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目的:
探究TGF-β1联合BMSCs修复大鼠脊髓急性损伤的可行性。
方法:
1.通过全骨髓贴壁培养法获得第4-7代SD大鼠BMSCs并检测性质。在体外培养细胞的生长增殖过程中加入不同浓度的TGF-β1,用分光光度计在450nm波长处测定CCK-8(Cell Counting Kit-8)的光密度值(OD值),检测TGF-β1对BMSCs增殖能力的影响。2.在BMSCs长到融合成单层状态时进行划痕实验,通过软件对同一视野细胞不同时间的迁移后图像进行分析处理,对比空白组和TGF-β1处理组BMSCs的迁移率来检测TGF-β1对BMSCs迁移能力的影响。3.以活细胞染色剂CM-Dil对BMSCs进行荧光标记,采用SD大鼠建立脊髓急性钝挫伤模型,蛛网膜下腔注射单纯BMSCs和经TGF-β1处理的BMSCs,通过组织切片的检测荧光来对比到达损伤脊髓处的速度以及HE染色来观察脊髓损伤后组织学变化,同时在不同时间段以Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分为标准检测单纯BMSCs和经TGF-β1处理的BMSCs修复大鼠脊髓损伤的效果,探究TGF-β1联合BMSCs修复脊髓急性损伤的可行性。
结果:
1.体外增殖实验OD值结果显示极低浓度的TGF-β1对BMSCs增殖具有促进作用,但高浓度TGF-β1对BMSCs增殖不起作用甚至抑制增殖。2.划痕实验结果显示中高浓度TGF-β1对BMSCs迁移具有促进作用。3.在大鼠脊髓损伤修复实验中,荧光显微镜下2周的切片显示经TGF-β1处理的BMSCs比单纯BMSCs更早到达损伤部位,不同时间段各组切片HE染色及BBB评分均表明联合治疗组疗效最好。单用细胞组次之,空白组最差。
结论:
1.BMSCs可促进脊髓急性不完全性损伤的修复,是良好的种子细胞。2.在体外实验中,不同浓度TGF-β1可影响BMSCs的增殖及迁移能力,低浓度促进其增殖,中高浓度抑制增殖但促进迁移。3.在体内实验中,中高浓度TGF-β1同样可以提高BMSCs的迁移能力,使之能够更快到达脊髓的损伤部位并能更早地进行脊髓修复。4.TGF-β1联合BMSCs来修复脊髓急性损伤具有一定疗效。
探究TGF-β1联合BMSCs修复大鼠脊髓急性损伤的可行性。
方法:
1.通过全骨髓贴壁培养法获得第4-7代SD大鼠BMSCs并检测性质。在体外培养细胞的生长增殖过程中加入不同浓度的TGF-β1,用分光光度计在450nm波长处测定CCK-8(Cell Counting Kit-8)的光密度值(OD值),检测TGF-β1对BMSCs增殖能力的影响。2.在BMSCs长到融合成单层状态时进行划痕实验,通过软件对同一视野细胞不同时间的迁移后图像进行分析处理,对比空白组和TGF-β1处理组BMSCs的迁移率来检测TGF-β1对BMSCs迁移能力的影响。3.以活细胞染色剂CM-Dil对BMSCs进行荧光标记,采用SD大鼠建立脊髓急性钝挫伤模型,蛛网膜下腔注射单纯BMSCs和经TGF-β1处理的BMSCs,通过组织切片的检测荧光来对比到达损伤脊髓处的速度以及HE染色来观察脊髓损伤后组织学变化,同时在不同时间段以Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分为标准检测单纯BMSCs和经TGF-β1处理的BMSCs修复大鼠脊髓损伤的效果,探究TGF-β1联合BMSCs修复脊髓急性损伤的可行性。
结果:
1.体外增殖实验OD值结果显示极低浓度的TGF-β1对BMSCs增殖具有促进作用,但高浓度TGF-β1对BMSCs增殖不起作用甚至抑制增殖。2.划痕实验结果显示中高浓度TGF-β1对BMSCs迁移具有促进作用。3.在大鼠脊髓损伤修复实验中,荧光显微镜下2周的切片显示经TGF-β1处理的BMSCs比单纯BMSCs更早到达损伤部位,不同时间段各组切片HE染色及BBB评分均表明联合治疗组疗效最好。单用细胞组次之,空白组最差。
结论:
1.BMSCs可促进脊髓急性不完全性损伤的修复,是良好的种子细胞。2.在体外实验中,不同浓度TGF-β1可影响BMSCs的增殖及迁移能力,低浓度促进其增殖,中高浓度抑制增殖但促进迁移。3.在体内实验中,中高浓度TGF-β1同样可以提高BMSCs的迁移能力,使之能够更快到达脊髓的损伤部位并能更早地进行脊髓修复。4.TGF-β1联合BMSCs来修复脊髓急性损伤具有一定疗效。