面来探讨Rb1对钙超载影响的可能机制。
方法：应用全细胞膜片钳技术通过设定的不同刺激方案记录原代培养7d海马神经元上的电压门控的钙通道电流(voltage-gated calcium channel current，VGCC)。利用细胞外灌流、细胞内液给药及预孵育等给药方式，同时分别应用各型钙通道特异性阻断剂或各种蛋白激酶的抑制剂，通过比较加药前后或不同组间电流幅度的变化探讨Aβ25-35对VGCC的调控及Rb1对Aβ25-35诱导的钙内流的作用机制。预先用钙高度特异性荧光探针Fluo-3/AM负载海马神经元，进行荧光染色，利用激光扫描共聚焦显微镜观察在不同药物干预条件下海马神经元内游离钙离子荧光强度的变化探讨Aβ25-35对内质网钙库调控及Rb1对Aβ25-35诱导的内质网钙库释放的影响。
结果：(1)在原代培养的海马神经元上存在多种的钙电流成分(L、N、P/Q、T等)，它们具有各自不同的药理学及动力学特性；急性给予10μmolL-I凝聚态Aβ25-35对VGCC没有影响；10μmoIL-1凝聚态Aβ25-35预孵育3、6、12、24h后，各组电流均较对照组有不同程度的增加，并以预孵育3h记录到的高电压激活的钙电流( HVA-Ica)变化为著，而预孵育对细胞的膜电容没有影响。(2)L-型钙通道的特异性抑制剂nifedipine完全抑制了凝聚态Aβ25-35诱导的Ca2+通道电流的增加；N型钙通道特异性抑制剂ω-conotoxin GVIA及P/Q型通道特异性的抑制剂ω-agatoxin IVA均无法完全抑制凝聚态Aβ25-35诱导的Ca2+通道电流的增加。PKA抑制剂H-89部分抑制了Ap预孵育组的电流，而MAPK抑制剂PD98059无法抑制Aβ诱导的电流的增大。(3)2、10、20μM各浓度组凝聚态Aβ25-35均增加了海马神经元胞内[Ca2+]i；IP3R的特异性抑制剂2-APB明显地抑制了胞内[Ca2+]i的增加，兰尼硷受体(RyR)的特异性抑制剂dantrolene却无法抑制。Aβ25-35作用1h后内质网钙容量即有明显下降，在作用24h后降低更为明显。在无细胞外钙情况下，磷脂酶C的抑制剂U73122部分抑制了Aβ25-35诱导的胞内[Ca2+]i的增加。(4)人参皂苷Rb1可以浓度依赖性的方式抑制海马神经元上VGCC，并且抑制了Aβ25-35诱导的VGCC。Nifedipine完全阻断了之前1βMRb41对Aβ25-35诱导的VGCC的抑制，而ω-conotoxin-GVIA、ω-agatoxin IVA等作用前后1μMRb1对Aβ25-35诱导的VGCC的抑制作用没有受到影响；Rb1使Aβ25-35作用的稳态失活曲线向左即超极化方向偏移，而对Aβ25-35诱导的VGCC的激活特性没有影响；cAMP的类似物Forskolin并没有消除10μM Rb1对VGCC的抑制，Rb1对Aβ25-35诱导的VGCC的抑制率亦没有被PKA/PKC抑制剂staurosporine所影响。在无细胞外钙情况下，各浓度组Rb1不能抑制Aβ25-35诱导的细胞内钙荧光强度的增强。
结论：凝聚态Aβ25-35可通过PKA系统对细胞膜上特定的钙通道进行磷酸化调控增大VGCC。Aβ25-35可通过IP3途径产生IP3作用于IP3R而引起内质网钙的释放，磷脂酶C的活化可能参与了上述过程。人参皂苷Rb1是一种钙通道阻滞剂，它通过选择性地作用于L-型电压门控的钙通道，影响钙通道的失活过程，即通过加速通道向失活态的转化抑制通道的活性从而抑制了Aβ25-35诱导的VGCC。Rb1对Aβ25-35诱导的细胞内钙的释放没有影响。以上可能是Rb1减轻Aβ25-35诱导的海马神经元钙超载的分子机制，也是人参在抗衰老及在治疗阿尔茨海默病中发挥药理作用的细胞和分子基础。
其他文献
目的： 比较经腹膜后途经达芬奇外科手术系统辅助腹腔镜下肾部分切除术(RALPN)与普通腹腔镜下肾部分切除术（LPN）的短期效果、优缺点，探讨达芬奇外科手术系统辅助腹腔镜下肾部分切除术(RALPN)的临床应用价值。 方法： 回顾性分析济南军区总医院2011年1月-2016年12月收治的35例肾脏肿瘤患者的临床资料。入选标准为术前影像学检查明确诊断，术前均通过测定血肌酐进行肾功能评估，肿瘤均呈外
目的： 探索AngioJet在治疗急性下肢动脉缺血时的有效性和安全性。 方法： 选取2016年10月至2017年4月于济南市中心医院血管外科诊治的11例急性下肢动脉缺血的患者资料，共11例肢体，男8例，女3例，平均病程3.09±2.12天，平均年龄72.64±8.03岁，合并抽烟史6例，合并高血压8例，合并2型糖尿病5例，合并缺血性心脏病4例，合并房颤4例，合并风湿性心脏病1例，根据WIFi
背景： 急性缺血性脑卒中(Acute Ischemic Stroke,AIS)现在已经成为世界范围内的主要死亡原因之一。在中国，调查数据显示每年有240万新发卒中，110万卒中患者相关死亡[1]，并且幸存患者均有卒中后遗症。近年来脑卒中已成为我国居民死亡主要原因。那么，卒中的救治主要因素是什么？快速开通闭塞血管是前提[2]，抢救时间的掌握是关键。时间就是生命，时间就是大脑。因此，脑卒中患者的救治
目的： 评价高分辨磁共振成像（high resolution MRI,HR-MRI）对颅内椎基底动脉夹层动脉瘤（vertebrobasilar dissecting aneurysm,VBDA）的诊断价值。 材料与方法： 1.病例选择：收集2015年6月-2016年6月由山东大学齐鲁医院收治的有后循环缺血症状，DSA或常规MRI确诊及临床怀疑有椎基底动脉夹层动脉瘤的患者共32例。 2.扫描
载脂蛋白A1（ApoA1）是高密度脂蛋白（HDL）的主要脱辅基蛋白成分，也是与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）颗粒相关的重要蛋白。HDL-C与ApoA1是胆固醇逆转运过程的关键因素，与冠心病呈负相关。在2型糖尿病患者中ApoA1-75bp/+83bp位点多态性与血脂水平及动脉粥样斑块发生之间的相关性仍不清楚。目的：探讨生活在大连地区的中国人ApoA1-75bp/+83bp变异与血脂异常的相关性。方
目的： 本研究主要通过MR扫描膝关节骨性关节炎（osteoarthritis,OA）患者，运用MR T1rho及T2mapping成像技术对关节软骨进行定量测量并分析，探讨关节软骨T1rho、T2值与半月板损伤分级之间的关系。以期为临床工作中诊断膝关节早期OA患者软骨损伤提供更直观的诊断依据。 研究方法 选择2016.12-2017.10在青岛市市立医院就诊的膝关节OA患者80例。其中男性3
目的：选取82例明确诊断为子宫腺肌病并选择通过腹腔镜下子宫切除手术治疗的病人进行研究，收集数据，并利用统计方法进行回顾分析。对腹腔镜下次全子宫切除术（laparoscopic subtotal hysterectomy,LSH）与腹腔镜下全子宫全切术（laparoscopic total hysterectomy,LTH）两种手术方式进行对比，分析其在子宫腺肌病治疗中的多个方面之间的优缺点差异，最
目的： 本研究通过观察IFRD1蛋白和IFRD1mRNA在不同宫颈病变组织中的表达情况，及在不同临床病理参数的宫颈鳞状细胞癌（SCC）组织中的表达情况，探讨IFRD1基因与宫颈病变发生发展机制的关系，为宫颈病变的预防、诊断、治疗探索新的生物标记物及基因治疗靶点。 方法： 收集116例不同宫颈病变患者的宫颈组织，其中包括慢性宫颈炎病例20例（Control组）、低级别鳞状上皮瘤变病例20例（L
目的：探讨开颅手术治疗的合并颅底骨折脑脊液漏的颅脑外伤患者(颅内感染的高危患者)，选择合理有效的药物及安全高效的给药方式预防术后颅内感染。方法：随机选取2006年10月-2008年10月无锡解放军101医院神经外科，术前有颅底骨折脑脊液漏的颅脑外伤开颅手术的患者60例为研究对象。根据术后万古霉素的不同给药方式随机分成鞘内给药组和静脉给药组，每组30例，通过侧脑室留置引流管获取脑脊液。鞘内给药组患者
Objective：The goal of this study is to compare acupuncture(alone)and Warm Acupuncture to determine which is more effective in treating cardiovascular disease,caused by heart blood deficiency.This stud