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[目的]
柴胡疏肝散作为中药传统方剂，在临床上已被证实具有良好的抗抑郁疗效。本研究旨在评价柴胡疏肝散水提物对慢性不可预见性应激(CUMS)所致抑郁大鼠模型的治疗效果，检测柴胡疏肝散干预条件下大鼠体内色氨酸途径的代谢变化，并基于色氨酸(Trp)-犬尿氨酸(KYN)途径的关键代谢酶吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)与肝脏组织中色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)及其上游调控，探究柴胡疏肝散的抗抑郁机制。
[方法]
1.本实验选用32只SD雄性大鼠，按照体重和行为学实验结果将大鼠随机分为四组：正常组(Control组)、模型组(CUMS组)、氟西汀组(CUMS+Flu组，20mg?Kg-1)、柴胡疏肝散组(CUMS+CSGS组,19.8g?Kg-1)。除Control组外，其余各组大鼠均按照造模程序进行28天的CUMS造模，后进行为期8周的灌胃给药，Control组与CUMS组给予纯水，其余两组给予相应剂量的药物。在给药过程中，除Control组外，其余三组同时给予造模刺激。在造模及给药前后，运用行为学实验(蔗糖偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验)评价柴胡疏肝散对抑郁模型大鼠的治疗作用。
2.运用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立测定大鼠血浆、海马和尿液三种基质中包括Trp及其代谢物在内的14种神经递质浓度的方法，并进行方法学验证。
3.应用建立的液质联用方法对四组大鼠血浆和海马组织中的Trp及其代谢物的水平进行测定。采用WesternBlot法与RT-PCR法分别测定大鼠海马组织中IDO与TDO的含量与mRNA表达水平。为进一步探究柴胡疏肝散对海马IDO酶的上游调控机制，运用ELISA法测定各组大鼠海马组织中炎症因子的浓度，运用WesternBlot技术测定海马组织中炎症因子上游调控蛋白TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1的含量。
[结果]
行为学实验结果表明，28天CUMS造模程序后，与Control组相比，其余三组大鼠表现出运动能力降低、快感缺乏、自主活动显著减少(P<0.05)。柴胡疏肝散给药8周后，抑郁状态明显改善，旷场运动总距离和蔗糖偏好指数显著增加，强迫游泳不动时间显著减少，差异具有统计学意义(P<0.05)。运用液质联用测定大鼠体内色氨酸及其代谢物的浓度结果表明，CUMS大鼠海马与血浆组织中色氨酸与5-羟色胺含量显著降低，喹啉酸(QUIN)浓度显著升高，KYN与Trp比例显著升高(P<0.05)。柴胡疏肝散与氟西汀给药后，海马与血浆中Trp与5-HT含量显著升高，KYN与Trp比例降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。
对于大鼠海马IDO酶及其上游调控的研究结果表明，与正常组相比，CUMS大鼠海马组织中IDO酶的含量与mRNA表达水平显著升高，炎症因子白介素-6、白介素-1β水平显著升高，TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1蛋白含量显著增加，差异均有统计学意义(P<0.05)；柴胡疏肝散与氟西汀给药后，能够显著降低IDO酶的含量与mRNA表达水平，降低炎症因子浓度，TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1蛋白含量显著降低(P<0.05)。对于大鼠肝脏组织中TDO酶及其上游调控的研究结果表明，与正常组相比，CUMS大鼠肝脏组织中TDO的含量与mRNA表达水平显著升高；柴胡疏肝散能够显著降低TDO酶的含量与mRNA表达水平。
[结论]
柴胡疏肝散能够显著改善CUMS引起的大鼠抑郁状态，其机制可能是一方面通过抑制TLR-4与P2X7R调控途径，降低大鼠海马组织中的炎症因子浓度，进一步抑制海马组织中Trp-KYN途径主要代谢酶IDO酶的含量与表达的水平；另一方面通过抑制肝脏组织中TDO的含量和表达，从而发挥中枢与外周多靶点的抗抑郁作用。
柴胡疏肝散作为中药传统方剂，在临床上已被证实具有良好的抗抑郁疗效。本研究旨在评价柴胡疏肝散水提物对慢性不可预见性应激(CUMS)所致抑郁大鼠模型的治疗效果，检测柴胡疏肝散干预条件下大鼠体内色氨酸途径的代谢变化，并基于色氨酸(Trp)-犬尿氨酸(KYN)途径的关键代谢酶吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)与肝脏组织中色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)及其上游调控，探究柴胡疏肝散的抗抑郁机制。
[方法]
1.本实验选用32只SD雄性大鼠，按照体重和行为学实验结果将大鼠随机分为四组：正常组(Control组)、模型组(CUMS组)、氟西汀组(CUMS+Flu组，20mg?Kg-1)、柴胡疏肝散组(CUMS+CSGS组,19.8g?Kg-1)。除Control组外，其余各组大鼠均按照造模程序进行28天的CUMS造模，后进行为期8周的灌胃给药，Control组与CUMS组给予纯水，其余两组给予相应剂量的药物。在给药过程中，除Control组外，其余三组同时给予造模刺激。在造模及给药前后，运用行为学实验(蔗糖偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验)评价柴胡疏肝散对抑郁模型大鼠的治疗作用。
2.运用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立测定大鼠血浆、海马和尿液三种基质中包括Trp及其代谢物在内的14种神经递质浓度的方法，并进行方法学验证。
3.应用建立的液质联用方法对四组大鼠血浆和海马组织中的Trp及其代谢物的水平进行测定。采用WesternBlot法与RT-PCR法分别测定大鼠海马组织中IDO与TDO的含量与mRNA表达水平。为进一步探究柴胡疏肝散对海马IDO酶的上游调控机制，运用ELISA法测定各组大鼠海马组织中炎症因子的浓度，运用WesternBlot技术测定海马组织中炎症因子上游调控蛋白TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1的含量。
[结果]
行为学实验结果表明，28天CUMS造模程序后，与Control组相比，其余三组大鼠表现出运动能力降低、快感缺乏、自主活动显著减少(P<0.05)。柴胡疏肝散给药8周后，抑郁状态明显改善，旷场运动总距离和蔗糖偏好指数显著增加，强迫游泳不动时间显著减少，差异具有统计学意义(P<0.05)。运用液质联用测定大鼠体内色氨酸及其代谢物的浓度结果表明，CUMS大鼠海马与血浆组织中色氨酸与5-羟色胺含量显著降低，喹啉酸(QUIN)浓度显著升高，KYN与Trp比例显著升高(P<0.05)。柴胡疏肝散与氟西汀给药后，海马与血浆中Trp与5-HT含量显著升高，KYN与Trp比例降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。
对于大鼠海马IDO酶及其上游调控的研究结果表明，与正常组相比，CUMS大鼠海马组织中IDO酶的含量与mRNA表达水平显著升高，炎症因子白介素-6、白介素-1β水平显著升高，TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1蛋白含量显著增加，差异均有统计学意义(P<0.05)；柴胡疏肝散与氟西汀给药后，能够显著降低IDO酶的含量与mRNA表达水平，降低炎症因子浓度，TLR-4、NF-κB、P2X7R、NLRP3、caspase-1蛋白含量显著降低(P<0.05)。对于大鼠肝脏组织中TDO酶及其上游调控的研究结果表明，与正常组相比，CUMS大鼠肝脏组织中TDO的含量与mRNA表达水平显著升高；柴胡疏肝散能够显著降低TDO酶的含量与mRNA表达水平。
[结论]
柴胡疏肝散能够显著改善CUMS引起的大鼠抑郁状态，其机制可能是一方面通过抑制TLR-4与P2X7R调控途径，降低大鼠海马组织中的炎症因子浓度，进一步抑制海马组织中Trp-KYN途径主要代谢酶IDO酶的含量与表达的水平；另一方面通过抑制肝脏组织中TDO的含量和表达，从而发挥中枢与外周多靶点的抗抑郁作用。