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南葶苈子为十字花科植物葶苈Descurainiasophia(L.)Webb,exPrantl.的干燥种子，主要分布在我国东北、华北、华东的江苏和浙江，西北、西南的四川以及西藏。其具有破坚逐邪，泻肺行水，祛痰平喘之功效。南葶苈子中的主要活性物质为黄酮苷类成分，其中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷（QGG）含量最高，目前在葶苈子药材和含有葶苈子的中药复方中常用作控制质量的指标成分，用于鉴别和含量测定，但目前没有有效的制备QGG对照品的方法，且由于对照品匮乏，使得围绕QGG的研究很少。通过实验分析和条件优化，本课题建立了一套完整高效的分离纯化南葶苈子中QGG的方法，过程中选用可多次再生重复利用的CM-琼脂糖凝胶FF（CM-Sepharose FF）用于纯化QGG，可把提取物中QGG含量从17.67%提高到55.40%，使QGG含量提高了三倍，再结合制备型液相分离纯化得到的QGG纯度可达99.69%，经结构和纯度鉴定，可用作对照品以供后续研究。其研究内容和结果如下：
1、本课题对南葶苈子市售商品进行调查，对比不同产地的南葶苈子中QGG含量，比较后确定最佳产地为安徽阜阳。采用正交实验法对水浴加热提取条件进行优化，考虑到工业生产时节能省时的要求，调整最佳提取条件为80℃水浴加热1.5h，重复提取三次，料液比分别为1：20、1：15、1：10，滤液浓缩喷雾干燥。HPLC测定干燥样品中QGG含量为1.06%。
2、干燥样品进一步醇沉除杂，正交实验法确定最佳醇沉条件为：60%乙醇超声20min后静置沉淀24h，其中料液比为1：6，滤液浓缩冻干后得提取物中QGG的含量为1.65%。
3、以吸附率和解吸附率为指标，比较不同极性大孔树脂静态吸附与解吸附效果，确定LX-68G型大孔树脂对QGG有很好的吸附作用。单一变量法确定LX-68G型大孔树脂的最佳洗脱条件为：用pH4.5的酸水超声溶解醇沉冻干样品，配制成浓度为0.6g/mL的溶液，以150mL/min的流速上样，静置60min，采用乙醇梯度洗脱，洗脱流速为180mL/min，收集20%乙醇洗脱液浓缩冻干，经HPLC检测冻干样品中QGG含量为17.67%。
4、选用CM-Sepharose FF对冻干样品中QGG进行纯化。基于甲醇的高溶解性和低粘度，以甲醇为洗脱溶剂，单一变量法确定上样量为0.4g，30%甲醇以20mL/min的流速洗脱，收集含有QGG部分的洗脱液，浓缩冻干后经HPLC测定提取物中QGG含量为55.40%。采用制备型液相对其进一步纯化，最终确定色谱条件为：检测波长254nm，30%甲醇以4mL/min的流速洗脱，上样量为60.0mg，纯化得QGG单体化合物。
5、经1HNMR、13CNMR和紫外分光光度法对所得化合物结构鉴定，最终确定纯化物质结构为QGG，并测得其中炽灼残渣含量为0.031%，水分为0.3%，经HPLC面积归一化法测定QGG峰面积比为99.69%，薄层色谱法确定所纯化物质为单体化合物，且QGG纯度为99.69%，达到了作为对照品的技术要求。
本课题建立了一套新颖高效的对照品槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的制备工艺，选用CM-Sepharose FF纯化后可使提取物中QGG含量从17.67%提高为55.40%，后续结合制备型液相最终得到QGG含量为99.69%，经结构和纯度鉴定可用作对照品进行相关研究。该工艺步骤简单、获得QGG单体化合物纯度高，为后续QGG的相关研究奠定基础。
1、本课题对南葶苈子市售商品进行调查，对比不同产地的南葶苈子中QGG含量，比较后确定最佳产地为安徽阜阳。采用正交实验法对水浴加热提取条件进行优化，考虑到工业生产时节能省时的要求，调整最佳提取条件为80℃水浴加热1.5h，重复提取三次，料液比分别为1：20、1：15、1：10，滤液浓缩喷雾干燥。HPLC测定干燥样品中QGG含量为1.06%。
2、干燥样品进一步醇沉除杂，正交实验法确定最佳醇沉条件为：60%乙醇超声20min后静置沉淀24h，其中料液比为1：6，滤液浓缩冻干后得提取物中QGG的含量为1.65%。
3、以吸附率和解吸附率为指标，比较不同极性大孔树脂静态吸附与解吸附效果，确定LX-68G型大孔树脂对QGG有很好的吸附作用。单一变量法确定LX-68G型大孔树脂的最佳洗脱条件为：用pH4.5的酸水超声溶解醇沉冻干样品，配制成浓度为0.6g/mL的溶液，以150mL/min的流速上样，静置60min，采用乙醇梯度洗脱，洗脱流速为180mL/min，收集20%乙醇洗脱液浓缩冻干，经HPLC检测冻干样品中QGG含量为17.67%。
4、选用CM-Sepharose FF对冻干样品中QGG进行纯化。基于甲醇的高溶解性和低粘度，以甲醇为洗脱溶剂，单一变量法确定上样量为0.4g，30%甲醇以20mL/min的流速洗脱，收集含有QGG部分的洗脱液，浓缩冻干后经HPLC测定提取物中QGG含量为55.40%。采用制备型液相对其进一步纯化，最终确定色谱条件为：检测波长254nm，30%甲醇以4mL/min的流速洗脱，上样量为60.0mg，纯化得QGG单体化合物。
5、经1HNMR、13CNMR和紫外分光光度法对所得化合物结构鉴定，最终确定纯化物质结构为QGG，并测得其中炽灼残渣含量为0.031%，水分为0.3%，经HPLC面积归一化法测定QGG峰面积比为99.69%，薄层色谱法确定所纯化物质为单体化合物，且QGG纯度为99.69%，达到了作为对照品的技术要求。
本课题建立了一套新颖高效的对照品槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的制备工艺，选用CM-Sepharose FF纯化后可使提取物中QGG含量从17.67%提高为55.40%，后续结合制备型液相最终得到QGG含量为99.69%，经结构和纯度鉴定可用作对照品进行相关研究。该工艺步骤简单、获得QGG单体化合物纯度高，为后续QGG的相关研究奠定基础。