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目的:临床实践证实太白续骨胶囊具有良好防治骨质疏松症的作用。焦杜仲、续断、珠子参是太白续骨胶囊的核心药物,焦杜仲续断药对为临床经典强筋骨补肝肾药物,是常用防治骨质疏松的中药。前期研究表明,珠子参归肝、肺经,具有补益、活血作用,中药珠子参也可有效防治去卵巢大鼠骨质疏松症。本研究目的在于考察焦杜仲、续断、珠子参三味单药配伍防治骨质疏松是否具有协同增效的作用,以期为太白续骨胶囊在临床中的使用提供理论依据。
方法:1.药物防治LPS诱导小鼠骨质疏松的研究:56只3周龄雄性小鼠,体重15g±2g,随机分为7组,每组8只,分别为空白组、模型组、焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组,适应性饲养1周。除空白组外,各组以5mg/kg浓度脂多糖(LPS)腹腔注射,隔天1次,持续1周,并记录小鼠形态及生活状态的变化。造模第1天后开始灌胃,各药物组按0.082g/ml中药煎液灌胃,空白组及模型组均使用同体积去离子水灌胃,每天1次,持续三周。三周给药结束后称重并将56只小鼠眼眶取血离心分离出上层血清,-80℃保存,同时分离双侧股骨、胫骨(称重)。检测小鼠体重、骨组织切片、血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、白介素-6(IL-6)。
2.药物对大鼠成骨细胞影响的研究:离体培养大鼠原代成骨细胞,设空白组、焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组。焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组分别设含生药浓度为0.39mg/ml、0.78mg/ml、1.56mg/ml和3.12mg/ml的含药培养基加入成骨细胞内,采用MTT法、矿化结节染色法、碱性磷酸酶检测法以及EDU染色法对比不同药物及浓度对于成骨细胞增殖及矿化的影响。采用Graphpad.prism.v5.0软件行统计学分析。
结果:1.动物实验结果显示:(1)焦杜仲、续断、珠子参、焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参5组药物均可降低血清中ALP、TRACP及IL-6的含量,提高OP小鼠骨小梁密度,具有一定的抗OP的作用;(2)焦杜仲、续断、珠子参三味单药相比较,焦杜仲效果较续断及珠子参作用更好,续断、珠子参2者未见明显差别;(3)焦杜仲-续断及焦杜仲-续断-珠子参2组相比,焦杜仲-续断-珠子参效果优于焦杜仲-续断,且这2组药物在防治OP方面效果远优于单味药物,临床可结合相须为用。
2.(1)成骨细胞实验结果显示:焦杜仲、续断、珠子参、焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参5组药物0.39、0.78mg/ml浓度对成骨细胞的活力、增殖、矿化及ALP的合成有促进作用,1.56、3.12mg/ml则会出现一定的抑制作用,随着浓度增长,抑制性就会越强;(2)焦杜仲、续断、珠子参3组药物中,焦杜仲与续断、珠子参比较,效果更好,续断、珠子参则未见明显差异;(3)焦杜仲续断珠子参配伍使用效果优于单味中药及焦杜仲续断药对,具有协同增效作用。
结论:焦杜仲、续断、珠子参及焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参配伍使用均可提高OP小鼠的骨小梁密度及降低炎性因子;对成骨细胞活力、增殖、矿化、ALP有促进作用,焦杜仲续断珠子参配伍效果明显优于其他组,初步明确焦杜仲续断珠子参配伍具有协同增效作用。
方法:1.药物防治LPS诱导小鼠骨质疏松的研究:56只3周龄雄性小鼠,体重15g±2g,随机分为7组,每组8只,分别为空白组、模型组、焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组,适应性饲养1周。除空白组外,各组以5mg/kg浓度脂多糖(LPS)腹腔注射,隔天1次,持续1周,并记录小鼠形态及生活状态的变化。造模第1天后开始灌胃,各药物组按0.082g/ml中药煎液灌胃,空白组及模型组均使用同体积去离子水灌胃,每天1次,持续三周。三周给药结束后称重并将56只小鼠眼眶取血离心分离出上层血清,-80℃保存,同时分离双侧股骨、胫骨(称重)。检测小鼠体重、骨组织切片、血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、白介素-6(IL-6)。
2.药物对大鼠成骨细胞影响的研究:离体培养大鼠原代成骨细胞,设空白组、焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组。焦杜仲组、续断组、珠子参组、焦杜仲-续断组、焦杜仲-续断-珠子参组分别设含生药浓度为0.39mg/ml、0.78mg/ml、1.56mg/ml和3.12mg/ml的含药培养基加入成骨细胞内,采用MTT法、矿化结节染色法、碱性磷酸酶检测法以及EDU染色法对比不同药物及浓度对于成骨细胞增殖及矿化的影响。采用Graphpad.prism.v5.0软件行统计学分析。
结果:1.动物实验结果显示:(1)焦杜仲、续断、珠子参、焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参5组药物均可降低血清中ALP、TRACP及IL-6的含量,提高OP小鼠骨小梁密度,具有一定的抗OP的作用;(2)焦杜仲、续断、珠子参三味单药相比较,焦杜仲效果较续断及珠子参作用更好,续断、珠子参2者未见明显差别;(3)焦杜仲-续断及焦杜仲-续断-珠子参2组相比,焦杜仲-续断-珠子参效果优于焦杜仲-续断,且这2组药物在防治OP方面效果远优于单味药物,临床可结合相须为用。
2.(1)成骨细胞实验结果显示:焦杜仲、续断、珠子参、焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参5组药物0.39、0.78mg/ml浓度对成骨细胞的活力、增殖、矿化及ALP的合成有促进作用,1.56、3.12mg/ml则会出现一定的抑制作用,随着浓度增长,抑制性就会越强;(2)焦杜仲、续断、珠子参3组药物中,焦杜仲与续断、珠子参比较,效果更好,续断、珠子参则未见明显差异;(3)焦杜仲续断珠子参配伍使用效果优于单味中药及焦杜仲续断药对,具有协同增效作用。
结论:焦杜仲、续断、珠子参及焦杜仲-续断、焦杜仲-续断-珠子参配伍使用均可提高OP小鼠的骨小梁密度及降低炎性因子;对成骨细胞活力、增殖、矿化、ALP有促进作用,焦杜仲续断珠子参配伍效果明显优于其他组,初步明确焦杜仲续断珠子参配伍具有协同增效作用。