沟槽神经导管治疗周围神经缺损的动物实验

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研究目的:
  周围神经损伤(peripheral nerve injury)是一种普遍性的疾病,泛指包括对周围神经形态结构和生理功能的一切损害,构成了严峻的社会健康问题。当损伤导致的神经缺损小于5mm时,一般可以进行无张力的端端缝合,但当神经缺损大于5mm时,就需要进行自体神经移植。但是自体神经移植存在多次手术,供区功能牺牲,供、受区神经残端失配,供体来源有限等缺陷。因此我们若能找到一种与自体神经移植疗效相似甚至更好的治疗方案具有重要的意义。
  神经导管桥接是一种修复神经缺损的手段,目前临床上使用的导管多以中空管状物为主,疗效并不理想。神经轴突接触引导(contact guidance)理论认为,轴突能沿着玻璃划痕等微结构定向再生,而我们认为新生神经定向生长能提高神经缺损的治疗效果。我们前期基于干/湿纺丝技术、3D打印技术制备出“具有纵向沟槽结构的神经导管”,利用其内壁的沟槽结构也许能实现对新生轴突的接触引导作用,这个推论在前期PC12细胞的体外导管培养实验中得到了证实。为了更进一步评价沟槽导管的修复效果,我们设计了SD大鼠坐骨神经缺损修复的体内实验,并从行为学、解剖学、电生理学、病理学等多角度进行了探究。
  研究方法:
  1.随机分组后建立SD大鼠右侧坐骨神经缺损模型,分别采用光滑内壁导管、沟槽内壁导管、自体神经移植修复坐骨神经缺损,并以左侧为空白对照。
  2.热刺激测试:术后用定期用电热板对大鼠后足进行热刺激,用刺激至后足规避性回缩的时间长短来评价大鼠后足的热觉恢复情况。
  3.电生理测试:术后第16周对大鼠麻醉后解剖出双侧坐骨神经,刺激坐骨神经并记录腓肠肌动作电位的潜伏期及振幅。
  4.腓肠肌检测:术后第16周解剖并取下其双侧腓肠肌,对其称重,并用Masson法对腓肠肌标本进行染色,肌纤维呈红色,胶原纤维呈蓝绿色,分别计算他们的比例。
  5.坐骨神经HE染色:术后第16周采用苏木精-伊红对坐骨进行染色,观察坐骨神经微观结构改变情况。
  6.坐骨神经免疫荧光染色:坐骨神经采用兔抗胶质纤维酸性蛋白质(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)单克隆抗体、小鼠抗神经丝重链多肽(Neurofilament heavy polypeptide,NF-01)单克隆抗体对其进行染色,来比较组间轴突和雪旺细胞的再生情况。
  7.坐骨神经透射电镜观察:坐骨神经超薄切片后用透射电镜观察髓鞘的形态,以评价组间新生神经的成熟度。
  研究结果:
  相较于光滑导管,沟槽导管修复坐骨神经后,大鼠患肢对热觉刺激更加敏感;电生理测试中,沟槽导管组的腓肠肌动作电位潜伏期更短,振幅更高;在腓肠肌检测中,沟槽导管组的腓肠肌萎缩相对更少;坐骨神经HE染色中,沟槽导管组新生神经组织相对较多,血供相对更好;坐骨神经免疫荧光染色中,沟槽导管组新生神经组织中由轴突表达的NF-01和由雪旺细胞表达的GFAP含量更高;坐骨神经电镜观察中,沟槽导管组新生神经的轴突具有更厚的髓鞘。
  研究结论:
  沟槽导管中新生神经贴壁生长更加明显,说明沟槽导管能在动物体内实现“轴突接触引导作用”;相较于光滑导管,沟槽导管具有更有的神经缺损修复效果。
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