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本文通过观察HO-1活性改变对肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响来探讨HO-1在肿瘤增殖中的作用。
首先构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mtHO-1G143H。利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2，以空载体转染作为对照组。通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系。经半定量RT-PCR和Western blot方法检测稳转细胞系中HO-1mRNA和蛋白的表达水平。利用分光光度法检测两种稳转细胞系中HO-1的活性。结果表明，野生型和突变型HO-1的HepG2稳转细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平均明显高于对照组，实现了HO-1在HepG2细胞中的稳定过表达。野生型HO-1的稳转细胞系中HO-1活性明显高于对照组；而突变型HO-1的稳转细胞系中HO-1活性低于对照组。成功制作了HO-1活性增高和降低的细胞模型。在HO-1活性改变的稳转细胞系中，利用半定量RT-PCR检测细胞周期调控因子CDK2、CyclinD、CyclinE、p53、p27 mRNA表达水平。结果表明CyclinE、p27mRNA表达水平发生了改变，HO-1高活性细胞系与HO-1低活性细胞系中的p27、CyclinE在mRNA的表达水平与对照细胞存在差异。与对照组相比，HO-1高活性细胞系的p27mRNA的表达水平增高，而HO-1低活性细胞系没有明显改变。HO-1高活性细胞系与HO-1低活性细胞系的CyclinEmRNA水平与对照组相比均降低。
以上结果初步提示我们HO-1的活性可能与细胞周期的调控存在联系，HO-1的高表达有可能会影响肝癌细胞的细胞周期发生改变，从而影响细胞的增殖能力，但其具体机制还需进一步深入研究。