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【目的】
本实验通过用腹腔注射二乙基亚硝胺（DEN）的方法建立SD大鼠肝癌前疾病模型，并给予山仙颗粒（SXG）和wnt／β-catenin信号通路抑制剂（KYA1797K）灌胃，采用HE染色、免疫组织化学法、血液生化分析、Westernbolt等方法，检测各组大鼠的肝功相关酶（ALT、AST、GGT）以及肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达及含量，以探讨山仙颗粒是否通过Wnt／β-catenin信号通路抑制SD大鼠肝癌前疾病恶变，为山仙颗粒干预肝癌前疾病的发生发展提供理论依据。
【方法】
取SPF级雄性大鼠84只，体重约190±10克，随机分为空白组、模型组、山仙颗粒大、中、小剂量组、抑制剂组，每组14只，并编号。造模采用腹腔注射DEN（50mg/kg），2次/周，至16周停止。分别给予SXG大、中、小剂量组相应剂量SXG混悬液（10ml/kg），于造模之日起灌胃（1次/天），空白组和模型组分别用等剂量生理盐水灌胃，抑制剂组从第四周开始，于DEN注射一小时后按1mg/kg使用KYA1797K灌胃。第16周周末最后一次给药24h后取材。取肝脏组织，称重，观察并记录其大小、质地、外观等变化；取病变肝组织0.5cm×0.5cm×0.5cm两块，一块置入10%中性福尔马林固定，另一块置入-80℃冰箱，备用；下腔静脉取血，进行血液生化分析，检测实验各组肝功能相关酶ALT、AST、GGT；HE染色后观察肝组织形态变化；免疫组化法及Westernblot法分别检测肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达及含量。
【结果】
(1)山仙颗粒及wnt信号通路阻断剂能减轻SD大鼠肝癌前病变-肝硬化病变程度。模型组：肝脏表面有大量结节，HE可见大量假小叶形成；山仙颗粒各组：肝脏表面结节减少，HE可见肝组织内纤维间隔变窄，假小叶明显减少，尤以大剂量减轻明显；抑制剂组：可见肝脏表面结节减少，HE可见肝组织内纤维间隔变窄，假小叶减少。
(2)山仙颗粒可改善肝癌前病变-肝硬化SD大鼠的肝功能。与空白组比较，模型组的肝功相关酶ALT、AST、GGT明显升高，且差异具有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较,山仙颗粒各组ALT、AST、GGT下降,且差异显著（P＜0.05），尤其以山仙颗粒高剂量降低最显著；与模型组比较,抑制剂组ALT、AST、GGT下降,且差异显著（P＜0.05）。
(3)山仙颗粒可剂量依赖性下调病变肝组织内Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达。免疫组化结果显示：与空白组比较，模型组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc表达明显升高，且具有显著差异（P＜0.05）；与模型组比较，SXG大剂量组和中剂量组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc表达明显下降，且具有显著差异（P＜0.05），小剂量组没有明显差异；与模型组比较，抑制剂组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达明显下降，且具有显著差异（P＜0.05）。
（4）山仙颗粒能够剂量依赖性降低病变肝组织内Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量。westernblot结果显示：与空白组比较，模型组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc含量明显升高，且具有显著差异（P＜0.05）；与模型组比较，SXG大剂量组和中剂量组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc含量明显下降，且具有显著差异（P＜0.05），小剂量组没有明显差异；与模型组比较，抑制剂组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量明显下降，且具有显著差异（P＜0.05）。
【结论】
（1）山仙颗粒可改善肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏病变，且具有剂量依赖性。
（2）山仙颗粒可降低肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠血清ALT、AST、GGT含量，且具有剂量依赖性。
（3）山仙颗粒可下调肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达。
（4）山仙颗粒可降低肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量。
（5）肝癌前疾病的发生发展与Wnt／β-catenin信号通路过度激活密切相关；山仙颗粒可能通过干预Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白而阻断肝癌前疾病的恶化。
本实验通过用腹腔注射二乙基亚硝胺（DEN）的方法建立SD大鼠肝癌前疾病模型，并给予山仙颗粒（SXG）和wnt／β-catenin信号通路抑制剂（KYA1797K）灌胃，采用HE染色、免疫组织化学法、血液生化分析、Westernbolt等方法，检测各组大鼠的肝功相关酶（ALT、AST、GGT）以及肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达及含量，以探讨山仙颗粒是否通过Wnt／β-catenin信号通路抑制SD大鼠肝癌前疾病恶变，为山仙颗粒干预肝癌前疾病的发生发展提供理论依据。
【方法】
取SPF级雄性大鼠84只，体重约190±10克，随机分为空白组、模型组、山仙颗粒大、中、小剂量组、抑制剂组，每组14只，并编号。造模采用腹腔注射DEN（50mg/kg），2次/周，至16周停止。分别给予SXG大、中、小剂量组相应剂量SXG混悬液（10ml/kg），于造模之日起灌胃（1次/天），空白组和模型组分别用等剂量生理盐水灌胃，抑制剂组从第四周开始，于DEN注射一小时后按1mg/kg使用KYA1797K灌胃。第16周周末最后一次给药24h后取材。取肝脏组织，称重，观察并记录其大小、质地、外观等变化；取病变肝组织0.5cm×0.5cm×0.5cm两块，一块置入10%中性福尔马林固定，另一块置入-80℃冰箱，备用；下腔静脉取血，进行血液生化分析，检测实验各组肝功能相关酶ALT、AST、GGT；HE染色后观察肝组织形态变化；免疫组化法及Westernblot法分别检测肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达及含量。
【结果】
(1)山仙颗粒及wnt信号通路阻断剂能减轻SD大鼠肝癌前病变-肝硬化病变程度。模型组：肝脏表面有大量结节，HE可见大量假小叶形成；山仙颗粒各组：肝脏表面结节减少，HE可见肝组织内纤维间隔变窄，假小叶明显减少，尤以大剂量减轻明显；抑制剂组：可见肝脏表面结节减少，HE可见肝组织内纤维间隔变窄，假小叶减少。
(2)山仙颗粒可改善肝癌前病变-肝硬化SD大鼠的肝功能。与空白组比较，模型组的肝功相关酶ALT、AST、GGT明显升高，且差异具有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较,山仙颗粒各组ALT、AST、GGT下降,且差异显著（P＜0.05），尤其以山仙颗粒高剂量降低最显著；与模型组比较,抑制剂组ALT、AST、GGT下降,且差异显著（P＜0.05）。
(3)山仙颗粒可剂量依赖性下调病变肝组织内Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达。免疫组化结果显示：与空白组比较，模型组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc表达明显升高，且具有显著差异（P＜0.05）；与模型组比较，SXG大剂量组和中剂量组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc表达明显下降，且具有显著差异（P＜0.05），小剂量组没有明显差异；与模型组比较，抑制剂组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达明显下降，且具有显著差异（P＜0.05）。
（4）山仙颗粒能够剂量依赖性降低病变肝组织内Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量。westernblot结果显示：与空白组比较，模型组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc含量明显升高，且具有显著差异（P＜0.05）；与模型组比较，SXG大剂量组和中剂量组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc含量明显下降，且具有显著差异（P＜0.05），小剂量组没有明显差异；与模型组比较，抑制剂组肝组织内wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量明显下降，且具有显著差异（P＜0.05）。
【结论】
（1）山仙颗粒可改善肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏病变，且具有剂量依赖性。
（2）山仙颗粒可降低肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠血清ALT、AST、GGT含量，且具有剂量依赖性。
（3）山仙颗粒可下调肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的表达。
（4）山仙颗粒可降低肝癌前疾病-肝硬化SD大鼠肝脏组织中Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白wnt-3a、β-catenin、C-Myc的含量。
（5）肝癌前疾病的发生发展与Wnt／β-catenin信号通路过度激活密切相关；山仙颗粒可能通过干预Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白而阻断肝癌前疾病的恶化。