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第一部分CD200在慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为中的作用
目的：大量研究表明，神经炎症是抑郁症发生的一个关键机制。CD200(Cluster of differentiation 200，CD200)及其受体CD200R1是其中的一个免疫调节系统。CD200是表达在神经元细胞膜上的糖蛋白，主要通过表达在小胶质细胞上的受体CD200R1发挥免疫抑制作用。CD200与CD200R1间的相互作用调节小胶质细胞处于静息状态，一旦这种相互作用被破坏，小胶质细胞就会被激活。众多研究已经证明，CD200与阿尔茨海默病(Alzheimer’disease，AD)、衰老或者多发性硬化等多种炎性疾病的发病机制密切相关。近期研究也表明，小胶质细胞的激活可能与抑郁症的发病有关。因此本部分通过慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress，CSDS)模型诱导小鼠抑郁样行为，进而探讨CD200在抑郁症发病中的作用及机制。
方法：首先通过10d的CSDS建立小鼠抑郁模型，应用糖水偏好实验(sucrose preference test，SPT)、社会接触(social interaction，SI)和悬尾实验(tail suspension test， TST)等行为学检测小鼠的抑郁样行为。然后利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR)方法检测不同脑区CD200和CD200R1mRNA的相对表达量，筛选出变化最明显的脑区，再结合westernblotting方法检测小鼠海马齿状回(dentate gyrus，DG)CD200和CD200R1的蛋白表达变化。应用慢病毒(lentivirus，LV)基因干预沉默CD200和脑区微量给予CD200Fc两种方法检测CD200在慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为中的作用。
结果：(1)经过CSDS慢性应激后，应激敏感小鼠表现出明显的抑郁样行为，表现为社交逃避行为显著增加，社会接触比值降低(Control：1.43±0.048，Susceptible：0.61±0.050，P<0.001)、糖水偏好显著下降(Control：90.00±0.96%，Susceptible：68.22±2.76%，P<0.001)、悬尾实验中小鼠的不动时间明显延长(Control：102.60±7.87s，Susceptible：132.50±8.92s，P<0.05)；而应激抵抗小鼠与对照组相比均无显著差异。(2)与对照组比较(1.00±0.075)，应激敏感小鼠外周血中CD200mRNA相对表达量显著降低(0.58±0.081，P<0.001)，CD200R1无显著变化；海马全脑区和DG脑区CD200mRNA相对表达也显著下调(Hip，Control：1.00±0.11，CSDS：0.76±0.030，P<0.05；DG，Control：1.00±0.028，CSDS：0.77±0.039，P<0.001)，在内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex，mPFC)脑区，CD200和CD200R1mRNA表达均无显著差异。(3)Westernblotting检测发现，应激敏感小鼠DG脑区的CD200蛋白表达显著降低(Control：1.00±0.038，Susceptible：0.81±0.074，Resilient：0.99±0.062，P<0.05)，而CD200R1的表达水平无显著差异。(4)DG脑区给予CD200Fc明显改善应激诱导的抑郁样行为，表现为小鼠的社交逃避行为显著改善(Ctrl+ACSF：1.07±0.12s，Ctrl+CD200Fc：0.96±0.090s，CSDS+ACSF：0.62±0.11s，CSDS+CD200Fc：1.37±0.29s，P=0.0021vsCSDS+ACSF)，悬尾和强迫游泳实验中小鼠的不动时间均显著降低(TST：Ctrl+ACSF：131.60±8.09s，Ctrl+CD200Fc：138.30±9.45s，CSDS+ACSF：162.30±13.43s，CSDS+CD200Fc：118.20±12.87s，P=0.0083vsCSDS+ACSF；FST：Ctrl+ACSF：55.25±14.80s，Ctrl+CD200Fc：72.44±18.54s，CSDS+ACSF；122.60±13.36s，CSDS+CD200Fc：69.22±12.93s，P=0.017vsCSDS+ACSF)。(5)小鼠DG脑区分别注射LV-GFP(对照病毒)和LV-siCD200(沉默病毒)后，再经历阈下应激，LV-siCD200小鼠的应激敏感性显著增加，表现为社会接触实验中，小鼠在Target阶段社会接触时间显著减少(LV-GFP-Stress：55.98±1.42s，LV-siCD200-Stress：37.21±1.27s，P<0.001)；悬尾实验中，小鼠的不动时间显著增加(LV-GFP-Stress：122.60±14.33s，LV-siCD200-Stress：181.60±12.68s，P=0.0044)。
结论：应激敏感小鼠DG脑区CD200蛋白和mRNA水平均显著下调；DG脑区给予CD200Fc改善小鼠抑郁样行为；下调DG脑区的CD200增加小鼠对应激易感性。
第二部分CD200改善慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为的机制
目的：很多研究已经证明慢性应激导致小鼠海马DG区神经发生减少，小胶质细胞激活。给予CD200Fc促进DG脑区神经发生，也能够通过受体CD200R1调节小胶质细胞的活性，但是CD200是否通过促进神经发生，抑制小胶质细胞的激活发挥抗抑郁作用还不清楚。因此，本部分内容研究CD200在CSDS诱导的神经发生抑制和小胶质细胞激活中的作用。
方法：通过病毒注射方法特异性沉默DG脑区的CD200R1，再给予CD200Fc，通过社会接触、悬尾和强迫游泳实验检测小鼠的抑郁样行为。通过免疫荧光检测慢性应激对神经发生和小胶质细胞激活的作用，再给予CD200Fc检测对神经发生和小胶质细胞激活的改善情况。最后检测经典抗抑郁药物氟西汀对慢性应激小鼠DG脑区CD200蛋白表达的影响。
结果：(1)病毒沉默DG脑区CD200R1后，再给予CD200Fc不能逆转CSDS诱导的抑郁样行为：与对照组CSDS-LV-GFP+CD200Fc相比，沉默CD200R1小鼠给予CD200Fc后社交逃避行为无改善，表现为社会接触比值下降(Ctrl-LV-GFP+CD200Fc：1.01±0.12，Ctrl-LV-siCD200R1+CD200Fc：0.87±0.058，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：1.23±0.24，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：0.67±0.12，P<0.05，CSDS-LV-siCD200R1+CD200FcvsCSDS-LV-GFP+CD200Fc)，小鼠的悬尾和强迫游泳实验的不动时间仍延长(TST，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：97.75±11.54s，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：156.50±10.14s，P<0.01；FST，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：61.38±15.71s，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：106.90±15.70s，P<0.05)。(2)慢性应激导致小鼠海马DG区神经发生能力下降，表现为正在增殖的细胞和未成熟神经元数目显著降低，BrdU+细胞由1491.00±103.5减少至861.30±63.07(P<0.01)；BrdU+DCX+细胞由619.3±52.95减少至358.10±42.00(P<0.05)；侧脑室给予CD200Fc后显著增加两者的数量，BrdU+由861.30±63.07增加至2743.00±343.3(P<0.001)；BrdU+DCX+由358.10±42.00升高至1230.00±221.10(P<0.001)。(3)慢性应激导致小鼠海马脑区小胶质细胞激活，表现为小胶质细胞数目增加、胞体变大、分支变短；给予CD200Fc后，小胶质细胞数量恢复正常水平、胞体有所缩小、分支略微变长，激活的小胶质细胞占总细胞的百分比由70.70±5.88%显著降低至35.30±4.49%(P=0.0014，CSDS+CD200FcvsCSDS+ACSF)。(4)抑郁模型小鼠连续14d给予氟西汀明显改善CSDS诱导的抑郁样行为，表现为社会接触比值显著上调(Ctrl+Sal：1.32±0.15，Ctrl+Flu：1.15±0.14，CSDS+Sal：0.44±0.06，CSDS+Flu：1.37±0.15，P<0.001，CSDS+FluvsCSDS+Sal)，悬尾实验中小鼠的不动时间明显降低(Ctrl+Sal：122.40±19.83s，Ctrl+Flu：139.80±18.36s，CSDS+Sal：184.00±11.78s，CSDS+Flu：58.76±11.77s，P<0.001，CSDS+FluvsCSDS+Sal)。同时，氟西汀治疗后显著增加DG脑区CD200的蛋白表达(Ctrl+Sal：1.01±0.03，Ctrl+Flu：0.96±0.03，CSDS+Sal：0.89±0.02，CSDS+Flu：1.10±0.05，P<0.01，CSDS+FluvsCSDS+Sal)。
结论：CD200Fc通过CD200R1发挥抗抑郁作用，促进应激小鼠DG区神经发生，抑制CSDS引起的小胶质细胞激活。
目的：大量研究表明，神经炎症是抑郁症发生的一个关键机制。CD200(Cluster of differentiation 200，CD200)及其受体CD200R1是其中的一个免疫调节系统。CD200是表达在神经元细胞膜上的糖蛋白，主要通过表达在小胶质细胞上的受体CD200R1发挥免疫抑制作用。CD200与CD200R1间的相互作用调节小胶质细胞处于静息状态，一旦这种相互作用被破坏，小胶质细胞就会被激活。众多研究已经证明，CD200与阿尔茨海默病(Alzheimer’disease，AD)、衰老或者多发性硬化等多种炎性疾病的发病机制密切相关。近期研究也表明，小胶质细胞的激活可能与抑郁症的发病有关。因此本部分通过慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress，CSDS)模型诱导小鼠抑郁样行为，进而探讨CD200在抑郁症发病中的作用及机制。
方法：首先通过10d的CSDS建立小鼠抑郁模型，应用糖水偏好实验(sucrose preference test，SPT)、社会接触(social interaction，SI)和悬尾实验(tail suspension test， TST)等行为学检测小鼠的抑郁样行为。然后利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR)方法检测不同脑区CD200和CD200R1mRNA的相对表达量，筛选出变化最明显的脑区，再结合westernblotting方法检测小鼠海马齿状回(dentate gyrus，DG)CD200和CD200R1的蛋白表达变化。应用慢病毒(lentivirus，LV)基因干预沉默CD200和脑区微量给予CD200Fc两种方法检测CD200在慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为中的作用。
结果：(1)经过CSDS慢性应激后，应激敏感小鼠表现出明显的抑郁样行为，表现为社交逃避行为显著增加，社会接触比值降低(Control：1.43±0.048，Susceptible：0.61±0.050，P<0.001)、糖水偏好显著下降(Control：90.00±0.96%，Susceptible：68.22±2.76%，P<0.001)、悬尾实验中小鼠的不动时间明显延长(Control：102.60±7.87s，Susceptible：132.50±8.92s，P<0.05)；而应激抵抗小鼠与对照组相比均无显著差异。(2)与对照组比较(1.00±0.075)，应激敏感小鼠外周血中CD200mRNA相对表达量显著降低(0.58±0.081，P<0.001)，CD200R1无显著变化；海马全脑区和DG脑区CD200mRNA相对表达也显著下调(Hip，Control：1.00±0.11，CSDS：0.76±0.030，P<0.05；DG，Control：1.00±0.028，CSDS：0.77±0.039，P<0.001)，在内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex，mPFC)脑区，CD200和CD200R1mRNA表达均无显著差异。(3)Westernblotting检测发现，应激敏感小鼠DG脑区的CD200蛋白表达显著降低(Control：1.00±0.038，Susceptible：0.81±0.074，Resilient：0.99±0.062，P<0.05)，而CD200R1的表达水平无显著差异。(4)DG脑区给予CD200Fc明显改善应激诱导的抑郁样行为，表现为小鼠的社交逃避行为显著改善(Ctrl+ACSF：1.07±0.12s，Ctrl+CD200Fc：0.96±0.090s，CSDS+ACSF：0.62±0.11s，CSDS+CD200Fc：1.37±0.29s，P=0.0021vsCSDS+ACSF)，悬尾和强迫游泳实验中小鼠的不动时间均显著降低(TST：Ctrl+ACSF：131.60±8.09s，Ctrl+CD200Fc：138.30±9.45s，CSDS+ACSF：162.30±13.43s，CSDS+CD200Fc：118.20±12.87s，P=0.0083vsCSDS+ACSF；FST：Ctrl+ACSF：55.25±14.80s，Ctrl+CD200Fc：72.44±18.54s，CSDS+ACSF；122.60±13.36s，CSDS+CD200Fc：69.22±12.93s，P=0.017vsCSDS+ACSF)。(5)小鼠DG脑区分别注射LV-GFP(对照病毒)和LV-siCD200(沉默病毒)后，再经历阈下应激，LV-siCD200小鼠的应激敏感性显著增加，表现为社会接触实验中，小鼠在Target阶段社会接触时间显著减少(LV-GFP-Stress：55.98±1.42s，LV-siCD200-Stress：37.21±1.27s，P<0.001)；悬尾实验中，小鼠的不动时间显著增加(LV-GFP-Stress：122.60±14.33s，LV-siCD200-Stress：181.60±12.68s，P=0.0044)。
结论：应激敏感小鼠DG脑区CD200蛋白和mRNA水平均显著下调；DG脑区给予CD200Fc改善小鼠抑郁样行为；下调DG脑区的CD200增加小鼠对应激易感性。
第二部分CD200改善慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为的机制
目的：很多研究已经证明慢性应激导致小鼠海马DG区神经发生减少，小胶质细胞激活。给予CD200Fc促进DG脑区神经发生，也能够通过受体CD200R1调节小胶质细胞的活性，但是CD200是否通过促进神经发生，抑制小胶质细胞的激活发挥抗抑郁作用还不清楚。因此，本部分内容研究CD200在CSDS诱导的神经发生抑制和小胶质细胞激活中的作用。
方法：通过病毒注射方法特异性沉默DG脑区的CD200R1，再给予CD200Fc，通过社会接触、悬尾和强迫游泳实验检测小鼠的抑郁样行为。通过免疫荧光检测慢性应激对神经发生和小胶质细胞激活的作用，再给予CD200Fc检测对神经发生和小胶质细胞激活的改善情况。最后检测经典抗抑郁药物氟西汀对慢性应激小鼠DG脑区CD200蛋白表达的影响。
结果：(1)病毒沉默DG脑区CD200R1后，再给予CD200Fc不能逆转CSDS诱导的抑郁样行为：与对照组CSDS-LV-GFP+CD200Fc相比，沉默CD200R1小鼠给予CD200Fc后社交逃避行为无改善，表现为社会接触比值下降(Ctrl-LV-GFP+CD200Fc：1.01±0.12，Ctrl-LV-siCD200R1+CD200Fc：0.87±0.058，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：1.23±0.24，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：0.67±0.12，P<0.05，CSDS-LV-siCD200R1+CD200FcvsCSDS-LV-GFP+CD200Fc)，小鼠的悬尾和强迫游泳实验的不动时间仍延长(TST，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：97.75±11.54s，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：156.50±10.14s，P<0.01；FST，CSDS-LV-GFP+CD200Fc：61.38±15.71s，CSDS-LV-siCD200R1+CD200Fc：106.90±15.70s，P<0.05)。(2)慢性应激导致小鼠海马DG区神经发生能力下降，表现为正在增殖的细胞和未成熟神经元数目显著降低，BrdU+细胞由1491.00±103.5减少至861.30±63.07(P<0.01)；BrdU+DCX+细胞由619.3±52.95减少至358.10±42.00(P<0.05)；侧脑室给予CD200Fc后显著增加两者的数量，BrdU+由861.30±63.07增加至2743.00±343.3(P<0.001)；BrdU+DCX+由358.10±42.00升高至1230.00±221.10(P<0.001)。(3)慢性应激导致小鼠海马脑区小胶质细胞激活，表现为小胶质细胞数目增加、胞体变大、分支变短；给予CD200Fc后，小胶质细胞数量恢复正常水平、胞体有所缩小、分支略微变长，激活的小胶质细胞占总细胞的百分比由70.70±5.88%显著降低至35.30±4.49%(P=0.0014，CSDS+CD200FcvsCSDS+ACSF)。(4)抑郁模型小鼠连续14d给予氟西汀明显改善CSDS诱导的抑郁样行为，表现为社会接触比值显著上调(Ctrl+Sal：1.32±0.15，Ctrl+Flu：1.15±0.14，CSDS+Sal：0.44±0.06，CSDS+Flu：1.37±0.15，P<0.001，CSDS+FluvsCSDS+Sal)，悬尾实验中小鼠的不动时间明显降低(Ctrl+Sal：122.40±19.83s，Ctrl+Flu：139.80±18.36s，CSDS+Sal：184.00±11.78s，CSDS+Flu：58.76±11.77s，P<0.001，CSDS+FluvsCSDS+Sal)。同时，氟西汀治疗后显著增加DG脑区CD200的蛋白表达(Ctrl+Sal：1.01±0.03，Ctrl+Flu：0.96±0.03，CSDS+Sal：0.89±0.02，CSDS+Flu：1.10±0.05，P<0.01，CSDS+FluvsCSDS+Sal)。
结论：CD200Fc通过CD200R1发挥抗抑郁作用，促进应激小鼠DG区神经发生，抑制CSDS引起的小胶质细胞激活。