论文部分内容阅读
目的：本课题从动物整体水平，评价七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用，检测Th17/Treg免疫网络相关细胞因子、转录因子表达水平，旨在进一步探讨七叶亭治疗溃疡性结肠炎可能的作用机制。
方法：雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只，随机分为空白对照组（NC组，n=8）和预造模组。造模前禁食24小时，自由饮水，造模时将含100mg/kgTNBS的50%乙醇溶液约1ml用注射器缓慢推入大鼠结肠。NC组大鼠造模方法同TNBS造模组，给予等量生理盐水灌肠，待大鼠自然苏醒后放回饲养笼。成模大鼠随机分为溃结模型组（UC组），七叶亭低剂量干预组（UC+EL组，5mg/kg），七叶亭高剂量干预组（UC+EH组，10mg/kg），柳氮磺吡啶干预组（UC+S组，0.32g/kg）。干预7天后处死取材，观察结肠黏膜组织病理学变化；ELISA检测各组大鼠血清中IL-17、TGF-β1、IL-10、IL-21表达水平；Westernblot检测各组大鼠结肠组织RORγt、Foxp3、STAT3、P-STAT3、STAT5和P-STAT5的蛋白表达。
结果：
1.大鼠疾病活动指数评分：与NC组相比，UC组大鼠DAI得分显著升高（P<0.01）。经过7天的治疗，与UC组相比，各干预组大鼠的DAI评分均有降低(P＜0.05或P＜0.01)。
2.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织病理形态学的影响：NC组结肠组织完整无缺失，各层组织结构正常、清晰。UC组则出现黏膜充血水肿，上皮细胞缺失，腺体多不完整，杯状细胞变形严重，炎性细胞广泛浸润。与UC组比较而言，各干预组治疗后结肠组织病理形态有不同程度改善，尤以七叶亭高剂量组和SASP组改善显著，趋向于NC组。
3.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠血清中细胞因子水平的影响：与NC组相比，UC组IL-17、IL-21表达显著增加，差异具有显著性（P＜0.01）；而TGF-β1、IL-10表达明显下降（P＜0.01）。与UC组相比，各干预组TGF-β1、IL-10表达均有升高（P＜0.05或P＜0.01）；而IL-17、IL-21表达均有下降（P＜0.05或P＜0.01）。
4.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中转录因子表达的影响：与NC组相比，UC组结肠组织RORγt、STAT3、P-STAT3表达均明显升高（P＜0.01）；Foxp3、STAT5、P-STAT5蛋白表达均明显下降（P＜0.01）；与UC组相比，ES不同剂量组和SASP组RORγt、STAT3、P-STAT3蛋白表达均明显下降（P＜0.01）。而且ES高剂量组和SASP组Foxp3、STAT5、P-STAT5蛋白表达均明显升高（P＜0.01）；ES低剂量组中STAT5、P-STAT5蛋白表达均升高（P＜0.01），而Foxp3的表达不明显，与UC组无明显差异。
结论：
1.采用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇灌肠法制备溃疡性结肠炎大鼠模型，发现Th17/Treg免疫网络失衡与溃疡性结肠炎密切相关，可作为治疗靶点之一。
2.七叶亭能够减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠组织损伤，其机制可能与调控Th17/Treg平衡有关。
方法：雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只，随机分为空白对照组（NC组，n=8）和预造模组。造模前禁食24小时，自由饮水，造模时将含100mg/kgTNBS的50%乙醇溶液约1ml用注射器缓慢推入大鼠结肠。NC组大鼠造模方法同TNBS造模组，给予等量生理盐水灌肠，待大鼠自然苏醒后放回饲养笼。成模大鼠随机分为溃结模型组（UC组），七叶亭低剂量干预组（UC+EL组，5mg/kg），七叶亭高剂量干预组（UC+EH组，10mg/kg），柳氮磺吡啶干预组（UC+S组，0.32g/kg）。干预7天后处死取材，观察结肠黏膜组织病理学变化；ELISA检测各组大鼠血清中IL-17、TGF-β1、IL-10、IL-21表达水平；Westernblot检测各组大鼠结肠组织RORγt、Foxp3、STAT3、P-STAT3、STAT5和P-STAT5的蛋白表达。
结果：
1.大鼠疾病活动指数评分：与NC组相比，UC组大鼠DAI得分显著升高（P<0.01）。经过7天的治疗，与UC组相比，各干预组大鼠的DAI评分均有降低(P＜0.05或P＜0.01)。
2.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织病理形态学的影响：NC组结肠组织完整无缺失，各层组织结构正常、清晰。UC组则出现黏膜充血水肿，上皮细胞缺失，腺体多不完整，杯状细胞变形严重，炎性细胞广泛浸润。与UC组比较而言，各干预组治疗后结肠组织病理形态有不同程度改善，尤以七叶亭高剂量组和SASP组改善显著，趋向于NC组。
3.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠血清中细胞因子水平的影响：与NC组相比，UC组IL-17、IL-21表达显著增加，差异具有显著性（P＜0.01）；而TGF-β1、IL-10表达明显下降（P＜0.01）。与UC组相比，各干预组TGF-β1、IL-10表达均有升高（P＜0.05或P＜0.01）；而IL-17、IL-21表达均有下降（P＜0.05或P＜0.01）。
4.七叶亭对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中转录因子表达的影响：与NC组相比，UC组结肠组织RORγt、STAT3、P-STAT3表达均明显升高（P＜0.01）；Foxp3、STAT5、P-STAT5蛋白表达均明显下降（P＜0.01）；与UC组相比，ES不同剂量组和SASP组RORγt、STAT3、P-STAT3蛋白表达均明显下降（P＜0.01）。而且ES高剂量组和SASP组Foxp3、STAT5、P-STAT5蛋白表达均明显升高（P＜0.01）；ES低剂量组中STAT5、P-STAT5蛋白表达均升高（P＜0.01），而Foxp3的表达不明显，与UC组无明显差异。
结论：
1.采用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇灌肠法制备溃疡性结肠炎大鼠模型，发现Th17/Treg免疫网络失衡与溃疡性结肠炎密切相关，可作为治疗靶点之一。
2.七叶亭能够减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠组织损伤，其机制可能与调控Th17/Treg平衡有关。