高产腺苷的蛹草拟青霉菌株的原生质体诱变选育

• 作 者: 赵燕玉 陈瑞琛 梁玲 黄钦耿 蔡玉凤 翁雪清 黄建忠 吴松刚 骆梅香 刘晓红
• 机 构: 厦门元尊生物工程有限公司福州研究院,福州福建350007厦门元尊生物工程有限公司,厦门福建361026
• 出 处: 华东六省一市生物化学与分子生物学会2015年学术交流会
• 发表日期: 2015年12期
• 关键词: 蛹草拟青霉 原生质体 诱变选育 腺苷含量

蛹虫草又称北冬虫夏草,是重要的药食用真菌,已有研究表明其主要活性成分具有与野生冬虫夏草极同的药理作用,甚至某些活性成分含量还高于冬虫夏草,可作为冬虫夏草的代替品.自蛹虫草的无性型分离以来,人们对蛹虫草无性型的液体发酵条件、菌丝体有效成分、活性物质的分离纯化及部分生理功能等进行了广泛的研究,蛹虫草无性型菌丝体含有与有性型子实体相似的生理活性物质及药用价值,可利用发酵生产蛹虫草无性型菌丝体来进行相关产品的开发.然而由于蛹虫草分布比较广泛,不同产地、不同寄主的蛹虫草的生长条件、活性成分种类以及相对含量等也有不同,其无性型—蛹草拟青霉的液体发酵条件、活性物质种类及含量也存在较大差别.在野生虫草资源日益匮乏的情况下,研究开发人工虫草,选育优良虫草菌株,探讨液体发酵条件、研究菌丝体活性成分、含量及生理功能对进一步利用和开发虫草资源具有重要的理论意义和深远的现实意义.
本研究以提高蛹虫草无性型深层发酵的菌丝体中腺苷含量为目标，以分离自长白山的一株蛹草拟青霉为出发菌株，在优化原生质体的形成和再生条件的基础上，以原生质体诱变的方法选育高产腺苷的蛹草拟青霉菌株。
以培养5d菌龄的菌丝体为基体，用1.0％纤维素酶和1.0%蜗牛酶作为复合酶，选择0.6mo1/L蔗糖为最佳的渗透压稳定剂，最佳酶解pH为6.3-6.5温度23℃，40rpm条件下，酶解3.5h，原生质体的制备率可达1.5x108个/ml，再生率为1.3%。制备的原生质体经紫外线诱变、微孔板初筛及摇瓶复筛，获得了一株的高产腺苷蛹草拟青霉菌株FY1421，经单因素及多因素的培养基及培养条件的综合优化，30L发酵罐中，其生物量(菌体干重)较出发菌株提高了26.5%,菌丝体中腺苷含量5480ug/g干重，较出发菌株提高9.36%，达到选育目标，也为进一步开发利用蛹虫草资源奠定了基础。