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葡聚糖酶是一种具有葡聚糖水解活性的酶，广泛存在于各种真菌或细菌中。葡聚糖酶在食品，医疗和制糖等行业上都有着广泛的应用前景。本研究首先从油脂酵母中克隆了葡聚糖酶DEX基因，构建入表达载体pPIC9k-His6中，然后在AOX1启动子的控制下，在毕赤酵母GS115菌株中表达。通过在5 L罐中107 h的发酵，重组p. pastoris Mut+菌株的湿重达到588.6 g/L，葡聚糖酶的浓度和酶活分别达到0.445 g/L和83900 U/L。通过一步阳离子交换层析，收率为71.61％，酶比活为181.96 U/mg，纯化倍数为17.56倍。纯化得到的葡聚糖酶经过SDS-PAGE和westem blotting检测，均显示为单一的带，说明通过离子交换一步纯化可得到电泳纯葡聚糖酶。进一步对纯化后的葡聚糖酶进行最适温度和最适pH值的测定，得到最适温度为30 ℃，最适pH为4.5。金属离子Ak3+,Cu2+和Fe3+，还有SDS能够完全抑制葡聚糖酶的活性，而Mg2+能够增强葡聚糖酶活性145％。
本研究从提高该葡聚糖酶的热稳定性入手，通过定点突变的方法对葡聚糖酶进行定向改良，将突变酶在毕赤酵母中表达纯化并对其酶学性质进行分析，以确定突变效果。通过同源建模和定点突变，构建了M1 (L46C/T49C)，M2(T211C/N214C)和M3(D246C/S256C)三个单突变株和三个双突变株M12(L46C/T49C，T211C/N214C)，M13(L46C/T49C，D246C/S256C)，M23(T211C/N214C，D246C/S256C)，一个三突变株M123(L46C/T49C，D11C/N214C,D246C/S256C)。经过葡聚糖酶的最适活性温度的测定，M2，M3和M23比野生型葡聚糖酶的温度高7℃，其最适pH值也有偏移，分别为3.5，4.5和4.0。经过非变性SDS-PAGE的验证，形成了二硫键。