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背景与目的
系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)是一种复杂的、由多因素引起的、多脏器受累的慢性自身免疫性结缔组织病，好发于青年女性，尤其是20～24岁的育龄期妇女，因其高患病率、高病死率对社会人群尤其是育龄期女性的身心健康造成较大危害。目前证实SLE的免疫学特征主要是多克隆B细胞激活和T细胞功能异常，产生大量自身抗体，形成免疫复合物，沉积于血管壁、肾小球和关节，导致全身多系统、多器官的慢性炎症损害。然而近年来自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK cell)在免疫性疾病中的作用也逐渐被学者所关注，NK细胞表面特有标记为CD3-CD56+，是一种独立于T细胞、B细胞的淋巴细胞群，具有自发细胞毒活性，其杀伤作用属于先天性免疫，无需抗原预先致敏。NKG2D为一种细胞表面活化性受体，可表达于多种免疫细胞上，其中包括NK细胞，参与适应性或固有免疫应答，调节NK细胞、T细胞、巨噬细胞和树突状细胞的功能。人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关基因A(MajorhistocompatibilitycomplexclassⅠchain-relatedgeneA，MICA)是人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关基因家族成员之一，其编码蛋白在人体内的唯一受体是NKG2D，具有激活效应并介导免疫细胞的活化和杀伤功能。白细胞介素-21(Interleukin-21，IL-21)是一种重要致炎因子，主要由活化CD4+T分泌，可介导多种免疫调节，具有促进NK细胞增殖和增强其杀伤活性的作用。Jiang等学者构建了具有表面表达MICA的基因修饰K562细胞系，在体外扩增NK细胞，探究针对癌症的进一步过继免疫疗法，把新分离的外周血单核细胞(PBMC)与可溶性IL-21共培养21天后，观察到NK细胞扩增比例显著增加，尤其是CD56+CD16+子集，在扩增的NK细胞上也检测到活化受体NKG2D的表达上调。NKG2D与IL-21的相互作用在肿瘤疾病当中多研究，但它们之间的关系和影响在自身免疫疾病领域研究不多，IL-21对SLE患者NK细胞的表达调节作用也有待进一步探讨研究。本实验探究SLE患者外周血浆中IL-21、游离MICA(sMICA)的表达水平及外周血单个核细胞中NK细胞表面受体NKG2D表达水平，检测经IL-21刺激患者外周血单个核细胞后NK细胞表面NKG2D表达情况，探讨IL-21是否干扰NKG2D表达参与SLE发病，通过IL-21和NKG2D途径对SLE治疗提供新思路。
材料与方法
收取2018年9月至2018年12月郑州大学第一附属医院风湿免疫科30例住院SLE患者作为实验组，同时收取30例健康体检者作为对照组，年龄在15到55岁之间。
1.采用ELISA方法检测健康对照组和SLE患者组血浆IL-21和sMICA水平，同时检测、记录患者临床指标抗dsDNA抗体同其IL-21水平进行相关性分析。
2.分离健康体检者和SLE患者外周血PBMCs，流式细胞术检测CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例。
3.分离SLE患者外周血PBMCs进行体外培养，设立IL-21组、(IL-21+IL-15)组和IL-15组，以IL-21或IL-15刺激培养细胞24、48、72小时后流式细胞术检测各组细胞CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例。
结果
1.同健康对照组(264.629±22.356)相比，SLE患者血清IL-21水平(373.580±20.096)明显升高(t=19.711,P＜0.001)，且SLE患者体内IL-21水平与抗dsDNA抗体具有正相关特性。
2.同健康对照组(1286.967±45.205)相比，SLE患者血清sMICA水平(1347.548±44.182)明显升高(t=5.249,P＜0.001)。
3.SLE患者外周血PBMCs中CD3-CD56+NKG2D+细胞所占比例(11.826±5.468)明显低于健康对照组(28.078±8.813)，t=7.272,P=＜0.001。
4.IL-21组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养24h后时测定比例低于(IL-21+IL-15)组和IL-15组。IL-21组和(IL-21+IL-15)组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养48h后测定比例高于IL-15组。IL-21组和(IL-21+IL-15)组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养72h后测定比例明显高于IL-15组。差异均具统计学意义。
5.CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在IL-21组和(IL-21+IL-15)组中随时间增加而升高，在IL-15组中变化无统计学差异。
结论
SLE患者IL-21水平较健康对照者升高，且同患者血浆抗dsDNA抗体水平相关，因此IL-21可能与SLE的发病机制相关。SLE患者sMICA水平较健康对照者升高，同时外周血CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例下降，NKG2D异常表达可能参与SLE发病，并通过结合sMICA抑制NK细胞功能。IL-21刺激外周血PBMCs后CD3-CD56+NKG2D细胞所占比例升高，说明IL-21可能通过调节NKG2D表达参与SLE发病。
系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)是一种复杂的、由多因素引起的、多脏器受累的慢性自身免疫性结缔组织病，好发于青年女性，尤其是20～24岁的育龄期妇女，因其高患病率、高病死率对社会人群尤其是育龄期女性的身心健康造成较大危害。目前证实SLE的免疫学特征主要是多克隆B细胞激活和T细胞功能异常，产生大量自身抗体，形成免疫复合物，沉积于血管壁、肾小球和关节，导致全身多系统、多器官的慢性炎症损害。然而近年来自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK cell)在免疫性疾病中的作用也逐渐被学者所关注，NK细胞表面特有标记为CD3-CD56+，是一种独立于T细胞、B细胞的淋巴细胞群，具有自发细胞毒活性，其杀伤作用属于先天性免疫，无需抗原预先致敏。NKG2D为一种细胞表面活化性受体，可表达于多种免疫细胞上，其中包括NK细胞，参与适应性或固有免疫应答，调节NK细胞、T细胞、巨噬细胞和树突状细胞的功能。人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关基因A(MajorhistocompatibilitycomplexclassⅠchain-relatedgeneA，MICA)是人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关基因家族成员之一，其编码蛋白在人体内的唯一受体是NKG2D，具有激活效应并介导免疫细胞的活化和杀伤功能。白细胞介素-21(Interleukin-21，IL-21)是一种重要致炎因子，主要由活化CD4+T分泌，可介导多种免疫调节，具有促进NK细胞增殖和增强其杀伤活性的作用。Jiang等学者构建了具有表面表达MICA的基因修饰K562细胞系，在体外扩增NK细胞，探究针对癌症的进一步过继免疫疗法，把新分离的外周血单核细胞(PBMC)与可溶性IL-21共培养21天后，观察到NK细胞扩增比例显著增加，尤其是CD56+CD16+子集，在扩增的NK细胞上也检测到活化受体NKG2D的表达上调。NKG2D与IL-21的相互作用在肿瘤疾病当中多研究，但它们之间的关系和影响在自身免疫疾病领域研究不多，IL-21对SLE患者NK细胞的表达调节作用也有待进一步探讨研究。本实验探究SLE患者外周血浆中IL-21、游离MICA(sMICA)的表达水平及外周血单个核细胞中NK细胞表面受体NKG2D表达水平，检测经IL-21刺激患者外周血单个核细胞后NK细胞表面NKG2D表达情况，探讨IL-21是否干扰NKG2D表达参与SLE发病，通过IL-21和NKG2D途径对SLE治疗提供新思路。
材料与方法
收取2018年9月至2018年12月郑州大学第一附属医院风湿免疫科30例住院SLE患者作为实验组，同时收取30例健康体检者作为对照组，年龄在15到55岁之间。
1.采用ELISA方法检测健康对照组和SLE患者组血浆IL-21和sMICA水平，同时检测、记录患者临床指标抗dsDNA抗体同其IL-21水平进行相关性分析。
2.分离健康体检者和SLE患者外周血PBMCs，流式细胞术检测CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例。
3.分离SLE患者外周血PBMCs进行体外培养，设立IL-21组、(IL-21+IL-15)组和IL-15组，以IL-21或IL-15刺激培养细胞24、48、72小时后流式细胞术检测各组细胞CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例。
结果
1.同健康对照组(264.629±22.356)相比，SLE患者血清IL-21水平(373.580±20.096)明显升高(t=19.711,P＜0.001)，且SLE患者体内IL-21水平与抗dsDNA抗体具有正相关特性。
2.同健康对照组(1286.967±45.205)相比，SLE患者血清sMICA水平(1347.548±44.182)明显升高(t=5.249,P＜0.001)。
3.SLE患者外周血PBMCs中CD3-CD56+NKG2D+细胞所占比例(11.826±5.468)明显低于健康对照组(28.078±8.813)，t=7.272,P=＜0.001。
4.IL-21组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养24h后时测定比例低于(IL-21+IL-15)组和IL-15组。IL-21组和(IL-21+IL-15)组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养48h后测定比例高于IL-15组。IL-21组和(IL-21+IL-15)组CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在细胞培养72h后测定比例明显高于IL-15组。差异均具统计学意义。
5.CD3-CD56+细胞表达NKG2D水平在IL-21组和(IL-21+IL-15)组中随时间增加而升高，在IL-15组中变化无统计学差异。
结论
SLE患者IL-21水平较健康对照者升高，且同患者血浆抗dsDNA抗体水平相关，因此IL-21可能与SLE的发病机制相关。SLE患者sMICA水平较健康对照者升高，同时外周血CD3-CD56+NKG2D+NK细胞所占比例下降，NKG2D异常表达可能参与SLE发病，并通过结合sMICA抑制NK细胞功能。IL-21刺激外周血PBMCs后CD3-CD56+NKG2D细胞所占比例升高，说明IL-21可能通过调节NKG2D表达参与SLE发病。