【摘 要】
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目的克隆人肿瘤抑素(tumstatin)基因,并进行其在大肠杆菌表达的研究.方法用RT-PCR技术从人肾癌旁组织中扩增出肿瘤抑素的cDNA,构建原核表达载体pQE-tum,IPTG诱导重组蛋白质的
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院,肝脏移植中心,江苏,南京,210029
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目的克隆人肿瘤抑素(tumstatin)基因,并进行其在大肠杆菌表达的研究.方法用RT-PCR技术从人肾癌旁组织中扩增出肿瘤抑素的cDNA,构建原核表达载体pQE-tum,IPTG诱导重组蛋白质的表达,并利用Ni-NTAHis-Bind树脂纯化该重组蛋白质.结果经PCR扩增成功获得742 bp的人肿瘤抑素基因,测序正确.在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为28 000,纯化后的6×His-tumstatm纯度可达92%.结论tumstatin基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤抗血管生成治疗研究奠定了基础.
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