Ⅰ标记抗胃泌素释放肽前体单克隆抗体D-D的实验研究

• 作 者: 陈传新
• 机 构: 苏州大学
• 出 处: 苏州大学
• 发表日期: 2009年11期
• 关键词: 单克隆抗体

目的：
了解胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)在不同肿瘤细胞株及其组织中的表达率、表达位置，研究131I标记抗胃泌素释放肽前体(pro-gastrin-releasing peptide(31-98)，ProGRP(31-98))单克隆抗体D-D3的方法及标记物131I-D-D3的稳定性，探讨131I-D-D3对特定肿瘤放射性免疫显像的可行性。
研究方法：
1.利用流式细胞仪检测小细胞肺癌NCI-H446、胃癌SGC-7901、乳腺癌MCF-7、胰腺癌Patu8988和肺腺癌A549细胞株中GRP的表达情况；通过免疫组化法检测小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌和肺腺癌组织中GRP的表达情况。
2.采用氯胺-T法131I标记D-D3，通过纸层析法检测其标记率及放化纯，将131I-D-D3置于37℃水浴箱温育及与鼠血清混合，然后在不同时间点测定放化纯以了解其稳定性。
3.自昆明小鼠尾静脉注射131I-D-D3后，不同时间点剪断颈动脉处死小鼠，同时取血液及各主要脏器组织标本，计算各时间点的每克组织注射百分剂量率(％ID/g)；同样方法，计算荷人小细胞肺癌裸鼠模型血液、肿瘤及各主要脏器组织不同时间点的每克组织注射百分剂量率(％ID/g)和肿瘤/非肿瘤(T/NT)比值。
4.分别建立荷人小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌和肺腺癌裸鼠模型并进行131I-D-D3显像，观察各不同病理类型移植瘤的显像情况，利用ROI技术在显像图上勾画移植瘤轮廓并计算瘤体与对侧相同部位的T/B比值。
研究结果：
1.GRP在NCI-H446、SGC-7901、MCF-7、Patu8988及A549细胞的胞内表达，表达率分别为89％、78％、65％、40％、16％；免疫组化检测结果显示，小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌组织切片的细胞胞浆内均有二氨基联苯胺(DAB)染色阳性颗粒分布，其中小细胞肺癌和胃癌组织的阳性率均大于80％，乳腺癌和胰腺癌的阳性率低于50％，而肺腺癌组织未见明显染色阳性细胞。
2.131I-D-D3标记率为86％，放化纯为99.27％，放射性比活度为2.2MBq/μg；在37℃放置12h后131I-D-D3放化纯高达97.6％，48h仍达到88.3％；与鼠血清充分混合并在室温下放置24小时后131I-D-D3放化纯仍可达64％。131I-D-D3在正常昆明小鼠和荷瘤裸鼠体内主要通过肝脏、肾脏代谢；注射I31I-D-D3后48h荷小细胞肺癌移植瘤体的％ID/g显著高于其它脏器组织，72h时达到最高值，T/NT比值随时间延长而逐渐升高。
3.注射131I-D-D3后，荷人小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌裸鼠模型的移植瘤组织均见不同程度的放射性浓聚；荷人肺腺癌裸鼠模型的移植瘤组织未见明显放射性浓聚。
结论：
1.以D-D3作为一抗可以检测不同肿瘤细胞的GRP表达情况，NCI-H446、SGC-7901和MCF-7细胞的GRP表达率较高，而Patu8988和A549细胞的细胞的GRP表达率较低；131I-D-D3的标记率及放化纯高，在体外有较好的稳定性。
2.131I-D-D3在GRP表达率高的移植瘤部位聚集量明显高于GRP表达率低的移植瘤，利用131I-D-D3放射免疫显像可以鉴别小细胞肺癌与肺腺癌。
3.131I-D-D3有望成为GRP高表达的恶性肿瘤放射免疫显像及放射免疫治疗药物，值得进一步深入的研究。