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目的：
1.观察阳和汤对H22肝癌荷瘤小鼠血清雌二醇、IL-2、IL-10及瘤组织IL-2、IL-10的影响。
2.探索雌激素对IL-2、IL-10的影响，完善YHD抑制HCC的作用机制。
方法：
通过在雄性昆明小鼠右前肢腋下接种H22肝癌细胞株的方法，建立H22肝癌荷瘤小鼠模型。随机分为空白组、模型组、阳和汤组(YHD组)、他莫昔芬组（TMXF组）、他莫昔芬+阳和汤组（TMXF+YHD组），于接种后次日开始每天分两次进行灌胃。第一次灌胃：YHD组、TMXF+YHD组均给予YHD灌胃（YHD7.36g/Kg），空白组、模型组、TMXF组根据体重均给予相对体积0.9%NaCl溶液；隔6h后行第二次灌胃：TMXF组、TMXF+YHD组给予TMXF灌胃（0.66mg/Kg），空白组、模型组、YHD组根据体重均给予相对体积0.9%NaCl溶液。连续灌胃9d，与末次给药12h后麻醉处死小鼠。腹腔静脉采集血液，离心取血清备用。完整剥离小鼠瘤组织，测瘤块重量并记录，然后置于10%甲醛溶液，备用于组织包埋。根据各组瘤重计算抑瘤率；ELISA法检测血清雌二醇（Estradiol，E2）、IL-2、IL-10的水平；HE染色观察各组小鼠瘤组织中肿瘤细胞的变化情况；免疫组织化学法观察瘤组织IL-2、IL-10的阳性表达变化。
结果：
1.实验组小鼠一般情况变化、体重变化、瘤重及抑瘤率
各组造模前毛色光泽度较好，饮食、饮水正常，活力较强无明显差异。造模结束后，各组小鼠毛色均较造模前晦暗无光泽，饮食、饮水较少，少数小鼠出现因瘤块过大引起的呼吸困难，小鼠活动减少多数聚集扎堆。其中，模型组和TMXF组小鼠状态为最差，YHD组和TMXF+YHD组整体状态较其它两组为好。各组因灌胃或不明原因各死亡一只。造模前体重各组间无差异；造模后体重方面：各组小鼠体重较空白组均显著降低；与模型组（23.61±0.75g）相比较，TMXF组（23.92±0.51g）小鼠体重无差异（P＞0.05）,YHD组（25.96±1.19g）有显著差异（P=0.000）,TMXF+YHD组（24.95±0.75g）有明显差异（P＜0.05）；与YHD组相比较，TMXF组有显著差异（P=0.000），TMXF+YHD组有明显差异（P＜0.05）。抑瘤率方面：YHD组的抑瘤率最高为24.17%，TMXF+YHD组的抑瘤率为20.83%。
2.实验组小鼠ELISA检测血清E2、IL-2、IL-10水平
①各实验组小鼠ELISA血清E2的水平分析：与模型组(83.33±1.72pg/ml)相比，TMXF组(81.40±2.08pg/ml)的E2水平无明显提升（P＞0.05，无统计学意义），YHD组(92.06±1.40pg/ml)E2水平显著提升（P＜0.01），TMXF+YHD组(79.92±1.97pg/ml)E2水平显著降低（P＜0.01）。说明YHD能够显著提高模型小鼠血清E2的水平。与YHD组相比，TMXF+YHD组E2水平无明显提升（P＞0.05）。
②各实验组小鼠ELISA血清IL-2的水平分析：与模型组(32.59±1.89pg/ml)相比，TMXF组(34.05±0.94pg/ml)中血清IL-2水平无明显提升（P＞0.05，无统计学意义），TMXF+YHD组(35.52±0.83pg/ml)血清IL-2水平显著提高（P＜0.01），YHD组(40.56±1.37pg/ml)提升最为显著（P=0.000）；与TMXF组相比较，TMXF+YHD组血清IL-2水平无明显提升（P＞0.05）。说明YHD能够显著提升血清IL-2的水平，TMXF对YHD提升模型小鼠血清IL-2的水平有影响。
③各实验组小鼠ELISA血清中IL-10的水平分析：与模型组（78.05±5.50pg/ml）相比，YHD组（63.36±1.00pg/ml）血清IL-10水平显著降低（P=0.000），TMXF组（81.62±2.14pg/ml）P＞0.05无统计学意义，TMXF+YHD组（72.85±3.56pg/ml）明显降低（P＜0.05）；与TMXF组相比，YHD组、TMXF+YHD组显著降低（P＜0.01）。说明YHD能下调血清IL-10的表达，TMXF能上调血清IL-10的表达。
④血清E2与IL-2、IL-10的相关性分析：P＜0.05,按α=0.05的检验水准，拒绝H0,接受H1。分析发现，与IL-2呈正相关、与IL-10呈负相关。E2与IL-2、IL-10均显著相关，均呈线性关系。
3.实验组小鼠瘤组织病理切片免疫组化结果
各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-2阳性表达分析：与模型组相比，YHD组IL-2阳性表达显著增强（P＜0.01），TMXF+YHD组IL-2阳性百分率明显增强，P﹤0.05有统计学意义。与YHD组相比较，其它组均显著减弱（P＜0.01）。说明YHD能够显著增强IL-2的表达，且在各组中最为明显。与TMXF组相比，TMXF+YHD组IL-2阳性表达无明显增强（P＞0.05），说明TMXF对YHD增强IL-2的表达有影响。各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-10阳性表达分析：与模型组相比，YHD组IL-10的阳性表达均有显著减弱（P＜0.01），TMXF+YHD组明显减弱（P＜0.05），TMXF组的阳性表达显著增强（P＜0.01）。说明YHD能显著抑制IL-10在瘤组织中的表达，TMXF可能促进IL-10的表达，但也有可能通过竞争性与雌二醇受体结合影响E2对IL-10表达的抑制作用。另外，TMXF对YHD抑制IL-10的表达产生了影响。
综上对各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-2、IL-10阳性表达分析，说明YHD能增强模型小鼠瘤组织IL-2阳性表达，抑制IL-10的表达。TMXF可能上调IL-2的表达，下调IL-10的表达，也有可能通过抑制E2对IL-2和IL-10的调节作用。TMXF影响YHD上调IL-2,下调IL-10的表达。
结论：
⑴YHD可上调IL-2、下调IL-10的血清含量及肿瘤组织中的表达，产生抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤的作用。
⑵YHD能够上调H22肝癌荷瘤小鼠血清E2水平。
⑶YHD可能通过上调H22肝癌荷瘤小鼠E2在血清的表达，影响IL-2、IL-10的血清含量及肿瘤组织中的表达，尤其抑制IL-10在肿瘤组织中的表达。
1.观察阳和汤对H22肝癌荷瘤小鼠血清雌二醇、IL-2、IL-10及瘤组织IL-2、IL-10的影响。
2.探索雌激素对IL-2、IL-10的影响，完善YHD抑制HCC的作用机制。
方法：
通过在雄性昆明小鼠右前肢腋下接种H22肝癌细胞株的方法，建立H22肝癌荷瘤小鼠模型。随机分为空白组、模型组、阳和汤组(YHD组)、他莫昔芬组（TMXF组）、他莫昔芬+阳和汤组（TMXF+YHD组），于接种后次日开始每天分两次进行灌胃。第一次灌胃：YHD组、TMXF+YHD组均给予YHD灌胃（YHD7.36g/Kg），空白组、模型组、TMXF组根据体重均给予相对体积0.9%NaCl溶液；隔6h后行第二次灌胃：TMXF组、TMXF+YHD组给予TMXF灌胃（0.66mg/Kg），空白组、模型组、YHD组根据体重均给予相对体积0.9%NaCl溶液。连续灌胃9d，与末次给药12h后麻醉处死小鼠。腹腔静脉采集血液，离心取血清备用。完整剥离小鼠瘤组织，测瘤块重量并记录，然后置于10%甲醛溶液，备用于组织包埋。根据各组瘤重计算抑瘤率；ELISA法检测血清雌二醇（Estradiol，E2）、IL-2、IL-10的水平；HE染色观察各组小鼠瘤组织中肿瘤细胞的变化情况；免疫组织化学法观察瘤组织IL-2、IL-10的阳性表达变化。
结果：
1.实验组小鼠一般情况变化、体重变化、瘤重及抑瘤率
各组造模前毛色光泽度较好，饮食、饮水正常，活力较强无明显差异。造模结束后，各组小鼠毛色均较造模前晦暗无光泽，饮食、饮水较少，少数小鼠出现因瘤块过大引起的呼吸困难，小鼠活动减少多数聚集扎堆。其中，模型组和TMXF组小鼠状态为最差，YHD组和TMXF+YHD组整体状态较其它两组为好。各组因灌胃或不明原因各死亡一只。造模前体重各组间无差异；造模后体重方面：各组小鼠体重较空白组均显著降低；与模型组（23.61±0.75g）相比较，TMXF组（23.92±0.51g）小鼠体重无差异（P＞0.05）,YHD组（25.96±1.19g）有显著差异（P=0.000）,TMXF+YHD组（24.95±0.75g）有明显差异（P＜0.05）；与YHD组相比较，TMXF组有显著差异（P=0.000），TMXF+YHD组有明显差异（P＜0.05）。抑瘤率方面：YHD组的抑瘤率最高为24.17%，TMXF+YHD组的抑瘤率为20.83%。
2.实验组小鼠ELISA检测血清E2、IL-2、IL-10水平
①各实验组小鼠ELISA血清E2的水平分析：与模型组(83.33±1.72pg/ml)相比，TMXF组(81.40±2.08pg/ml)的E2水平无明显提升（P＞0.05，无统计学意义），YHD组(92.06±1.40pg/ml)E2水平显著提升（P＜0.01），TMXF+YHD组(79.92±1.97pg/ml)E2水平显著降低（P＜0.01）。说明YHD能够显著提高模型小鼠血清E2的水平。与YHD组相比，TMXF+YHD组E2水平无明显提升（P＞0.05）。
②各实验组小鼠ELISA血清IL-2的水平分析：与模型组(32.59±1.89pg/ml)相比，TMXF组(34.05±0.94pg/ml)中血清IL-2水平无明显提升（P＞0.05，无统计学意义），TMXF+YHD组(35.52±0.83pg/ml)血清IL-2水平显著提高（P＜0.01），YHD组(40.56±1.37pg/ml)提升最为显著（P=0.000）；与TMXF组相比较，TMXF+YHD组血清IL-2水平无明显提升（P＞0.05）。说明YHD能够显著提升血清IL-2的水平，TMXF对YHD提升模型小鼠血清IL-2的水平有影响。
③各实验组小鼠ELISA血清中IL-10的水平分析：与模型组（78.05±5.50pg/ml）相比，YHD组（63.36±1.00pg/ml）血清IL-10水平显著降低（P=0.000），TMXF组（81.62±2.14pg/ml）P＞0.05无统计学意义，TMXF+YHD组（72.85±3.56pg/ml）明显降低（P＜0.05）；与TMXF组相比，YHD组、TMXF+YHD组显著降低（P＜0.01）。说明YHD能下调血清IL-10的表达，TMXF能上调血清IL-10的表达。
④血清E2与IL-2、IL-10的相关性分析：P＜0.05,按α=0.05的检验水准，拒绝H0,接受H1。分析发现，与IL-2呈正相关、与IL-10呈负相关。E2与IL-2、IL-10均显著相关，均呈线性关系。
3.实验组小鼠瘤组织病理切片免疫组化结果
各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-2阳性表达分析：与模型组相比，YHD组IL-2阳性表达显著增强（P＜0.01），TMXF+YHD组IL-2阳性百分率明显增强，P﹤0.05有统计学意义。与YHD组相比较，其它组均显著减弱（P＜0.01）。说明YHD能够显著增强IL-2的表达，且在各组中最为明显。与TMXF组相比，TMXF+YHD组IL-2阳性表达无明显增强（P＞0.05），说明TMXF对YHD增强IL-2的表达有影响。各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-10阳性表达分析：与模型组相比，YHD组IL-10的阳性表达均有显著减弱（P＜0.01），TMXF+YHD组明显减弱（P＜0.05），TMXF组的阳性表达显著增强（P＜0.01）。说明YHD能显著抑制IL-10在瘤组织中的表达，TMXF可能促进IL-10的表达，但也有可能通过竞争性与雌二醇受体结合影响E2对IL-10表达的抑制作用。另外，TMXF对YHD抑制IL-10的表达产生了影响。
综上对各实验组模型小鼠瘤组织免疫组化IL-2、IL-10阳性表达分析，说明YHD能增强模型小鼠瘤组织IL-2阳性表达，抑制IL-10的表达。TMXF可能上调IL-2的表达，下调IL-10的表达，也有可能通过抑制E2对IL-2和IL-10的调节作用。TMXF影响YHD上调IL-2,下调IL-10的表达。
结论：
⑴YHD可上调IL-2、下调IL-10的血清含量及肿瘤组织中的表达，产生抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤的作用。
⑵YHD能够上调H22肝癌荷瘤小鼠血清E2水平。
⑶YHD可能通过上调H22肝癌荷瘤小鼠E2在血清的表达，影响IL-2、IL-10的血清含量及肿瘤组织中的表达，尤其抑制IL-10在肿瘤组织中的表达。