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摘 要：为了探讨连翘等6种中草药对常见致病菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及欧文氏菌）的抑菌效果。本实验利用95%的乙醇对连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英等六种中草药进行提取并浓缩为1g/ml，通过测定抑菌圈的大小来比较6种中草药的抑菌效果。结果发现黄连对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径较大而且清晰，金银花对欧文氏菌的抑菌圈直径较大并且清晰。这表明，黄连对金黄色葡萄球菌抑菌作用较强，金银花对欧文氏菌的抑菌作用较强。
关键词：抑菌作用;中草药;大肠杆菌;金黄色葡萄球菌;欧文氏菌
我们生活的环境当中无时无刻不存在着大量的微生物，其中细菌就是分布十分广的一类微生物。而大多数细菌都是对人类有害的，会引起人类感染各种疾病。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及欧文氏菌就是较为常见的致病菌。大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，大肠杆菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染 [1] 。金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌 在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。近几年，金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌 [2] 。欧文氏菌是寄生于植物并引起腐败病，因美国植物病理学家Erwin F.Smith而得名，但不少学者认为应纳入大肠杆菌类，属于杆菌属。由于它带有果胶多聚半乳糖醛酸酶，因而侵害植物，从而对人体造成较大的危害。中草药相对于化学制药有作用温和、副作用小等优点，研究中草药的抑菌效果对于研制中药制品的抗菌药物具有较大的意义，本实验通过测定连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英对大肠杆菌、金黄的葡萄球菌以及欧文氏菌抑菌圈的大小初步研究该6种中药抑菌效果的强弱，现报告如下。
1 仪器与材料
1.1主要仪器与设备 恒温培养振荡器（ZWYE-2401：上海智城分析仪器制造有限公司），生物安全柜，电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司），立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂），高速多功能粉碎机（上海缘沃工贸有限公司），旋转蒸发儀，医用纱布。
1.2 试剂与材料 连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英（均满足实验要求），无水乙醇（分析纯），大肠杆菌（CMCC（B）44113），金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003），欧文氏菌，氯化钠（分析纯），胰蛋白胨（上海缘肽生物技术有限公司），琼脂粉（北京索莱宝科技有限公司），超纯水，酵母提取物，0.45um滤膜。
2 方法与步骤
2.1 中药提取液的制备
将连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英置于多功能高速粉碎机中粉碎，粉碎后准确称取28.00g，加入95%乙醇至280ml浸泡72小时。浸泡完成后冷凝回流2h，用八层纱布过滤、收集滤液，将滤渣回收再加入95%乙醇至280ml继续回流2h，合并两次滤液。将两次合并后的滤液转入旋转蒸发仪中蒸去多余的乙醇，最后经0.45um滤膜过滤定容到28ml即可得到1g/ml的中药提取液。
2.2 LB培养基的制备
分别称取950.00g超纯水，胰蛋白胨10.00g，酵母提取物10.00g，氯化钠10.00g，琼脂粉20.00g至1000ml容量瓶中，高压灭菌备用。
2.3 2.3 抑菌圈的测定
先往已高压灭菌的平板中倾注20ml左右平板培养基，水平静置凝固，接种0.1ml菌悬液，涂布均匀后备用。用纸片扩散法测定6种中草药的抑菌作用，等到试验平板的琼脂表面凝固水分干燥后，用记号笔将培养皿等分为4份，用无菌镊子夹取4份6mm药敏纸片分别贴在培养皿中被等分区域，用移液器吸取10uL中药提取液滴于滤纸片上，培养皿的圆心放置6mm药敏纸片，将平板倒置于霉菌培养箱中28℃培养取出培养好的试验平板，采用十字交叉法用游标卡尺测量抑菌圈直径，以直径表示抑菌圈的大小。
3 结果与结论
3.1 结果 6种中草药对（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及欧文氏菌）的抑菌效果如表1所示
（2）+：抑菌圈清晰，圈内无菌
3.2 结论
由实验结果可知，黄连、诃子、苦参、连翘的醇提液对金黄色葡萄杆菌有抑制作用，黄连的抑菌效果更强;蒲公英的醇提液对三种菌都没有明显抑菌作用;黄连、金银花、诃子、苦参的醇提液对欧文氏菌都具有明显的抑菌作用。
4 讨论
综上所述，连翘等六种中草药对于（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及欧文氏菌）均有不同程度的抑菌作用，本实验通过以上研究数据将为中草药抗菌成分的发现、提取、研发提供一定的线索。
参考文献
[1] 殷泽禄，万虎.大肠杆菌的研究[J].甘肃畜牧兽医，2019，49（5）：33-35.
[2] 张从超.生乳中金黄色葡萄球菌的快速检测及耐药性研究[D].济南，齐鲁工业大学，2017.
[3] 孟静思，袁进罡，马辉.中草药蒲公英的体外抑菌试验[J].生物化工，2013，36 （3） ：29-32.
[4] 王瑞君.几种中草药对金黄色葡萄球菌体外抑制作用的研究[J].现代食品科技，2009，25（9）：1104-1106.
[5] 李巧如，任健康，刘宗智，等.18种中草药抗菌作用的筛选[J].陕西中医，2002，23（6）：555.
关键词：抑菌作用;中草药;大肠杆菌;金黄色葡萄球菌;欧文氏菌
我们生活的环境当中无时无刻不存在着大量的微生物，其中细菌就是分布十分广的一类微生物。而大多数细菌都是对人类有害的，会引起人类感染各种疾病。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及欧文氏菌就是较为常见的致病菌。大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，大肠杆菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染 [1] 。金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌 在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。近几年，金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌 [2] 。欧文氏菌是寄生于植物并引起腐败病，因美国植物病理学家Erwin F.Smith而得名，但不少学者认为应纳入大肠杆菌类，属于杆菌属。由于它带有果胶多聚半乳糖醛酸酶，因而侵害植物，从而对人体造成较大的危害。中草药相对于化学制药有作用温和、副作用小等优点，研究中草药的抑菌效果对于研制中药制品的抗菌药物具有较大的意义，本实验通过测定连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英对大肠杆菌、金黄的葡萄球菌以及欧文氏菌抑菌圈的大小初步研究该6种中药抑菌效果的强弱，现报告如下。
1 仪器与材料
1.1主要仪器与设备 恒温培养振荡器（ZWYE-2401：上海智城分析仪器制造有限公司），生物安全柜，电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司），立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂），高速多功能粉碎机（上海缘沃工贸有限公司），旋转蒸发儀，医用纱布。
1.2 试剂与材料 连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英（均满足实验要求），无水乙醇（分析纯），大肠杆菌（CMCC（B）44113），金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003），欧文氏菌，氯化钠（分析纯），胰蛋白胨（上海缘肽生物技术有限公司），琼脂粉（北京索莱宝科技有限公司），超纯水，酵母提取物，0.45um滤膜。
2 方法与步骤
2.1 中药提取液的制备
将连翘、黄连、金银花、诃子、苦参、蒲公英置于多功能高速粉碎机中粉碎，粉碎后准确称取28.00g，加入95%乙醇至280ml浸泡72小时。浸泡完成后冷凝回流2h，用八层纱布过滤、收集滤液，将滤渣回收再加入95%乙醇至280ml继续回流2h，合并两次滤液。将两次合并后的滤液转入旋转蒸发仪中蒸去多余的乙醇，最后经0.45um滤膜过滤定容到28ml即可得到1g/ml的中药提取液。
2.2 LB培养基的制备
分别称取950.00g超纯水，胰蛋白胨10.00g，酵母提取物10.00g，氯化钠10.00g，琼脂粉20.00g至1000ml容量瓶中，高压灭菌备用。
2.3 2.3 抑菌圈的测定
先往已高压灭菌的平板中倾注20ml左右平板培养基，水平静置凝固，接种0.1ml菌悬液，涂布均匀后备用。用纸片扩散法测定6种中草药的抑菌作用，等到试验平板的琼脂表面凝固水分干燥后，用记号笔将培养皿等分为4份，用无菌镊子夹取4份6mm药敏纸片分别贴在培养皿中被等分区域，用移液器吸取10uL中药提取液滴于滤纸片上，培养皿的圆心放置6mm药敏纸片，将平板倒置于霉菌培养箱中28℃培养取出培养好的试验平板，采用十字交叉法用游标卡尺测量抑菌圈直径，以直径表示抑菌圈的大小。
3 结果与结论
3.1 结果 6种中草药对（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及欧文氏菌）的抑菌效果如表1所示
（2）+：抑菌圈清晰，圈内无菌
3.2 结论
由实验结果可知，黄连、诃子、苦参、连翘的醇提液对金黄色葡萄杆菌有抑制作用，黄连的抑菌效果更强;蒲公英的醇提液对三种菌都没有明显抑菌作用;黄连、金银花、诃子、苦参的醇提液对欧文氏菌都具有明显的抑菌作用。
4 讨论
综上所述，连翘等六种中草药对于（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及欧文氏菌）均有不同程度的抑菌作用，本实验通过以上研究数据将为中草药抗菌成分的发现、提取、研发提供一定的线索。
参考文献
[1] 殷泽禄，万虎.大肠杆菌的研究[J].甘肃畜牧兽医，2019，49（5）：33-35.
[2] 张从超.生乳中金黄色葡萄球菌的快速检测及耐药性研究[D].济南，齐鲁工业大学，2017.
[3] 孟静思，袁进罡，马辉.中草药蒲公英的体外抑菌试验[J].生物化工，2013，36 （3） ：29-32.
[4] 王瑞君.几种中草药对金黄色葡萄球菌体外抑制作用的研究[J].现代食品科技，2009，25（9）：1104-1106.
[5] 李巧如，任健康，刘宗智，等.18种中草药抗菌作用的筛选[J].陕西中医，2002，23（6）：555.