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目的
1.探讨体外培养短时间内获得高数量、高纯度的乳鼠雪旺细胞的实验方法，为后续Ad-BDNF转染雪旺细胞的实验研究提供种子细胞；
2.探讨体外培养下，Forskilin和BPE对体外培养的雪旺细胞的增殖的影响及其作用的最佳浓度；
方法
1.选用5d龄的Wistar大鼠10只，在无菌条件下解剖获取双侧坐骨神经，利用酶消化法联合组织块法分离培养获得雪旺细胞，牛脑垂体提取物(BPE)促进雪旺细胞的增殖，应用EGTA法和低浓度血清法纯化细胞。实验过程中定时观察记录雪旺细胞的生长状况，绘制生长曲线。选择生长良好、纯度较高的雪旺细胞进行传代。应用免疫细胞化学染色的方法鉴定雪旺细胞，无菌条件下采用流式细胞分选术鉴定雪旺细胞纯度，并以台盼蓝染色计算分选出阳性细胞的活细胞率。将阳性细胞进行再培养，观察细胞生长状况。
2.为探讨Forskilin和BPE对体外培养的雪旺细胞的增殖的影响及其作用的最佳浓度，将第三代雪旺细胞分组，包括单纯Forsklin作用组：每组分别加入Forskilin培养液的浓度依次是0μmol/l、10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l；单纯BPE作用组：0μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l；Forskilin和BPE联合作用组等。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖反应，绘制生长曲线，比较Forskilin和BPE对细胞的促增殖作用；应用免疫细胞化学染色，计数培养7d后阳性细胞的纯度，并进行统计学分析。
结果
1.乳鼠坐骨神经经酶消化法+组织块联合培养，3d后倒置显微镜下见组织块周围爬出大量雪旺细胞和成纤维细胞，两种细胞分层生长，雪旺细胞生长于成纤维细胞的上层，之后每2-3天换一次液，培养液中加入BPE(牛脑垂体提取物)促增殖，10d即可长满瓶底壁；以EGTA法+低浓度血清法纯化雪旺细胞，经流式细胞术鉴定雪旺细胞的纯度可达90%以上。经流式细胞分选术分选的雪旺细胞的受损伤大、活性差，无法实现无菌操作，难以进行后续的细胞培养。
2.BPE对雪旺细胞的促增殖作用较Forsklin显著，但随着BPE浓度的增高，细胞的纯度有所下降；Forsklin对细胞的促增殖作用与空白对照组相比无明显差异，Forsklin和BPE联合应用的促增殖作用并不较BPE单独应用作用明显，50μg/lBPE单独应用可以促进雪旺细胞的增殖且不显著降低雪旺细胞的纯度。
结论
1.酶消化法联合组织块法培养乳鼠雪旺细胞可短时间内获得大量活性好的雪旺细胞，EGTA法联合低浓度血清法是一种经济有效的纯化雪旺细胞的方法，值得广泛推广应用。流式细胞分选术可应用于雪旺细胞的鉴定，经流式细胞术分选后细胞的损伤大、活性差，不利于细胞继续培养。
2.BPE对雪旺细胞的促增殖作用较Forsklin显著，50μg/lBPE单独应用可以促进雪旺细胞的增殖且不显著降低雪旺细胞的纯度。
1.探讨体外培养短时间内获得高数量、高纯度的乳鼠雪旺细胞的实验方法，为后续Ad-BDNF转染雪旺细胞的实验研究提供种子细胞；
2.探讨体外培养下，Forskilin和BPE对体外培养的雪旺细胞的增殖的影响及其作用的最佳浓度；
方法
1.选用5d龄的Wistar大鼠10只，在无菌条件下解剖获取双侧坐骨神经，利用酶消化法联合组织块法分离培养获得雪旺细胞，牛脑垂体提取物(BPE)促进雪旺细胞的增殖，应用EGTA法和低浓度血清法纯化细胞。实验过程中定时观察记录雪旺细胞的生长状况，绘制生长曲线。选择生长良好、纯度较高的雪旺细胞进行传代。应用免疫细胞化学染色的方法鉴定雪旺细胞，无菌条件下采用流式细胞分选术鉴定雪旺细胞纯度，并以台盼蓝染色计算分选出阳性细胞的活细胞率。将阳性细胞进行再培养，观察细胞生长状况。
2.为探讨Forskilin和BPE对体外培养的雪旺细胞的增殖的影响及其作用的最佳浓度，将第三代雪旺细胞分组，包括单纯Forsklin作用组：每组分别加入Forskilin培养液的浓度依次是0μmol/l、10μmol/l、50μmol/l、100μmol/l；单纯BPE作用组：0μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l；Forskilin和BPE联合作用组等。应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖反应，绘制生长曲线，比较Forskilin和BPE对细胞的促增殖作用；应用免疫细胞化学染色，计数培养7d后阳性细胞的纯度，并进行统计学分析。
结果
1.乳鼠坐骨神经经酶消化法+组织块联合培养，3d后倒置显微镜下见组织块周围爬出大量雪旺细胞和成纤维细胞，两种细胞分层生长，雪旺细胞生长于成纤维细胞的上层，之后每2-3天换一次液，培养液中加入BPE(牛脑垂体提取物)促增殖，10d即可长满瓶底壁；以EGTA法+低浓度血清法纯化雪旺细胞，经流式细胞术鉴定雪旺细胞的纯度可达90%以上。经流式细胞分选术分选的雪旺细胞的受损伤大、活性差，无法实现无菌操作，难以进行后续的细胞培养。
2.BPE对雪旺细胞的促增殖作用较Forsklin显著，但随着BPE浓度的增高，细胞的纯度有所下降；Forsklin对细胞的促增殖作用与空白对照组相比无明显差异，Forsklin和BPE联合应用的促增殖作用并不较BPE单独应用作用明显，50μg/lBPE单独应用可以促进雪旺细胞的增殖且不显著降低雪旺细胞的纯度。
结论
1.酶消化法联合组织块法培养乳鼠雪旺细胞可短时间内获得大量活性好的雪旺细胞，EGTA法联合低浓度血清法是一种经济有效的纯化雪旺细胞的方法，值得广泛推广应用。流式细胞分选术可应用于雪旺细胞的鉴定，经流式细胞术分选后细胞的损伤大、活性差，不利于细胞继续培养。
2.BPE对雪旺细胞的促增殖作用较Forsklin显著，50μg/lBPE单独应用可以促进雪旺细胞的增殖且不显著降低雪旺细胞的纯度。