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目的:
探索针刺对近视模型树鼩眼屈光发育的影响及其相关作用机制。观察揿针在青少年近视早期防控中的作用,进一步探索针刺在青少年近视防控的优势。
方法:
第一部分:睁眼两周龄健康中缅树鼩32只,分别设立空白组、模型组、假针刺组和针刺组,采用单色光诱导法建立近视树鼩模型,在造模的基础上进行针刺干预8周。通过带状光检影、眼科A超检查,观察实验前、实验4周、实验8周时的屈光度和眼轴长度。8周时处死动物取材眼球、视网膜、角膜、巩膜检测,运用HE染色观察视网膜、角巩膜形态学改变,RT-PCR、免疫组化、Western-Blot等方法观察视网膜长波长敏感视蛋白(L-opsin)、短波长敏感视蛋白(S-opsin)和角巩膜Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因COL1A1、COL3A1的表达。
第二部分:回顾性临床病例对照研究。收集在2018年12月到2019年6月期间于成都中医药大学附属医院眼科就诊,病史资料完整,经医学验光后确诊为近视,近视屈光度数在0~6.00D,年龄在3~16岁的青少年,根据是否接受揿针埋针疗法分为揿针组和非揿针组,揿针组56例(110眼),非揿针组45例(86眼)。揿针组在配戴框架眼镜的基础上采用揿针埋针疗法同时观察体质分型、用眼习惯、户外活动和睡眠,选取穴位:攒竹、鱼腰、丝竹空、太阳,进行揿针埋针,每次埋针24h,每周2次,共4周。非揿针组配戴框架眼镜,未接受其他干预措施。观察基线水平和第6月揿针组和非揿针组屈光度状态变化及揿针组体质分型、用眼习惯评分、户外活动评分和睡眠评分。
结果:
第一部分:
1.各组树鼩眼球屈光度变化:4周时,与空白组比较:模型组、假针刺组、针刺组屈光度均显著下降,差异有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000)。与模型组比较:假针刺组屈光度下降,差异无统计学意义(P=0.106);针刺组屈光度下降,差异有统计学意义(P=0.000)。与假针刺组比较:针刺组屈光度下降,差异有统计学意义(P=0.000)。8周时,与空白组比较:模型组、假针刺组、针刺组屈光度均显著下降,差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.010)。与模型组比较:假针刺组屈光度下降,差异无统计学意义(P=0.678);针刺组屈光度升高,差异有统计学意义(P=0.000)。与假针刺组比较:针刺组屈光度升高,差异有统计学意义(P=0.000)。
2.各组树鼩眼球眼轴长度变化:4周时,空白组、模型组、假针刺组、针刺组之间眼轴长度差异无统计学意义(P=0.443、0.624、0.843、0.157、0.551、0.734)。8周时,与空白组比较:模型组、假针刺组眼轴长度显著增长,差异有统计学意义(P=0.004、0.002);针刺组眼轴增长,差异无统计学意义(P=0.590)。与模型组比较:假针刺组眼轴长度无明显差异,无统计学意义(P=0.571);针刺组眼轴长度较短,差异有统计学意义(P=0.010)。与假针刺组比较:针刺组眼轴长度较短,差异有统计学意义(P=0.003)。
3.各组树鼩屈光度变化与眼轴长度变化的关系:各组树鼩屈光度变化与眼轴长度变化在4周时表现出弱相关性(r=-0.160),8周时表现出中等程度负性相关(r=-0.589)。
4.各组树鼩眼球组织学改变:各组间角膜、巩膜和视网膜组织各层结构未见明显形态学改变。
5.各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsinmRNA的表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsinmRNA表达均显著升高,差异有统计学意义(P=0.010、0.012);假针刺组、针刺组的表达差异不明显,无统计学意义(P=0.548、0.600,0.882、0.918)。与模型组比较:假针刺组L-opsin、S-opsinmRNA表达均显著降低,差异有统计学意义(P=0.026,0.028)。针刺组L-opsinmRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P=0.008),S-opsinmRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P=0.010);与假针刺组比较:假针刺组和针刺组L-opsin、S-opsinmRNA表达无明显差异,无统计学意义(P=0.458)。
6.WesternBlot检测各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsin蛋白表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsin表达均显著升高,差异有统计学意义(P=0.000、0.001);假针刺组、针刺组L-opsin、S-opsin的表达升高,差异无统计学意义(P=0.963、0.281,0.807、0.107)。与模型组比较:假针刺组明显降低,有统计学意义(P=0.000、0.003);针刺组L-opsin、S-opsin表达显著降低,有统计学意义(P=0.037、0.050)。与假针刺组比较:针刺组L-opsin、S-opsin表达差异不明显,无统计学意义(P=0.243、0.189)。
7.免疫组化检测各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsin蛋白表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsin平均光密度显著升高,差异有统计学意义(P=0.009、0.014);假针刺组、针刺组平均光密度升高,差异无统计学意义(P=0.146、0.101,0.361、0.939)。与模型组比较:假针刺组、针刺组L-opsin、S-opsin的平均光密度明显下降,差异有统计学意义(P=0.016、0.008,0.002、0.019);与假针刺比较:针刺组L-opsin、S-opsin的平均光密度无明显差异,无统计学意义(P=0.363、0.938)。
8.各组树鼩角膜COL1A1、COL3A1mRNA的表达:与空白组比较:模型组COL1A1、COL3A1mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P=0.004、0.008);假针刺组、针刺组表达均降低,但差异无统计学意义(P=0.120、0.930,0.446、0.983)。与模型组比较:假针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.080、0.103);针刺组COL1A1mRNA表达升高,差异有统计学意义(P=0.044),COL3A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.200)。与假针刺组比较:针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达降低,差异无统计学意义(P=0.565、0.928)。
9.各组树鼩巩膜COL1A1、COL3A1mRNA的表达:与空白组比较:模型组COL1A1、COL3A1mRNA表达显著下降(P=0.005、0.000)。假针刺组、针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达降低,差异无统计学意义(P=0.105、0.052,0.860、0.132)。与模型组比较:假针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达升高,COL1A1mRNA表达无统计学意义(P=0.108),COL3A1mRNA表达有统计学意义(P=0.017);针刺组COL1A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.101),COL3A1mRNA表达升高,差异有统计学意义(P=0.012)。与假针刺组比较:针刺组COL1A1mRNA、COL3A1mRNA表达变化不明显,差异无统计学意义(P=0.141、0.628)。
第二部分:
1.揿针组和非揿针组的基线屈光度分别为:-2.67±0.95D,-2.71±0.87D,第6月时屈光度分别为:-3.03±0.87D,-3.27±0.89D;两组第6月和基线的差值分别为:-0.36±0.20D,-0.56±0.13D,两者差值比较有统计学意义(P=0.048)。
2.第6月,揿针组视力未下降,或屈光度未增加的为19.6%,非揿针组的为8.1%。
3.揿针组的体质分型:83.9%青少年属于平和质,3.6%青少年属于偏颇体质,12.5%属于有偏颇体质倾向。
4.揿针组的用眼习惯评分,户外活动评分,睡眠评分的基线水平分别为32.35±7.23,13.15±5.46,18.64±6.38;第6月的用眼习惯评分,户外活动评分,睡眠评分分别为35.47±6.81,13.22±6.16,18.73±6.59,三者第6月与基线水平相比,差异无统计学意义(P=0.102、0.326、0.583)。
结论:
1.针刺在一定时间内能延缓短波长单色光诱导近视模型树鼩眼球屈光度的近视偏移和眼轴长度的增长,表明针刺对短波长单色光诱导近视模型树鼩眼球屈光发育系统有一定抑制作用,推测针刺可能延缓近视的发展进程。
2.针刺延缓近视发展进程的机制可能是:①针刺通过抑制树鼩视网膜视觉信息通路上L-opsin、S-opsin基因和蛋白的表达,延缓近视发展。②针刺调节树鼩角、巩膜上COL1A1、COL3A1的转录表达,可能与改变角巩膜重塑,抑制眼轴的增长延缓近视发展有关。
3.揿针对青少年近视发展有一定延缓和控制作用,但对已经形成的近视无治疗作用。揿针在青少年近视中的防控作用还需进一步深入研究。
4.未病先防,已病防变,通过改善偏颇体质,用眼习惯少用目力,增强体质调养正气对近视的发生发展有一定的延缓和控制作用。
探索针刺对近视模型树鼩眼屈光发育的影响及其相关作用机制。观察揿针在青少年近视早期防控中的作用,进一步探索针刺在青少年近视防控的优势。
方法:
第一部分:睁眼两周龄健康中缅树鼩32只,分别设立空白组、模型组、假针刺组和针刺组,采用单色光诱导法建立近视树鼩模型,在造模的基础上进行针刺干预8周。通过带状光检影、眼科A超检查,观察实验前、实验4周、实验8周时的屈光度和眼轴长度。8周时处死动物取材眼球、视网膜、角膜、巩膜检测,运用HE染色观察视网膜、角巩膜形态学改变,RT-PCR、免疫组化、Western-Blot等方法观察视网膜长波长敏感视蛋白(L-opsin)、短波长敏感视蛋白(S-opsin)和角巩膜Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因COL1A1、COL3A1的表达。
第二部分:回顾性临床病例对照研究。收集在2018年12月到2019年6月期间于成都中医药大学附属医院眼科就诊,病史资料完整,经医学验光后确诊为近视,近视屈光度数在0~6.00D,年龄在3~16岁的青少年,根据是否接受揿针埋针疗法分为揿针组和非揿针组,揿针组56例(110眼),非揿针组45例(86眼)。揿针组在配戴框架眼镜的基础上采用揿针埋针疗法同时观察体质分型、用眼习惯、户外活动和睡眠,选取穴位:攒竹、鱼腰、丝竹空、太阳,进行揿针埋针,每次埋针24h,每周2次,共4周。非揿针组配戴框架眼镜,未接受其他干预措施。观察基线水平和第6月揿针组和非揿针组屈光度状态变化及揿针组体质分型、用眼习惯评分、户外活动评分和睡眠评分。
结果:
第一部分:
1.各组树鼩眼球屈光度变化:4周时,与空白组比较:模型组、假针刺组、针刺组屈光度均显著下降,差异有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000)。与模型组比较:假针刺组屈光度下降,差异无统计学意义(P=0.106);针刺组屈光度下降,差异有统计学意义(P=0.000)。与假针刺组比较:针刺组屈光度下降,差异有统计学意义(P=0.000)。8周时,与空白组比较:模型组、假针刺组、针刺组屈光度均显著下降,差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.010)。与模型组比较:假针刺组屈光度下降,差异无统计学意义(P=0.678);针刺组屈光度升高,差异有统计学意义(P=0.000)。与假针刺组比较:针刺组屈光度升高,差异有统计学意义(P=0.000)。
2.各组树鼩眼球眼轴长度变化:4周时,空白组、模型组、假针刺组、针刺组之间眼轴长度差异无统计学意义(P=0.443、0.624、0.843、0.157、0.551、0.734)。8周时,与空白组比较:模型组、假针刺组眼轴长度显著增长,差异有统计学意义(P=0.004、0.002);针刺组眼轴增长,差异无统计学意义(P=0.590)。与模型组比较:假针刺组眼轴长度无明显差异,无统计学意义(P=0.571);针刺组眼轴长度较短,差异有统计学意义(P=0.010)。与假针刺组比较:针刺组眼轴长度较短,差异有统计学意义(P=0.003)。
3.各组树鼩屈光度变化与眼轴长度变化的关系:各组树鼩屈光度变化与眼轴长度变化在4周时表现出弱相关性(r=-0.160),8周时表现出中等程度负性相关(r=-0.589)。
4.各组树鼩眼球组织学改变:各组间角膜、巩膜和视网膜组织各层结构未见明显形态学改变。
5.各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsinmRNA的表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsinmRNA表达均显著升高,差异有统计学意义(P=0.010、0.012);假针刺组、针刺组的表达差异不明显,无统计学意义(P=0.548、0.600,0.882、0.918)。与模型组比较:假针刺组L-opsin、S-opsinmRNA表达均显著降低,差异有统计学意义(P=0.026,0.028)。针刺组L-opsinmRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P=0.008),S-opsinmRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P=0.010);与假针刺组比较:假针刺组和针刺组L-opsin、S-opsinmRNA表达无明显差异,无统计学意义(P=0.458)。
6.WesternBlot检测各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsin蛋白表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsin表达均显著升高,差异有统计学意义(P=0.000、0.001);假针刺组、针刺组L-opsin、S-opsin的表达升高,差异无统计学意义(P=0.963、0.281,0.807、0.107)。与模型组比较:假针刺组明显降低,有统计学意义(P=0.000、0.003);针刺组L-opsin、S-opsin表达显著降低,有统计学意义(P=0.037、0.050)。与假针刺组比较:针刺组L-opsin、S-opsin表达差异不明显,无统计学意义(P=0.243、0.189)。
7.免疫组化检测各组树鼩视网膜L-opsin、S-opsin蛋白表达:与空白组比较:模型组L-opsin、S-opsin平均光密度显著升高,差异有统计学意义(P=0.009、0.014);假针刺组、针刺组平均光密度升高,差异无统计学意义(P=0.146、0.101,0.361、0.939)。与模型组比较:假针刺组、针刺组L-opsin、S-opsin的平均光密度明显下降,差异有统计学意义(P=0.016、0.008,0.002、0.019);与假针刺比较:针刺组L-opsin、S-opsin的平均光密度无明显差异,无统计学意义(P=0.363、0.938)。
8.各组树鼩角膜COL1A1、COL3A1mRNA的表达:与空白组比较:模型组COL1A1、COL3A1mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P=0.004、0.008);假针刺组、针刺组表达均降低,但差异无统计学意义(P=0.120、0.930,0.446、0.983)。与模型组比较:假针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.080、0.103);针刺组COL1A1mRNA表达升高,差异有统计学意义(P=0.044),COL3A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.200)。与假针刺组比较:针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达降低,差异无统计学意义(P=0.565、0.928)。
9.各组树鼩巩膜COL1A1、COL3A1mRNA的表达:与空白组比较:模型组COL1A1、COL3A1mRNA表达显著下降(P=0.005、0.000)。假针刺组、针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达降低,差异无统计学意义(P=0.105、0.052,0.860、0.132)。与模型组比较:假针刺组COL1A1、COL3A1mRNA表达升高,COL1A1mRNA表达无统计学意义(P=0.108),COL3A1mRNA表达有统计学意义(P=0.017);针刺组COL1A1mRNA表达升高,差异无统计学意义(P=0.101),COL3A1mRNA表达升高,差异有统计学意义(P=0.012)。与假针刺组比较:针刺组COL1A1mRNA、COL3A1mRNA表达变化不明显,差异无统计学意义(P=0.141、0.628)。
第二部分:
1.揿针组和非揿针组的基线屈光度分别为:-2.67±0.95D,-2.71±0.87D,第6月时屈光度分别为:-3.03±0.87D,-3.27±0.89D;两组第6月和基线的差值分别为:-0.36±0.20D,-0.56±0.13D,两者差值比较有统计学意义(P=0.048)。
2.第6月,揿针组视力未下降,或屈光度未增加的为19.6%,非揿针组的为8.1%。
3.揿针组的体质分型:83.9%青少年属于平和质,3.6%青少年属于偏颇体质,12.5%属于有偏颇体质倾向。
4.揿针组的用眼习惯评分,户外活动评分,睡眠评分的基线水平分别为32.35±7.23,13.15±5.46,18.64±6.38;第6月的用眼习惯评分,户外活动评分,睡眠评分分别为35.47±6.81,13.22±6.16,18.73±6.59,三者第6月与基线水平相比,差异无统计学意义(P=0.102、0.326、0.583)。
结论:
1.针刺在一定时间内能延缓短波长单色光诱导近视模型树鼩眼球屈光度的近视偏移和眼轴长度的增长,表明针刺对短波长单色光诱导近视模型树鼩眼球屈光发育系统有一定抑制作用,推测针刺可能延缓近视的发展进程。
2.针刺延缓近视发展进程的机制可能是:①针刺通过抑制树鼩视网膜视觉信息通路上L-opsin、S-opsin基因和蛋白的表达,延缓近视发展。②针刺调节树鼩角、巩膜上COL1A1、COL3A1的转录表达,可能与改变角巩膜重塑,抑制眼轴的增长延缓近视发展有关。
3.揿针对青少年近视发展有一定延缓和控制作用,但对已经形成的近视无治疗作用。揿针在青少年近视中的防控作用还需进一步深入研究。
4.未病先防,已病防变,通过改善偏颇体质,用眼习惯少用目力,增强体质调养正气对近视的发生发展有一定的延缓和控制作用。