论文部分内容阅读
肠粘膜屏障损伤是脑出后常见的并发症，也是引起患者预后困难、死亡率增加和神经功能损伤加重的原因之一。醒脑静注射液既往的研究主要是其对脑缺血所致的神经功能损伤和脑水肿的影响，但有关醒脑静注射液对脑出血后的神经功能和肠粘膜屏障的研究未见报道。
目的：
研究醒脑静注射液对脑出血后神经功能和肠粘膜屏障的影响。
方法：
1.体内实验
将雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、脑出血组、阳性药对照组（0.45mg/kg七叶皂苷钠）、醒脑静注射液（2.5、5、10mL/kg）组。小鼠右侧基底节注射Ⅶ型胶原酶溶液制备脑出血小鼠模型，假手术组右侧基底节注射无菌PBS溶液。术后0.5、24、48h按照分组尾静脉注射给药。使用神经功能评分Garcia test检测小鼠神经功能；干湿重法检测小鼠脑组织含水量；苏木精-伊红（H&E）染色法观察肠组织病理学变化；ELISA法检测小鼠血和脑组织中内毒素，以及炎症因子TNF-α和IL-1β。
2.体外实验
将1×105/mL Caco-2细胞连续培养8天至完全分化，然后随机分为对照组、模型组、醒脑静注射液（1.25、2.5、5μL/mL）组（根据预实验和临床用药剂量确定）。应用LPS诱导Caco-2细胞建立体外损伤模型，模拟脑出血后的肠粘膜屏障损伤。应用上皮细胞跨膜电阻（TEER）评价Caco-2细胞肠粘膜屏障完整性，异硫氰酸荧光素葡聚糖（FITC-D4）法评价Caco-2细胞肠粘膜屏障通透性，ELISA法检测Caco-2细胞分泌的炎症因子TNF-α，Western Blot法检测醒脑静注射液对Caco-2细胞间的紧密连接蛋白occludin，以及沉默信息调节因子1（SITR1）表达水平的影响。
将1×105/mL Caco-2细胞连续培养8天至完全分化，随机分为对照组、LPS组、SIRT1抑制剂组、醒脑静注射液5μL/mL组、SIRT1抑制剂和醒脑静注射液5μL/mL联用组，使用EX527作为SIRT1抑制剂，Western Blot法检测Caco-2细胞中occludin蛋白表达水平。
结果：
1.注射醒脑静后，脑出血小鼠Garcia test评分升高，脑水肿减轻；肠组织损伤程度下降；血中和脑组织中内毒素含量降低；血和脑组织中炎症因子TNF-α和IL-1β含量降低。2.醒脑静注射液抑制LPS所致Caco-2细胞TEER降低和FITC-D4flux升高；抑制LPS所致Caco-2细胞炎症因子TNF-α含量增加，且具有剂量依赖性；上调Caco-2细胞紧密连接蛋白occludin，以及SIRT1蛋白。预先加入SIRT1抑制剂干预后，能够逆转醒脑静注射液对occludin蛋白的上调作用。
结论：
醒脑静注射液可以改善脑出血后的神经功能障碍，保护肠道屏障。醒脑静注射液可能是通过直接减轻脑出血所致的肠粘膜屏障损伤，进而减轻脑损伤。其作用机制可能与醒脑静注射液保护肠粘膜屏障的完整性和通透性，抑制炎症反应，通过SIRT1上调紧密连接蛋白occludin有关。
创新点：
首次研究醒脑静注射液对脑出血后肠粘膜屏障的直接影响，提出醒脑静注射液可能是通过作用于SIRT1上调紧密连接蛋白occludin，抑制肠粘膜屏障通透性升高，进而间接改善脑出血后的神经功能障碍。
目的：
研究醒脑静注射液对脑出血后神经功能和肠粘膜屏障的影响。
方法：
1.体内实验
将雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、脑出血组、阳性药对照组（0.45mg/kg七叶皂苷钠）、醒脑静注射液（2.5、5、10mL/kg）组。小鼠右侧基底节注射Ⅶ型胶原酶溶液制备脑出血小鼠模型，假手术组右侧基底节注射无菌PBS溶液。术后0.5、24、48h按照分组尾静脉注射给药。使用神经功能评分Garcia test检测小鼠神经功能；干湿重法检测小鼠脑组织含水量；苏木精-伊红（H&E）染色法观察肠组织病理学变化；ELISA法检测小鼠血和脑组织中内毒素，以及炎症因子TNF-α和IL-1β。
2.体外实验
将1×105/mL Caco-2细胞连续培养8天至完全分化，然后随机分为对照组、模型组、醒脑静注射液（1.25、2.5、5μL/mL）组（根据预实验和临床用药剂量确定）。应用LPS诱导Caco-2细胞建立体外损伤模型，模拟脑出血后的肠粘膜屏障损伤。应用上皮细胞跨膜电阻（TEER）评价Caco-2细胞肠粘膜屏障完整性，异硫氰酸荧光素葡聚糖（FITC-D4）法评价Caco-2细胞肠粘膜屏障通透性，ELISA法检测Caco-2细胞分泌的炎症因子TNF-α，Western Blot法检测醒脑静注射液对Caco-2细胞间的紧密连接蛋白occludin，以及沉默信息调节因子1（SITR1）表达水平的影响。
将1×105/mL Caco-2细胞连续培养8天至完全分化，随机分为对照组、LPS组、SIRT1抑制剂组、醒脑静注射液5μL/mL组、SIRT1抑制剂和醒脑静注射液5μL/mL联用组，使用EX527作为SIRT1抑制剂，Western Blot法检测Caco-2细胞中occludin蛋白表达水平。
结果：
1.注射醒脑静后，脑出血小鼠Garcia test评分升高，脑水肿减轻；肠组织损伤程度下降；血中和脑组织中内毒素含量降低；血和脑组织中炎症因子TNF-α和IL-1β含量降低。2.醒脑静注射液抑制LPS所致Caco-2细胞TEER降低和FITC-D4flux升高；抑制LPS所致Caco-2细胞炎症因子TNF-α含量增加，且具有剂量依赖性；上调Caco-2细胞紧密连接蛋白occludin，以及SIRT1蛋白。预先加入SIRT1抑制剂干预后，能够逆转醒脑静注射液对occludin蛋白的上调作用。
结论：
醒脑静注射液可以改善脑出血后的神经功能障碍，保护肠道屏障。醒脑静注射液可能是通过直接减轻脑出血所致的肠粘膜屏障损伤，进而减轻脑损伤。其作用机制可能与醒脑静注射液保护肠粘膜屏障的完整性和通透性，抑制炎症反应，通过SIRT1上调紧密连接蛋白occludin有关。
创新点：
首次研究醒脑静注射液对脑出血后肠粘膜屏障的直接影响，提出醒脑静注射液可能是通过作用于SIRT1上调紧密连接蛋白occludin，抑制肠粘膜屏障通透性升高，进而间接改善脑出血后的神经功能障碍。