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【目的】
本实验在课题组前期研究基础上探讨驱铅扶正方含药血清对染铅PC-12细胞凋亡的影响，揭示驱铅扶正方抑制染铅PC-12细胞凋亡的作用机制。
【方法】
通过驱铅扶正方中药浸提液SD大鼠灌胃，制备驱铅扶正方含药血清。将PC-12细胞同步化处理后随机分为四组：A组醋酸铅染毒组，B组驱铅扶正方含药血清组，C组阳性对照组和D组阴性对照组。分别采用倒置显微镜观察各组PC-12细胞形态；TUNEL检测细胞凋亡率；Fluo3-AM检测细胞内Ca2+浓度；罗丹明123（Rho123）检测线粒体膜电位；WesternBlot检测Cyt-c、caspase-9、caspase-3三种蛋白表达量。
【结果】
1.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞凋亡。细胞形态变化结果表明：醋酸铅染毒组PC-12细胞部分变圆，甚至脱落，胞体皱缩，周围光晕下降,轴突、树突断裂,并延突起方向出现大量空泡；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞，贴壁集聚成团生长，其胞体饱满，周围有光晕，轴突、树突细长明显,交织成网络，与醋酸铅染毒组和阳性对照组对比差异明显。TUNEL检测细胞凋亡率表明：醋酸铅染毒组、驱铅扶正方含药血清组、阳性对照组及阴性对照组PC-12细胞凋亡率分别为49.8%、16.5%、39.8%、3.2%。与阴性对照组相比，醋酸铅染毒和阳性对照组PC-12细胞凋亡率明显增高（组P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞凋亡率较醋酸铅染毒组和阳性对照组显著下降（P＜0.01）。
2.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞钙超载。Fluo3-AM检测细胞内Ca2+浓度表明：驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞内钙离子含量明显低于酸醋铅染毒组和阳性对照组（P＜0.01），与阴性对照组比较差异不明显。
3.驱铅扶正方能够维持染铅PC-12细胞线粒体膜电位稳定。Rh123检测线粒体膜电位表明：与阴性对照组比较，酸醋铅染毒组和阳性对照组PC-12细胞线粒体膜电位均显著下降（P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组较酸醋铅染毒组和阳性对照组线粒体膜电位明显上升（P＜0.01），与阴性对照组比较无明显差异。
4.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、Caspase-3三种蛋白的表达。WesternBlot检测Cyt-c、caspase-9、Caspase-3蛋白表达结果表明：对比阴性对照组，醋酸铅染毒组和阳性对照组PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、
caspase-3三种蛋白含量显著增高（P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、Caspase-3三种蛋白蛋白含量明显低于酸醋铅染毒组和阳性对照组（P＜0.01）。
【结论】
1.驱铅扶正方含药血清能够有效抑制染铅PC-12细胞凋亡；
2.驱铅扶正方含药血清可能是通过抑制染铅PC-12细胞钙超载和线粒体凋亡途径的启动来发挥抑制凋亡的作用。
本实验在课题组前期研究基础上探讨驱铅扶正方含药血清对染铅PC-12细胞凋亡的影响，揭示驱铅扶正方抑制染铅PC-12细胞凋亡的作用机制。
【方法】
通过驱铅扶正方中药浸提液SD大鼠灌胃，制备驱铅扶正方含药血清。将PC-12细胞同步化处理后随机分为四组：A组醋酸铅染毒组，B组驱铅扶正方含药血清组，C组阳性对照组和D组阴性对照组。分别采用倒置显微镜观察各组PC-12细胞形态；TUNEL检测细胞凋亡率；Fluo3-AM检测细胞内Ca2+浓度；罗丹明123（Rho123）检测线粒体膜电位；WesternBlot检测Cyt-c、caspase-9、caspase-3三种蛋白表达量。
【结果】
1.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞凋亡。细胞形态变化结果表明：醋酸铅染毒组PC-12细胞部分变圆，甚至脱落，胞体皱缩，周围光晕下降,轴突、树突断裂,并延突起方向出现大量空泡；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞，贴壁集聚成团生长，其胞体饱满，周围有光晕，轴突、树突细长明显,交织成网络，与醋酸铅染毒组和阳性对照组对比差异明显。TUNEL检测细胞凋亡率表明：醋酸铅染毒组、驱铅扶正方含药血清组、阳性对照组及阴性对照组PC-12细胞凋亡率分别为49.8%、16.5%、39.8%、3.2%。与阴性对照组相比，醋酸铅染毒和阳性对照组PC-12细胞凋亡率明显增高（组P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞凋亡率较醋酸铅染毒组和阳性对照组显著下降（P＜0.01）。
2.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞钙超载。Fluo3-AM检测细胞内Ca2+浓度表明：驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞内钙离子含量明显低于酸醋铅染毒组和阳性对照组（P＜0.01），与阴性对照组比较差异不明显。
3.驱铅扶正方能够维持染铅PC-12细胞线粒体膜电位稳定。Rh123检测线粒体膜电位表明：与阴性对照组比较，酸醋铅染毒组和阳性对照组PC-12细胞线粒体膜电位均显著下降（P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组较酸醋铅染毒组和阳性对照组线粒体膜电位明显上升（P＜0.01），与阴性对照组比较无明显差异。
4.驱铅扶正方能够抑制染铅PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、Caspase-3三种蛋白的表达。WesternBlot检测Cyt-c、caspase-9、Caspase-3蛋白表达结果表明：对比阴性对照组，醋酸铅染毒组和阳性对照组PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、
caspase-3三种蛋白含量显著增高（P＜0.01）；驱铅扶正方含药血清组PC-12细胞内Cyt-c、caspase-9、Caspase-3三种蛋白蛋白含量明显低于酸醋铅染毒组和阳性对照组（P＜0.01）。
【结论】
1.驱铅扶正方含药血清能够有效抑制染铅PC-12细胞凋亡；
2.驱铅扶正方含药血清可能是通过抑制染铅PC-12细胞钙超载和线粒体凋亡途径的启动来发挥抑制凋亡的作用。