论文部分内容阅读
摘要：目的：了解新生儿先天性听力现状和耳聋SLC26A4易感基因的发生率。
方法：在深圳市宝安区出生的新生儿进行新生儿听力和聋病SLC26A4易感基因联合筛查。采用自动听性脑干反应（AABR）2 阶段筛查方案，即新生儿出后3天进行AABR听力初筛，未通过者出院1 个月后到门诊接受AABR复筛。采集脐带血进行耳聋易感基因SLC26A4基因筛查。
结果：共2109例新生儿接受了第一轮筛查，其中53例出现左侧听力损失，42例右耳听力损失，31例双侧听力损失。经过第二轮自动听性脑干反应（AABR）筛查后，这126例听力损失的新生儿中仅有2例存在听力损失。新生儿耳聋基因检测显示：在SLC26A4基因筛查中，8例出现IVS7-2A>G杂合突变，2例出现1226G>A杂合突变。
结论：听力和耳聋SLC26A4易感基因联合筛查可能是听力损失诊断的有效策略。
Objectives：To explore the current situation of hearing for neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital and the incidence of SLC26A4gene mutation.
Mehtods：Hearing screening and SLC26A4 gene mutation detection were performed in neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital.AABR（Automated Auditory Brainstem Response）was introduced for neonatus hearing screening.The initial hearing initial screening will be arranged to at 3 days after neonatus birth.Those who passed the initial screening were asked to accept to AABR rescreening one month later.For the detection of deafness mutation gene SLC26A4，umbilical cord blood was collected.
Results：Among 2109 neonatuses who underwent initial screening，53 exhibited left-sided hearing loss，42 exhibited right-sided hearing loss and 31 cases had binaural hearing loss.After rescreening one month later，only 2 of the initial 126 cases exhibited hearing loss under AABR testing. In the SLC26A4 gene screening，8 cases exhibited the heterozygous IVS7-2A>G mutation and 2 exhibited the heterozygous 1226G>A mutation.
Conclusions：The association of hearing and SLC26A4 gene screening may be the promising screening strategy for the diagnosis of hearing loss.
前言
聽力损失是常见的人类出生缺陷。大约每1000例新生儿中就有1例。美国新生儿听力筛查项目始于1964年，之后在全球逐渐展开。中国的大中城市也逐渐开展了新生儿听力筛查，越来越多的听力损伤新生儿在出生后就被诊断出来。如果及时进行干预，该项目对语言发展、交流、认知、精神卫生和职业规划有着深远的影响[1]。分子遗传学的发展已证实：50%的非综合症耳聋和遗传因素有关，这使得遗传检查成为听力损失儿童筛查的强有力工具[2]。国内耳聋遗传病流行病学的调查表明SLC26A4基因是中国非综合征耳聋的常见突变热点之一[3]]。因此，本研究拟对深圳市宝安区出生的新生儿开展听力筛查和SLC26A4基因突变联合检测。
对象与方法
研究对象：为2013年出生的2109例新生儿，其中男性新生儿1126例，女性新生儿983例，全部行听力筛查和SLC26A4基因突变检测。该研究经深圳市宝安区妇幼保健院伦理委员会批准并根据赫尔基宣言实施。获取新生儿的监护人或父母的知情同意。
听力筛查：听力筛查在产房进行，新生儿在环境噪声低于30分贝的自然静睡的条件下进行检测。在出生后第3天，采用Algo3i新生儿听力筛查仪进行听力筛查。如果新生儿未能通过检测。在出生后一个月，在听力诊断实验室重复进行自动听性脑干反应检测。
遗传信息和血样：从每个新生儿采集大约2 ml脐带血，保存于EDTA抗凝真空管中，用于基因筛查[4]。新生儿父母应提供包括姓名、年龄、住院号、家庭住址、电话号码、怀孕信息和家庭遗传史、新生儿性别、体重和出生信息。
SLC26A4基因筛查：从脐带血中提取DNA，用于SLC26A4基因筛查。质谱分析系统用于SLC26A4基因耳聋突变位点筛查。提取DNA后，采用分光光度计检测DNA的深度和纯度。所有的样本基因组DNA深度均调至10 ng/μl，并保存在零下20度。 SLC26A4基因分型：分析设计软件包用来设计SLC26A4基因上待扩增片断引物。引物探针的设计严格按照MassARRAY系统要求设计，探针由上海Invitrogen生物技术有限公司合成。在每个孔中进行PCR扩增反应。基因组DNA（1 μl;10 ng/μl）和4 μl PCR混合物加入384孔平板。反应条件如下：95度2分钟，95度30秒，56度30秒和72度1分钟，共45个循环，然后72度5分钟。产物保存在4度环境下。大约16 ul 蒸馏水和6mg松香加入到384孔平板脱盐，然后采用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪进行分析。最终结果采用实时质谱检测软件系统进行解读。采用质谱分析分型软件进行分型。
统计分析：采用SPSS 16.0统计软件建立数据库并进行统计分析。
结果
听力筛查：在2109例新生儿首次听力筛查中，1980（93.9%）个新生儿通过了初始的耳声发射筛查，然而，50例未通过左耳听力筛查，42例未通过右耳听力筛查。总共有126（6.1%）例新生儿未通过初始听力筛查。在出生后的42天，这126例中仅有2例未通过初始听力筛查和单耳复筛。这样，2（0.1%）例没有通过耳声发射复筛。
SLC26A4基因筛查：总共有2109例新生儿接受了SLC26A4基因突变筛查。SLC26A4基因出现8例杂合突变，2例1226G>A杂合纯合突变，病原携带率为0.5%（10/2109）。这10例携带突变的新生儿通过了初始听力筛查。
讨论
SLC26A4基因编码阴离子（氯化物/磺化物，氯化物/碳酸氢盐）运输蛋白，该基因缺陷能导致非综合症常染色体隐性遗传耳聋，并伴前庭水管扩大和Pendred症状[5，6]。SLC26A4基因突变中国人耳聋的第二常见原因。[7].
在本研究中，同时对新生儿听力和听力易感基因SLC26A进行筛查。SLC26A4基因筛查中发现8例新生儿IVS7 2A>G杂合突变。同时还观察到2例SLC26A4基因1226G>A杂合突变。该突变于1998年首次报导[8]。在大前庭水管扩张耳聋表型中409位点的精氨酸改变为组氨酸，这常与常染色体隐性遗传相关。SLC26A4基因携带者常被推荐做颞骨CT扫描以检测是否发生前前庭水管是否存在扩张，并接爱定期的随访检查。
当前研究揭示了新生儿听力筛查中耳聋易感基因SLC26A4的分布。结果表明了新生儿耳聋基因SLC26A4筛查的必要性和可行性。新生儿听力筛查联合耳聋易感基因SLC26A4筛查对于迟发型耳聋或是耳聋基因携带者来说可能是语前听力损失早期诊断的很有前景的策略[9]。因此，耳聋易感基因SLC26A4筛查对于确定遗传听力损失很重要。
参考文献：
[1]Johnson JL，White KR，Widen JE，et al：A multicenter evaluation of how many infants with permanent hearing loss pass a two-stage otoacoustic emissions/automated auditory brainstem response newborn hearing screening protocol.Pediatrics 116：663-672，2005..
[2]Smith RJ，Bale JF Jr and White KR：Sensorineural hearing loss in children.Lancet 365：879-890，2005.
[3]Ouyang XM，Yan D，Yuan HJ，et al：The genetic bases for non-syndromic hearing loss among Chinese.J Hum Genet 54：131-140，200
[4]Hwa HL，Ko TM，Hsu CJ，et al：Mutation spectrum of the connexin 26（GJB2）gene in Taiwanese patients with prelingual deafness.Genet Med 5：161-165，2003.
[5]Everett LA，Morsli H，Wu DK，Green ED：Expression pattern of the mouse ortholog of the Pendred’s syndrome gene（Pds）suggests a key role for pendrin in the inner ear.Proc Natl Acad Sci U S A 1999，96：9727–9732.
[6]Royaux IE，Suzuki K，Mori A，Katoh R，Everett LA，Kohn LD，Green ED：Pendrin，the protein encoded by the Pendred syndrome gene（PDS），is an apical porter of iodide in the thyroid and is regulated by thyroglobulin in FRTL-5 cells.Endocrinology 2000，141：839–845.
[7]Wilcox SA，Saunders K，Osborn AH，Arnold A，Wunderlich J，Kelly T，Collins V，Wilcox LJ，McKinlay Gardner RJ，Kamarinos M，et al：High frequency hearing loss correlated with mutations in the GJB2 gene.Hum Genet 2000，106：399–405
[8]Van Hauwe P，Everett LA，Coucke P，et al：Two frequent missense mutations in Pendred syndrome.Hum Mol Genet 7：1099-1104，1998.
[9]Yoshinaga-Itano C，Sedey AL，Coulter DK and Mehl AL：Language of early- and later-identified children with hearing loss.Pediatrics 102：1161-1171，1998.
基金項目：2012年宝安区科技计划项目《宝安区新生儿听力和聋病易感基因联合筛查及随访研究》（2012077）
方法：在深圳市宝安区出生的新生儿进行新生儿听力和聋病SLC26A4易感基因联合筛查。采用自动听性脑干反应（AABR）2 阶段筛查方案，即新生儿出后3天进行AABR听力初筛，未通过者出院1 个月后到门诊接受AABR复筛。采集脐带血进行耳聋易感基因SLC26A4基因筛查。
结果：共2109例新生儿接受了第一轮筛查，其中53例出现左侧听力损失，42例右耳听力损失，31例双侧听力损失。经过第二轮自动听性脑干反应（AABR）筛查后，这126例听力损失的新生儿中仅有2例存在听力损失。新生儿耳聋基因检测显示：在SLC26A4基因筛查中，8例出现IVS7-2A>G杂合突变，2例出现1226G>A杂合突变。
结论：听力和耳聋SLC26A4易感基因联合筛查可能是听力损失诊断的有效策略。
Objectives：To explore the current situation of hearing for neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital and the incidence of SLC26A4gene mutation.
Mehtods：Hearing screening and SLC26A4 gene mutation detection were performed in neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital.AABR（Automated Auditory Brainstem Response）was introduced for neonatus hearing screening.The initial hearing initial screening will be arranged to at 3 days after neonatus birth.Those who passed the initial screening were asked to accept to AABR rescreening one month later.For the detection of deafness mutation gene SLC26A4，umbilical cord blood was collected.
Results：Among 2109 neonatuses who underwent initial screening，53 exhibited left-sided hearing loss，42 exhibited right-sided hearing loss and 31 cases had binaural hearing loss.After rescreening one month later，only 2 of the initial 126 cases exhibited hearing loss under AABR testing. In the SLC26A4 gene screening，8 cases exhibited the heterozygous IVS7-2A>G mutation and 2 exhibited the heterozygous 1226G>A mutation.
Conclusions：The association of hearing and SLC26A4 gene screening may be the promising screening strategy for the diagnosis of hearing loss.
前言
聽力损失是常见的人类出生缺陷。大约每1000例新生儿中就有1例。美国新生儿听力筛查项目始于1964年，之后在全球逐渐展开。中国的大中城市也逐渐开展了新生儿听力筛查，越来越多的听力损伤新生儿在出生后就被诊断出来。如果及时进行干预，该项目对语言发展、交流、认知、精神卫生和职业规划有着深远的影响[1]。分子遗传学的发展已证实：50%的非综合症耳聋和遗传因素有关，这使得遗传检查成为听力损失儿童筛查的强有力工具[2]。国内耳聋遗传病流行病学的调查表明SLC26A4基因是中国非综合征耳聋的常见突变热点之一[3]]。因此，本研究拟对深圳市宝安区出生的新生儿开展听力筛查和SLC26A4基因突变联合检测。
对象与方法
研究对象：为2013年出生的2109例新生儿，其中男性新生儿1126例，女性新生儿983例，全部行听力筛查和SLC26A4基因突变检测。该研究经深圳市宝安区妇幼保健院伦理委员会批准并根据赫尔基宣言实施。获取新生儿的监护人或父母的知情同意。
听力筛查：听力筛查在产房进行，新生儿在环境噪声低于30分贝的自然静睡的条件下进行检测。在出生后第3天，采用Algo3i新生儿听力筛查仪进行听力筛查。如果新生儿未能通过检测。在出生后一个月，在听力诊断实验室重复进行自动听性脑干反应检测。
遗传信息和血样：从每个新生儿采集大约2 ml脐带血，保存于EDTA抗凝真空管中，用于基因筛查[4]。新生儿父母应提供包括姓名、年龄、住院号、家庭住址、电话号码、怀孕信息和家庭遗传史、新生儿性别、体重和出生信息。
SLC26A4基因筛查：从脐带血中提取DNA，用于SLC26A4基因筛查。质谱分析系统用于SLC26A4基因耳聋突变位点筛查。提取DNA后，采用分光光度计检测DNA的深度和纯度。所有的样本基因组DNA深度均调至10 ng/μl，并保存在零下20度。 SLC26A4基因分型：分析设计软件包用来设计SLC26A4基因上待扩增片断引物。引物探针的设计严格按照MassARRAY系统要求设计，探针由上海Invitrogen生物技术有限公司合成。在每个孔中进行PCR扩增反应。基因组DNA（1 μl;10 ng/μl）和4 μl PCR混合物加入384孔平板。反应条件如下：95度2分钟，95度30秒，56度30秒和72度1分钟，共45个循环，然后72度5分钟。产物保存在4度环境下。大约16 ul 蒸馏水和6mg松香加入到384孔平板脱盐，然后采用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪进行分析。最终结果采用实时质谱检测软件系统进行解读。采用质谱分析分型软件进行分型。
统计分析：采用SPSS 16.0统计软件建立数据库并进行统计分析。
结果
听力筛查：在2109例新生儿首次听力筛查中，1980（93.9%）个新生儿通过了初始的耳声发射筛查，然而，50例未通过左耳听力筛查，42例未通过右耳听力筛查。总共有126（6.1%）例新生儿未通过初始听力筛查。在出生后的42天，这126例中仅有2例未通过初始听力筛查和单耳复筛。这样，2（0.1%）例没有通过耳声发射复筛。
SLC26A4基因筛查：总共有2109例新生儿接受了SLC26A4基因突变筛查。SLC26A4基因出现8例杂合突变，2例1226G>A杂合纯合突变，病原携带率为0.5%（10/2109）。这10例携带突变的新生儿通过了初始听力筛查。
讨论
SLC26A4基因编码阴离子（氯化物/磺化物，氯化物/碳酸氢盐）运输蛋白，该基因缺陷能导致非综合症常染色体隐性遗传耳聋，并伴前庭水管扩大和Pendred症状[5，6]。SLC26A4基因突变中国人耳聋的第二常见原因。[7].
在本研究中，同时对新生儿听力和听力易感基因SLC26A进行筛查。SLC26A4基因筛查中发现8例新生儿IVS7 2A>G杂合突变。同时还观察到2例SLC26A4基因1226G>A杂合突变。该突变于1998年首次报导[8]。在大前庭水管扩张耳聋表型中409位点的精氨酸改变为组氨酸，这常与常染色体隐性遗传相关。SLC26A4基因携带者常被推荐做颞骨CT扫描以检测是否发生前前庭水管是否存在扩张，并接爱定期的随访检查。
当前研究揭示了新生儿听力筛查中耳聋易感基因SLC26A4的分布。结果表明了新生儿耳聋基因SLC26A4筛查的必要性和可行性。新生儿听力筛查联合耳聋易感基因SLC26A4筛查对于迟发型耳聋或是耳聋基因携带者来说可能是语前听力损失早期诊断的很有前景的策略[9]。因此，耳聋易感基因SLC26A4筛查对于确定遗传听力损失很重要。
参考文献：
[1]Johnson JL，White KR，Widen JE，et al：A multicenter evaluation of how many infants with permanent hearing loss pass a two-stage otoacoustic emissions/automated auditory brainstem response newborn hearing screening protocol.Pediatrics 116：663-672，2005..
[2]Smith RJ，Bale JF Jr and White KR：Sensorineural hearing loss in children.Lancet 365：879-890，2005.
[3]Ouyang XM，Yan D，Yuan HJ，et al：The genetic bases for non-syndromic hearing loss among Chinese.J Hum Genet 54：131-140，200
[4]Hwa HL，Ko TM，Hsu CJ，et al：Mutation spectrum of the connexin 26（GJB2）gene in Taiwanese patients with prelingual deafness.Genet Med 5：161-165，2003.
[5]Everett LA，Morsli H，Wu DK，Green ED：Expression pattern of the mouse ortholog of the Pendred’s syndrome gene（Pds）suggests a key role for pendrin in the inner ear.Proc Natl Acad Sci U S A 1999，96：9727–9732.
[6]Royaux IE，Suzuki K，Mori A，Katoh R，Everett LA，Kohn LD，Green ED：Pendrin，the protein encoded by the Pendred syndrome gene（PDS），is an apical porter of iodide in the thyroid and is regulated by thyroglobulin in FRTL-5 cells.Endocrinology 2000，141：839–845.
[7]Wilcox SA，Saunders K，Osborn AH，Arnold A，Wunderlich J，Kelly T，Collins V，Wilcox LJ，McKinlay Gardner RJ，Kamarinos M，et al：High frequency hearing loss correlated with mutations in the GJB2 gene.Hum Genet 2000，106：399–405
[8]Van Hauwe P，Everett LA，Coucke P，et al：Two frequent missense mutations in Pendred syndrome.Hum Mol Genet 7：1099-1104，1998.
[9]Yoshinaga-Itano C，Sedey AL，Coulter DK and Mehl AL：Language of early- and later-identified children with hearing loss.Pediatrics 102：1161-1171，1998.
基金項目：2012年宝安区科技计划项目《宝安区新生儿听力和聋病易感基因联合筛查及随访研究》（2012077）