论文部分内容阅读
鹿藿为豆科鹿藿属植物鹿藿RhynchosiavolubilisLour.的干燥根，有祛风除湿、活血、解毒、消肿止痛的功效，亦是鄂西北民间避孕验方中的一味君药，用于女性节育，但活性成分未知。
本研究通过测试鹿藿提取物体外杀精活性，指导化学成分的分离纯化。结果表明，鹿藿根总提物在100mg/mL时即能使精液中的所有精子失活，各萃取层的抑制强度表现为石油醚层最强，乙酸乙酯层和水层次之，正丁醇层最弱，表明鹿藿中发挥抗生育活性的成分在各极性段均有分布，但石油醚层可能更为关键。
为进一步探究鹿藿发挥抗生育活性的物质基础，在体外抗生育活性指导下，本研究运用各类柱色谱分离方法，包括硅胶柱、凝胶柱、半制备HPLC等对鹿藿进行化学成分研究，从中得到40个化合物，利用核磁和质谱技术鉴定了32个化合物，分别为RhynchoneA~F(1-6)、(-)-SigmoidinE(7)、lupinifolin(8)、tonkinensisol(9)、lupinifolinol(10)、cathayanonH(11)、染料木素(12)、樱黄素(13)、isowighteone(14)、erythrininB(15)、甘草异黄酮A(16)、半甘草异黄酮B(17)、eriosemaoneD(18)、芒柄花黄素(19)、neobavaisoflavone(20 )、erylatissinB(21 )、puerarone(22 )、3-(4-Hydroxyphenyl)-8,8-dimethyl-8H-pyrano[2,3-f]-chromen-4-one(23 )、木豆酮(24 )、5,3’-dihydroxy-4’-methoxy-5’-γ,γ-dimethylallyl-2’’,2’’-dimethylpyrano[5,6:6,7]isoflavanone(25)、precatorinB(26)、sophoraisoflavanoneB(27)、3,4-Dihydro-7’-methoxy-2’,2’-dimethyl-3,6’-bi(2H-1-benzopyran)-7-ol(28)、isoneorautenol(29)、羽扇豆醇(30)、桦木醛(31)、穿贝海绵甾醇(32)。其中化合物1-6为新化合物，化合物1-7、9、11、14-18、20-23、25、27-29、31-32共24个化合物是首次从鹿藿属植物中分离得到，除木豆酮(24)外，余下化合物均为首次从鹿藿中分离得到。
精子是一种独立的体外生殖细胞，结构特殊。本研究将分离到的部分化合物进行体外杀精活性测试，根据精子胞内钙含量变化初步探究化合物对精子细胞上特异表达的钙通道蛋白Catsper的影响，筛选出鹿藿发挥抗生育的活性成分。结果显示，化合物2,16,22,26具有弱的体外直接抑制精子活动的效果，与阳性对照药壬苯醇醚相比，化合物2能够在300s内使正常浓度精液中的所有精子失活。与阳性对照药物黄体酮相比，化合物29、30对Catsper通道蛋白有亲和性，能够影响精子胞内钙离子含量，并呈浓度依赖性。鹿藿发挥抗生育的有效成分及具体作用机制需要进一步研究。
本研究通过测试鹿藿提取物体外杀精活性，指导化学成分的分离纯化。结果表明，鹿藿根总提物在100mg/mL时即能使精液中的所有精子失活，各萃取层的抑制强度表现为石油醚层最强，乙酸乙酯层和水层次之，正丁醇层最弱，表明鹿藿中发挥抗生育活性的成分在各极性段均有分布，但石油醚层可能更为关键。
为进一步探究鹿藿发挥抗生育活性的物质基础，在体外抗生育活性指导下，本研究运用各类柱色谱分离方法，包括硅胶柱、凝胶柱、半制备HPLC等对鹿藿进行化学成分研究，从中得到40个化合物，利用核磁和质谱技术鉴定了32个化合物，分别为RhynchoneA~F(1-6)、(-)-SigmoidinE(7)、lupinifolin(8)、tonkinensisol(9)、lupinifolinol(10)、cathayanonH(11)、染料木素(12)、樱黄素(13)、isowighteone(14)、erythrininB(15)、甘草异黄酮A(16)、半甘草异黄酮B(17)、eriosemaoneD(18)、芒柄花黄素(19)、neobavaisoflavone(20 )、erylatissinB(21 )、puerarone(22 )、3-(4-Hydroxyphenyl)-8,8-dimethyl-8H-pyrano[2,3-f]-chromen-4-one(23 )、木豆酮(24 )、5,3’-dihydroxy-4’-methoxy-5’-γ,γ-dimethylallyl-2’’,2’’-dimethylpyrano[5,6:6,7]isoflavanone(25)、precatorinB(26)、sophoraisoflavanoneB(27)、3,4-Dihydro-7’-methoxy-2’,2’-dimethyl-3,6’-bi(2H-1-benzopyran)-7-ol(28)、isoneorautenol(29)、羽扇豆醇(30)、桦木醛(31)、穿贝海绵甾醇(32)。其中化合物1-6为新化合物，化合物1-7、9、11、14-18、20-23、25、27-29、31-32共24个化合物是首次从鹿藿属植物中分离得到，除木豆酮(24)外，余下化合物均为首次从鹿藿中分离得到。
精子是一种独立的体外生殖细胞，结构特殊。本研究将分离到的部分化合物进行体外杀精活性测试，根据精子胞内钙含量变化初步探究化合物对精子细胞上特异表达的钙通道蛋白Catsper的影响，筛选出鹿藿发挥抗生育的活性成分。结果显示，化合物2,16,22,26具有弱的体外直接抑制精子活动的效果，与阳性对照药壬苯醇醚相比，化合物2能够在300s内使正常浓度精液中的所有精子失活。与阳性对照药物黄体酮相比，化合物29、30对Catsper通道蛋白有亲和性，能够影响精子胞内钙离子含量，并呈浓度依赖性。鹿藿发挥抗生育的有效成分及具体作用机制需要进一步研究。