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摘要：目的：为了选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物ELISA检测试剂盒。
方法：本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。
结果：三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。
结论：不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行验证。
关键词：ELISA 乙型肝炎病毒 标志物
【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）06-0399-02
为了选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物ELISA检测试剂盒，本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。
1 资料和方法
1.1 研究对象。2012年6月～2012年12月选择在我院门诊接受健康体检的健康者224例，其中男128例，女96例；年龄19～50岁，平均年龄（30.28±11.34）岁。
1.2 研究方法。
1.2.1 检测试剂。对所有受检查者抽取清晨空腹肘静脉血4毫升，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行乙肝病毒血清学检测以确定是否为乙肝病毒携带。检测试剂盒分别购自上海江莱生物科技有限公司（简称江莱），北京万泰生物药业股份有限公司（简称万泰）、英科新创（厦门）科技有限公司（简称新创）。
1.2.2 检测方法。受检者空腹抽血3mL，可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃，1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融[1]。具体操作步骤：①加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）[2]。加样，将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。②温育：用封板膜封板后置37℃温育1h。③小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。④每孔加入80μL的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃孵育30min。⑤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。⑥每孔加入底物A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10min。避免光照。⑦取出酶标板，迅速加入50μL终止液，加入终止液后应立即在酶标仪上测定OD490光吸收读值。测定孔OD值/阴性对照孔OD值（S/N）大于2.1判为阳性。比较3个不同公司ELISA检测与胶体金法检测的一致性。
1.3 数据处理。所有统计均在Windows SPSS17.0中完成，采用方差分析。检验水平α=0.05。
2 结果
从表1可知三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。
3 讨论
我国的HBV感染率高，目前最常见的检测手段是采用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immnosorbent assay，ELISA）测定乙肝标志物，这些标志物具体包括乙肝病毒免疫学标记有表面抗原（HBsAg）和表面抗体（抗HBs或HBsAb）、e抗原（HBeAg）和e抗体（抗HBe或HBeAb）、核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗HBc或HBcAb）。其检测结果常作为临床诊断和治疗乙肝的依据之一。ELISA因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。乙肝标志物的检测的准确性和灵敏度直接影响乙肝病人的诊断和治疗[3]。但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大。本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。研究结果显示三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。这表明不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行验证。
参考文献
[1] 中华医学会肝病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华流行病学杂，2010，32（4）：405-415
[2] 祝继华，严立，陈瀑，等.ELISA法在检测乙肝标志物中的应用和评价[J].重庆医学大学学报，2009，34（10）：1397-1399
[3] 帅军，蓝淑宝，周玉刚，等.潮州市中小学生乙型肝炎流行病学调查及影响因素分析[J].现代预防医学，2012，39（7）：1634-1636
方法：本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。
结果：三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。
结论：不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行验证。
关键词：ELISA 乙型肝炎病毒 标志物
【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）06-0399-02
为了选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物ELISA检测试剂盒，本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。
1 资料和方法
1.1 研究对象。2012年6月～2012年12月选择在我院门诊接受健康体检的健康者224例，其中男128例，女96例；年龄19～50岁，平均年龄（30.28±11.34）岁。
1.2 研究方法。
1.2.1 检测试剂。对所有受检查者抽取清晨空腹肘静脉血4毫升，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行乙肝病毒血清学检测以确定是否为乙肝病毒携带。检测试剂盒分别购自上海江莱生物科技有限公司（简称江莱），北京万泰生物药业股份有限公司（简称万泰）、英科新创（厦门）科技有限公司（简称新创）。
1.2.2 检测方法。受检者空腹抽血3mL，可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃，1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融[1]。具体操作步骤：①加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）[2]。加样，将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。②温育：用封板膜封板后置37℃温育1h。③小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。④每孔加入80μL的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃孵育30min。⑤小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。⑥每孔加入底物A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10min。避免光照。⑦取出酶标板，迅速加入50μL终止液，加入终止液后应立即在酶标仪上测定OD490光吸收读值。测定孔OD值/阴性对照孔OD值（S/N）大于2.1判为阳性。比较3个不同公司ELISA检测与胶体金法检测的一致性。
1.3 数据处理。所有统计均在Windows SPSS17.0中完成，采用方差分析。检验水平α=0.05。
2 结果
从表1可知三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。
3 讨论
我国的HBV感染率高，目前最常见的检测手段是采用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immnosorbent assay，ELISA）测定乙肝标志物，这些标志物具体包括乙肝病毒免疫学标记有表面抗原（HBsAg）和表面抗体（抗HBs或HBsAb）、e抗原（HBeAg）和e抗体（抗HBe或HBeAb）、核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗HBc或HBcAb）。其检测结果常作为临床诊断和治疗乙肝的依据之一。ELISA因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。乙肝标志物的检测的准确性和灵敏度直接影响乙肝病人的诊断和治疗[3]。但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大。本研究对市场上在售的三个不同公司的ELISA试剂盒进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，比较三个厂家的ELISA检测试剂盒的阳性检出率及与金标法的一致性。研究结果显示三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性率有明显差别（F=4.21，P<0.05）。三个不同厂家试剂盒乙肝病毒感染检测阳性血清经金标试纸检测后阳性结果分别为24、19、27人。这表明不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异，临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行验证。
参考文献
[1] 中华医学会肝病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华流行病学杂，2010，32（4）：405-415
[2] 祝继华，严立，陈瀑，等.ELISA法在检测乙肝标志物中的应用和评价[J].重庆医学大学学报，2009，34（10）：1397-1399
[3] 帅军，蓝淑宝，周玉刚，等.潮州市中小学生乙型肝炎流行病学调查及影响因素分析[J].现代预防医学，2012，39（7）：1634-1636