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摘要：目的 探讨生境土壤对忍冬不同器官活性成分含量的影响。方法 测定不同产地不同品种忍冬不同器官中绿原酸、木犀草苷、总黄酮、总酚酸含量及土壤养分、无机元素含量，采用SPSS19.0软件对数据进行相关性分析。结果 道地产区山东平邑样品的活性成分含量总体水平较高，仅从活性成分含量考虑，PY-HBRD-1可作为平邑地区的适宜品种。土壤指标与忍冬各器官活性成分相关性分析表明，监控土壤中钾、锰等元素可对药材质量进行控制。结论 本研究结果可为种植地区忍冬品种的选择提供指导，并为道地产区的研究提供资料。
关键词：忍冬；活性成分；生境土壤
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0080-05
Abstract：Objective To study the effects of planting soil on active ingredients in different organs of Lonicera japonica Thunb.. Methods The contents of active ingredients in Lonicera japonica Thunb. from different origins， different varieties and different organs， such as chlorogenic acid， luteoloside， total flavonoids， total phenolic acid， and soil nutrient and inorganic elements， were detected. The data were analyzed by using SPSS 19.0 software. Results Lonicera japonica Thunb. from Pinyi area in Shandong Province had the highest content of active ingredients. In terms of content of active ingredients， PY-HBRD-1 was the most suitable variety in the Pingyi area. Analysis on the correlation between planting soil and active ingredients showed that the contents of K， Mn and other elements could be used as the index for quality control of Lonicera japonica Thunb.. Conclusion This study could provide guidance for selection of varieties of Lonicera japonica Thunb. in different planting areas， and enrich the materials about researches on producing area of Lonicera japonica.
Key words：Lonicera japonica Thunb.；active ingredient；planting soil
金银花、忍冬藤[1]及忍冬叶[2]是常用的清热解毒中药，来自忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.。研究表明，绿原酸、木犀草苷、总黄酮及总酚酸为其主要活性成分，具有抗病毒、抗氧化等生理活性[3]。本研究在金银花主产区种质资源调查的基础上[4]，对不同产区的毛花系列及道地产区山东平邑不同品种忍冬的不同器官样品中的绿原酸、木犀草苷、总黄酮、总酚酸含量进行测定，同时测量其生境土壤的养分及无机元素含量，通过统计分析揭示土壤对这些活性成分的影响，以期指导种植地区对忍冬品种的选择，并为道地产区研究提供资料。
1 仪器与试药
U-3010 Spectrophotometer紫外可见分光光度计（HITACHI），L-2000 HITACHI高效液相色谱仪。
绿原酸对照品（批号110753-200212）、芦丁对照品（批号100080-200707）、木犀草苷对照品（批号111520-200201），购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇（色谱纯），天津广成公司；其他试剂均为分析纯。
土壤样品于2011年5月采自6个地区，各产区以梅花形布点采集距地面20～40 cm耕层土，及时风干后，用木制器具研磨，充分混合后采用四分法留取1 kg土壤样品，过60目筛，于聚乙烯塑料瓶中避光贮存备用。土壤样品中的T4为冲积平原土壤；T5为麻骨岩风化后形成的土壤，在平邑属于小区环境；T6为棕壤性土，将沙和土分离，仅对土进行分析。同时采集忍冬不同器官样品。植物样品经山东中医药大学周凤琴教授鉴定，均为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾、藤枝及叶。样品用自来水洗净，蒸馏水冲洗2遍，置恒温干燥箱（60 ℃）中干燥，粉碎，过60目筛，置干燥器中备用。样品信息见表1。
2 方法
2.1 植物样品有机活性物质含量测定
总酚酸含量按文献[5]方法测定。总黄酮含量按文献[6]方法测定。绿原酸含量按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ D测定，具体操作方法见“金银花”项下绿原酸含量测定。木犀草苷含量按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ D测定，具体操作方法见“金银花”项下木犀草苷含量测定。 2.2 土壤养分及无机元素的测定
参照文献[7]方法。pH值采用电位测定法，土水比为1∶1。有机质采用重铬酸钾-硫酸氧化，分光光度法测定。总氮采用浓硫酸-高氯酸消化，流动注射分析仪测定。总磷采用浓硫酸-高氯酸消化，紫外分光光度计测定。速效钾采用醋酸铵浸提，火焰光度计测定。锌（Zn）、锰（Mn）、铁（Fe）、钾（K）、铜（Cu）、镁（Mg）采用浓硝酸-高氯酸消化，分光光度法测定。各项指标测定均进行方法学考察，结果均符合药典要求。
3 结果与分析
3.1 土壤养分及无机元素含量
道地产区山东平邑与河南新密产区的土壤整体偏酸性，而河南封丘与河北巨鹿土壤偏碱性或中性，提示pH值可能对金银花道地性有重要影响。河南新密产区虽为山地丘陵，但其有机质含量最高；河南封丘与河北巨鹿两地土壤均采于平原地区，土质肥沃，其有机质含量其次；山东平邑产区地貌多丘陵，土壤较贫瘠，有机质含量低。河南封丘土壤总氮含量较高，河南新密土壤含氮量最少，山东平邑土壤总氮含量总体偏低。山东平邑样品中T5总磷含量最低，T4和T6总磷含量水平均明显高于其他两地，T4总磷含量最高，达到T5的11倍之多，可能是由T5特殊的麻骨岩土壤类型决定的。山东平邑土壤速效钾含量总体低于河南和河北土壤。除Mn外，山东平邑样品T6（棕性土壤）中所测其他5种无机元素含量在6个产区样品中含量最高；所测无机元素在样品T5（麻骨岩土壤）中含量最低或偏低。详见表2。
3.2 土壤养分及无机元素的主成分分析
忍冬生境土壤主成分特征值及初始因子载荷矩阵见表3、表4。
3.3 忍冬植株活性成分含量分析
生境土壤数据经SPSS19.0主成分分析降维至3个主成分，累计贡献率为93.68%，特征值均>1，它们代表了忍冬生境土壤养分及所测无机元素的绝大部分信息。由表4可知，Zn、Mg、Cu、Fe、K与主成分1相关系数较大，说明这几种元素的指标信息为忍冬生境土壤的第一主成分。速效钾、Mn、总氮、pH值与主成分2相关系数较大，为忍冬生境土壤的第二主成分。主成分3反映的主要是有机质的信息。主成分1的贡献率最高，可以作为忍冬生境土壤的特征标识元素。
3.3.1 毛花系列样品在不同生境的活性成分含量分析 毛花系列样品JLLC-JFYH-1、FQ-MH-1、XM-MH-1、PY-XMH-1、PY-DMH-2、PY-DMH-1分属于6个不同生境，忍冬不同器官所测化学指标含量不尽相同。绿原酸为金银花>忍冬叶>忍冬藤，木犀草苷为忍冬叶>金银花>忍冬藤，总黄酮和总酚酸为金银花≈忍冬叶>忍冬藤。结果见表5。
所测6种生境的毛花系列样品总体来看，活性成分含量最高者基本来自山东平邑（T3、T4、T5）3个生境，来自河南及河北生境样品的活性成分含量均较低。金银花和忍冬叶中绿原酸含量最高的是采自山东平邑县郑城镇金泰药业种苗基地的样品（T4），含量最低的是河南封丘样品（T2），前者分别是后者的1.3和2.3倍；来源于山东平邑县郑城镇（T6）的忍冬藤中绿原酸含量最高，是含量最低的河南新密样品（T3）的近2.4倍。
3.3.2 不同忍冬品种在同一生境中的活性成分分析 平邑产区样品测定结果见表6。可见，山东平邑县郑城镇的11个样品金银花中绿原酸含量均高于药典规定的1.5%，2个样品（PY-MZ-1、PY-DMY-1）木犀草苷的含量低于药典规定的0.05%，其他样品均符合要求。所有忍冬藤样品的绿原酸含量均远远高于药典规定的0.1%，其中3个样品（PY-XJZ-1、PY-DMH-1、PY-MHZ-1）的绿原酸含量远高于所测样品平均水平。接近半数品种（PY-XJZ-1、PY-HBRD-1、PY-HGZ-1、PY-HGZ-1、PY-DJZ-1、PY-MHZ-1）忍冬叶中绿原酸含量符合山东中药材质量标准要求的1.0%，PY-DMH-1和PY-MZ-1基本符合要求，其余4个品种低于该标准。
3.4 土壤测试指标与忍冬不同器官活性成分的相关性
3.4.1 不同产地土壤测试指标与忍冬不同器官活性成分的相关性 通过分析植株活性成分与土壤指标的关系可极好地指导种植及药材质量控制。将产自六地的16个样品数据使用SPSS19.0统计软件进行相关性分析，结果见表7。数据显示，土壤所测指标对忍冬不同器官的有机活性成分含量影响很小。仅忍冬叶中木犀草苷、总黄酮分别与土壤中的总磷、有机质呈现显著负相关，土壤的pH值与金银花的木犀草苷呈极显著正相关。
3.4.2 平邑产区土壤指标与忍冬不同器官活性成分的相关性 为加强对道地产区的认识，对平邑产区土壤和忍冬样品检测数据使用SPSS19.0统计软件进行相关性分析，结果见表8。
可见，所测土壤指标与金银花中绿原酸含量无显著相关性，土壤中的Zn、Mn、K与金银花中木犀草苷呈显著负相关，速效钾与金银花中总黄酮含量呈显著负相关，有机质与金银花中总酚酸呈显著正相关；忍冬藤中，土壤的pH值与绿原酸含量呈极显著正相关，Mn与木犀草苷、总磷与总酚酸呈显著负相关；忍冬叶中，绿原酸与K呈显著负相关、与Mn呈极显著负相关，总酚酸与Mn、K呈极显著负相关、与Zn呈显著负相关。在所测指标中，Mn对忍冬各器官的影响最广且均为显著负相关，所以，要控制木犀草苷（花和藤）含量、绿原酸（叶）含量、总酚酸（叶）含量最好监控土壤中Mn；其次，K与木犀草苷（花）、绿原酸（叶）、总酚酸（叶）含量呈显著负相关，也要按需监控；土壤pH值仅与忍冬藤中绿原酸含量呈极显著正相关，平邑产区的道地性是否与土壤的pH值有关还需要积累更多样本的数据进一步分析。
4 小结
不同产地、不同品种的忍冬植株各部位主要活性成分含量存在差异，说明忍冬药材质量与产地和品种有关。本研究结果显示，山东平邑样品所含活性成分含量总体水平较高，证实了平邑作为金银花道地产区的合理性。
不同器官对活性成分的累积不同，采收期，忍冬叶中木犀草苷、黄酮类化合物含量显著高于或持平于花中含量，据此可进一步加大叶的开发利用，从而提高资源利用率。根据同一地区不同品种所含活性成分的含量，结合这些品种的成活率、产量等因素，可考虑为本地区适宜栽培品种，仅从活性成分含量考虑，PY-HBRD-1可作为平邑地区的适宜品种。山东平邑作为著名的金银花之乡，种植历史悠久，其土壤偏酸性、总磷含量较高、总氮和速效钾含量低等特点，可能是其成为道地产区的重要原因。对土壤指标与忍冬各器官活性成分相关性研究并没有给出这方面确切的数据支持，可在本研究基础上获取更多样本进行相关研究，以更好地阐明忍冬来源药材的道地性。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：205-206.
[2] 山东省药品监督管理局.山东省中药材标准[M].济南：山东友谊出版社，2002：133-134.
[3] Shang XF， Pan H， Li MX， et al. Lonicera japonica Thunb：Ethnopharmacology， phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2011，138：1-21.
[4] 周凤琴，李佳，冉蓉，等.我国金银花主产区种质资源调查[J].现代中药研究与实践，2010，24（3）：21.
[5] 张百霞，郭庆梅，王真真，等.响应曲面法优化金银花总酚酸提取工艺[J].中成药，2013，35（10）：2144-2148.
[6] 代现平.金银花总黄酮提取工艺的优化研究[J].时珍国医国药，2011， 22（8）：1806-1807.
[7] 赵才政.无机元素对金银花产量质量影响的研究[D].济南：山东中医药大学，2009.
（收稿日期：2014-11-07）
（修回日期：2014-12-25；编辑：陈静）
关键词：忍冬；活性成分；生境土壤
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0080-05
Abstract：Objective To study the effects of planting soil on active ingredients in different organs of Lonicera japonica Thunb.. Methods The contents of active ingredients in Lonicera japonica Thunb. from different origins， different varieties and different organs， such as chlorogenic acid， luteoloside， total flavonoids， total phenolic acid， and soil nutrient and inorganic elements， were detected. The data were analyzed by using SPSS 19.0 software. Results Lonicera japonica Thunb. from Pinyi area in Shandong Province had the highest content of active ingredients. In terms of content of active ingredients， PY-HBRD-1 was the most suitable variety in the Pingyi area. Analysis on the correlation between planting soil and active ingredients showed that the contents of K， Mn and other elements could be used as the index for quality control of Lonicera japonica Thunb.. Conclusion This study could provide guidance for selection of varieties of Lonicera japonica Thunb. in different planting areas， and enrich the materials about researches on producing area of Lonicera japonica.
Key words：Lonicera japonica Thunb.；active ingredient；planting soil
金银花、忍冬藤[1]及忍冬叶[2]是常用的清热解毒中药，来自忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.。研究表明，绿原酸、木犀草苷、总黄酮及总酚酸为其主要活性成分，具有抗病毒、抗氧化等生理活性[3]。本研究在金银花主产区种质资源调查的基础上[4]，对不同产区的毛花系列及道地产区山东平邑不同品种忍冬的不同器官样品中的绿原酸、木犀草苷、总黄酮、总酚酸含量进行测定，同时测量其生境土壤的养分及无机元素含量，通过统计分析揭示土壤对这些活性成分的影响，以期指导种植地区对忍冬品种的选择，并为道地产区研究提供资料。
1 仪器与试药
U-3010 Spectrophotometer紫外可见分光光度计（HITACHI），L-2000 HITACHI高效液相色谱仪。
绿原酸对照品（批号110753-200212）、芦丁对照品（批号100080-200707）、木犀草苷对照品（批号111520-200201），购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇（色谱纯），天津广成公司；其他试剂均为分析纯。
土壤样品于2011年5月采自6个地区，各产区以梅花形布点采集距地面20～40 cm耕层土，及时风干后，用木制器具研磨，充分混合后采用四分法留取1 kg土壤样品，过60目筛，于聚乙烯塑料瓶中避光贮存备用。土壤样品中的T4为冲积平原土壤；T5为麻骨岩风化后形成的土壤，在平邑属于小区环境；T6为棕壤性土，将沙和土分离，仅对土进行分析。同时采集忍冬不同器官样品。植物样品经山东中医药大学周凤琴教授鉴定，均为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾、藤枝及叶。样品用自来水洗净，蒸馏水冲洗2遍，置恒温干燥箱（60 ℃）中干燥，粉碎，过60目筛，置干燥器中备用。样品信息见表1。
2 方法
2.1 植物样品有机活性物质含量测定
总酚酸含量按文献[5]方法测定。总黄酮含量按文献[6]方法测定。绿原酸含量按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ D测定，具体操作方法见“金银花”项下绿原酸含量测定。木犀草苷含量按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ D测定，具体操作方法见“金银花”项下木犀草苷含量测定。 2.2 土壤养分及无机元素的测定
参照文献[7]方法。pH值采用电位测定法，土水比为1∶1。有机质采用重铬酸钾-硫酸氧化，分光光度法测定。总氮采用浓硫酸-高氯酸消化，流动注射分析仪测定。总磷采用浓硫酸-高氯酸消化，紫外分光光度计测定。速效钾采用醋酸铵浸提，火焰光度计测定。锌（Zn）、锰（Mn）、铁（Fe）、钾（K）、铜（Cu）、镁（Mg）采用浓硝酸-高氯酸消化，分光光度法测定。各项指标测定均进行方法学考察，结果均符合药典要求。
3 结果与分析
3.1 土壤养分及无机元素含量
道地产区山东平邑与河南新密产区的土壤整体偏酸性，而河南封丘与河北巨鹿土壤偏碱性或中性，提示pH值可能对金银花道地性有重要影响。河南新密产区虽为山地丘陵，但其有机质含量最高；河南封丘与河北巨鹿两地土壤均采于平原地区，土质肥沃，其有机质含量其次；山东平邑产区地貌多丘陵，土壤较贫瘠，有机质含量低。河南封丘土壤总氮含量较高，河南新密土壤含氮量最少，山东平邑土壤总氮含量总体偏低。山东平邑样品中T5总磷含量最低，T4和T6总磷含量水平均明显高于其他两地，T4总磷含量最高，达到T5的11倍之多，可能是由T5特殊的麻骨岩土壤类型决定的。山东平邑土壤速效钾含量总体低于河南和河北土壤。除Mn外，山东平邑样品T6（棕性土壤）中所测其他5种无机元素含量在6个产区样品中含量最高；所测无机元素在样品T5（麻骨岩土壤）中含量最低或偏低。详见表2。
3.2 土壤养分及无机元素的主成分分析
忍冬生境土壤主成分特征值及初始因子载荷矩阵见表3、表4。
3.3 忍冬植株活性成分含量分析
生境土壤数据经SPSS19.0主成分分析降维至3个主成分，累计贡献率为93.68%，特征值均>1，它们代表了忍冬生境土壤养分及所测无机元素的绝大部分信息。由表4可知，Zn、Mg、Cu、Fe、K与主成分1相关系数较大，说明这几种元素的指标信息为忍冬生境土壤的第一主成分。速效钾、Mn、总氮、pH值与主成分2相关系数较大，为忍冬生境土壤的第二主成分。主成分3反映的主要是有机质的信息。主成分1的贡献率最高，可以作为忍冬生境土壤的特征标识元素。
3.3.1 毛花系列样品在不同生境的活性成分含量分析 毛花系列样品JLLC-JFYH-1、FQ-MH-1、XM-MH-1、PY-XMH-1、PY-DMH-2、PY-DMH-1分属于6个不同生境，忍冬不同器官所测化学指标含量不尽相同。绿原酸为金银花>忍冬叶>忍冬藤，木犀草苷为忍冬叶>金银花>忍冬藤，总黄酮和总酚酸为金银花≈忍冬叶>忍冬藤。结果见表5。
所测6种生境的毛花系列样品总体来看，活性成分含量最高者基本来自山东平邑（T3、T4、T5）3个生境，来自河南及河北生境样品的活性成分含量均较低。金银花和忍冬叶中绿原酸含量最高的是采自山东平邑县郑城镇金泰药业种苗基地的样品（T4），含量最低的是河南封丘样品（T2），前者分别是后者的1.3和2.3倍；来源于山东平邑县郑城镇（T6）的忍冬藤中绿原酸含量最高，是含量最低的河南新密样品（T3）的近2.4倍。
3.3.2 不同忍冬品种在同一生境中的活性成分分析 平邑产区样品测定结果见表6。可见，山东平邑县郑城镇的11个样品金银花中绿原酸含量均高于药典规定的1.5%，2个样品（PY-MZ-1、PY-DMY-1）木犀草苷的含量低于药典规定的0.05%，其他样品均符合要求。所有忍冬藤样品的绿原酸含量均远远高于药典规定的0.1%，其中3个样品（PY-XJZ-1、PY-DMH-1、PY-MHZ-1）的绿原酸含量远高于所测样品平均水平。接近半数品种（PY-XJZ-1、PY-HBRD-1、PY-HGZ-1、PY-HGZ-1、PY-DJZ-1、PY-MHZ-1）忍冬叶中绿原酸含量符合山东中药材质量标准要求的1.0%，PY-DMH-1和PY-MZ-1基本符合要求，其余4个品种低于该标准。
3.4 土壤测试指标与忍冬不同器官活性成分的相关性
3.4.1 不同产地土壤测试指标与忍冬不同器官活性成分的相关性 通过分析植株活性成分与土壤指标的关系可极好地指导种植及药材质量控制。将产自六地的16个样品数据使用SPSS19.0统计软件进行相关性分析，结果见表7。数据显示，土壤所测指标对忍冬不同器官的有机活性成分含量影响很小。仅忍冬叶中木犀草苷、总黄酮分别与土壤中的总磷、有机质呈现显著负相关，土壤的pH值与金银花的木犀草苷呈极显著正相关。
3.4.2 平邑产区土壤指标与忍冬不同器官活性成分的相关性 为加强对道地产区的认识，对平邑产区土壤和忍冬样品检测数据使用SPSS19.0统计软件进行相关性分析，结果见表8。
可见，所测土壤指标与金银花中绿原酸含量无显著相关性，土壤中的Zn、Mn、K与金银花中木犀草苷呈显著负相关，速效钾与金银花中总黄酮含量呈显著负相关，有机质与金银花中总酚酸呈显著正相关；忍冬藤中，土壤的pH值与绿原酸含量呈极显著正相关，Mn与木犀草苷、总磷与总酚酸呈显著负相关；忍冬叶中，绿原酸与K呈显著负相关、与Mn呈极显著负相关，总酚酸与Mn、K呈极显著负相关、与Zn呈显著负相关。在所测指标中，Mn对忍冬各器官的影响最广且均为显著负相关，所以，要控制木犀草苷（花和藤）含量、绿原酸（叶）含量、总酚酸（叶）含量最好监控土壤中Mn；其次，K与木犀草苷（花）、绿原酸（叶）、总酚酸（叶）含量呈显著负相关，也要按需监控；土壤pH值仅与忍冬藤中绿原酸含量呈极显著正相关，平邑产区的道地性是否与土壤的pH值有关还需要积累更多样本的数据进一步分析。
4 小结
不同产地、不同品种的忍冬植株各部位主要活性成分含量存在差异，说明忍冬药材质量与产地和品种有关。本研究结果显示，山东平邑样品所含活性成分含量总体水平较高，证实了平邑作为金银花道地产区的合理性。
不同器官对活性成分的累积不同，采收期，忍冬叶中木犀草苷、黄酮类化合物含量显著高于或持平于花中含量，据此可进一步加大叶的开发利用，从而提高资源利用率。根据同一地区不同品种所含活性成分的含量，结合这些品种的成活率、产量等因素，可考虑为本地区适宜栽培品种，仅从活性成分含量考虑，PY-HBRD-1可作为平邑地区的适宜品种。山东平邑作为著名的金银花之乡，种植历史悠久，其土壤偏酸性、总磷含量较高、总氮和速效钾含量低等特点，可能是其成为道地产区的重要原因。对土壤指标与忍冬各器官活性成分相关性研究并没有给出这方面确切的数据支持，可在本研究基础上获取更多样本进行相关研究，以更好地阐明忍冬来源药材的道地性。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：205-206.
[2] 山东省药品监督管理局.山东省中药材标准[M].济南：山东友谊出版社，2002：133-134.
[3] Shang XF， Pan H， Li MX， et al. Lonicera japonica Thunb：Ethnopharmacology， phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2011，138：1-21.
[4] 周凤琴，李佳，冉蓉，等.我国金银花主产区种质资源调查[J].现代中药研究与实践，2010，24（3）：21.
[5] 张百霞，郭庆梅，王真真，等.响应曲面法优化金银花总酚酸提取工艺[J].中成药，2013，35（10）：2144-2148.
[6] 代现平.金银花总黄酮提取工艺的优化研究[J].时珍国医国药，2011， 22（8）：1806-1807.
[7] 赵才政.无机元素对金银花产量质量影响的研究[D].济南：山东中医药大学，2009.
（收稿日期：2014-11-07）
（修回日期：2014-12-25；编辑：陈静）