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重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白是一种以Survivin为药靶的促癌细胞凋亡的重组蛋白药物,在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达。本文研究了几种氮源、自由基清除剂及金属离子对该重组蛋白表达的影响。
实验发现,本论文中所采用的几种自由基清除剂及金属离子对HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白的表达无明显影响。在所试用的氮源中,虽然酵母粉与所用几种氨基酸对该蛋白的表达无明显作用,但蛋白胨与无机铵离子却显示对目标蛋白的表达有明显促进作用。对于蛋白胨,当其浓度低于10g/L时,重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白的表达水平随着蛋白胨浓度的提高而增加。
本论文重点考察了无机铵离子的作用。摇瓶中,不高于300 mM的铵离子对大肠杆菌BL21(DE3)的生长没有抑制作用。同时铵离子对目标蛋白的表达表现出了明显的促进作用,在添加了500mM铵离子的培养基中,目标蛋白占总蛋白的百分比提高到了30%左右,而未添加铵离子的培养基中只有20%。在5L罐中,添加了500mM的培养基中重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白的产率由LB-G培养基中的1210mg/L提高到了1650mg/L。30L罐中最终重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白的产率达2190mg/L。
另外,发现发酵过程中积累的高浓度乙酸并未对其蛋白表达产生影响。