炙甘草汤对大鼠心房肌细胞离子通道的影响及机制研究

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第一部分基于功效性味归经研究中医治疗心房颤动用药规律的文献研究
  目的:从性味归经、功效等方面总结和归纳中医药治疗心房颤动时的用药规律。
  方法:通过在知网、万方、维普三大数据库进行检索中医治疗心房颤动相关文献的方式,经筛选和规范化处理后建立心房颤动中医用药规律数据库,并以频次分析和聚类分析对录入的中药进行数据统计和分析。
  结果:总结发现治疗心房颤动时,味甘、性平、归心经、功效为益气滋阴的中药使用频次和频率最高。
  结论:中医药在治疗心房颤动时,多以益气滋阴、养血安神的治法为主,为我们研究炙甘草汤这一益气滋阴、养血复脉的方剂治疗心房颤动提供了理论基础。
  第二部分炙甘草汤作用于心房肌细胞离子通道的实验研究
  目的:观察炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙通道(ICa-L)、钠通道(INa)的电流、I-V曲线及其动力学特征的影响,探讨其治疗快速型心律失常的作用机制。
  方法:24只SPF级别大鼠(雌雄不拘)随机分为四组:炙甘草汤低剂量组(1.125g/ml)、中剂量组(2.25g/ml)、高剂量组(4.5g/ml)和对照组,每组各6只。三组药物组大鼠予以对应浓度炙甘草汤灌胃,对照组予以等体积生理盐水灌胃,连续灌胃7天,末次给药1.5h后进行麻醉、抗凝处理后手术开胸迅速取出心脏,在langendorff灌流装置下行主动脉逆行酶解法急性分离出各组大鼠心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同组别大鼠心房肌细胞ICa-L和INa的I-V曲线及其动力学特征。
  结果:(1)炙甘草汤对大鼠心房肌细胞ICa-L的影响:在全细胞膜片钳模式下设置ICa-L钳制方案引导出心房肌细胞ICa-L,结果显示炙甘草汤低剂量组、中剂量组、高剂量组的大鼠心房肌细胞ICa-L峰值电流大小与对照组(-11.57±2.67)pA/pF相比,分别下降为(-10.17±2.78)pA/pF(P<0.05)、(-6.97±2.45)pA/pF(P<0.01)、(-7.31±2.09)pA/pF(P<0.01),I-V曲线均发生上移。由于中剂量组与高剂量组ICa-L电流抑制程度相比无明显差异(P>0.05),选取中剂量组与对照组比较ICa-L通道动力学特性,发现两组心房肌细胞的激活曲线和半数激活电压比较无明显差异(P>0.05),但炙甘草汤中剂量组的心房肌细胞稳态失活曲线发生向右偏移,半数失活电压V1/2升高(P<0.05),失活后恢复曲线向下偏移,时间常数(τ)延长(P<0.01)。
  (2)炙甘草汤对大鼠心房肌细胞INa的影响:在完成ICa-L通道的记录后,改变钳制方案,对心房肌INa通道进行记录,结果显示炙甘草汤低计量、中剂量、高剂量组的大鼠心房肌细胞INa同样较对照组(-46.76±5.17)pA/pF相比下降至(-42.14±4.76)pA/pF(P<0.05)、(-36.52±1.76)pA/pF(P<0.01)、(-34.76±3.58)pA/pF(P<0.01),电流电压曲线均发生上移。选取炙甘草汤中剂量组与对照组心房肌细胞比较INa动力学特性,发现激活曲线和半数激活电压未发生显著改变(P>0.05),而失活曲线明显向右偏移,半数失活电压升高(P<0.01),失活恢复曲线向下偏移,时间常数(τ)延长(P<0.01)。
  结论:1.125g/ml、2.25g/ml、4.5g/ml的炙甘草汤对大鼠心房肌细胞ICa-L、INa通道的电流均具有抑制作用,抑制效果呈一定的浓度依赖性。选取2.25g/ml的炙甘草汤与对照组比较动力学特性时,发现它能够在不影响峰电位、翻转电位、激活曲线的前提下,减慢ICa-L、INa通道的失活速度,延长失活后恢复时间,从而改变其动力学特性,使动作电位时程延长,最终达到减慢心率的作用,这可能也是炙甘草汤临床上治疗快速型房性心律失常的机制所在。
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