【摘 要】
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目的：研究人p21WAF基因对人胃癌细胞株AGS细胞survivin基因，以及hTERT、TRF1、TRF2和hPOT1等端粒相关基因表达水平的影响。方法：采用克隆技术构建pEGFP-C2-p21 真核表达质粒，经脂质体lipofectamine2000 介导和G418 筛选将pEGFP-C2-p21 稳定转染AGS细胞；荧光显微镜观察报告基因pEGFP 发出绿色荧光判定p21 在AGS的表达效率
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目的：研究人p21WAF基因对人胃癌细胞株AGS细胞survivin基因，以及hTERT、TRF1、TRF2和hPOT1等端粒相关基因表达水平的影响。
方法：采用克隆技术构建pEGFP-C2-p21 真核表达质粒，经脂质体lipofectamine2000 介导和G418 筛选将pEGFP-C2-p21 稳定转染AGS细胞；荧光显微镜观察报告基因pEGFP 发出绿色荧光判定p21 在AGS的表达效率和亚细胞定位；流式细胞术分析细胞周期；实时荧光定量PCR 技术检测AGS细胞p21WAF、survivin、端粒相关基因hTERT、TRF1、TRF2及hPOT1 mRNA表达水平。
结果：PCR、酶切分析及DNA测序结果表明pEGFP-C2-p21真核表达载体序列和方向正确，p21WAF在AGS细胞稳定表达且主要定位于细胞核；mRNA显示转染pEGFP-C2-p21的P21WAF、survivin、hTERT、TRF1、TRF2 及hPOT1基因mRNA分别为转染pEGFP-C2的324 倍、1.6％、95％、97％、102％及99％；细胞周期分析显示稳定转染P21WAF基因AGS细胞阻滞于G1期。
结论：p21WAF基因在AGS细胞成功高表达使细胞周期阻滞于G1/S期，可能在AGS细胞胞核，通过调控细胞周期在转录水平抑制survivin基因表达水平，但对端粒相关基因hTERT、TRF1、TRF2和hPOT1的转录水平可能不起调控作用。
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