柊叶和阔叶箬竹叶的品种鉴定、安全性评价和抗慢性酒精肝、胃损伤的作用及机制研究

来源 :贵州中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangxiaoxi21
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目的:
  对柊叶和阔叶箬竹叶进行生药学研究,明确性状、显微及薄层鉴别特征;并通过检测重金属含量、农药残留量和急性毒性来评价其安全性,从而为柊叶和阔叶箬竹叶品种的生药鉴定以及应用的安全性提供依据。利用防醉酒试验,研究柊叶和阔叶箬竹叶的解酒作用及其机制;并建立慢性酒精肝损伤大鼠模型,研究柊叶和阔叶箬竹叶的保肝、护胃作用及机制,以期为柊叶和阔叶箬竹叶解酒、保肝、护胃功能的临床应用及开发提供科学依据。
  方法:
  1.以美人蕉和淡竹叶为对照,分别研究柊叶和阔叶箬竹叶的叶片外观性状特征和横纵切片、叶表皮、粉末的显微特征;并采用薄层色谱法,优化提取条件、展开系统,分析各样品薄层图谱斑点的差异,建立柊叶和阔叶箬竹叶的薄层色谱鉴别方法。
  2.分别采用电感耦合等离子体发射光谱法和原子荧光光谱法测定柊叶和阔叶箬竹叶中铜、铅、镉和汞、砷的含量,并参照2015版《中国药典》第四部农药残留量测定法第一法项下“有机氯类农药残留量测定法”,检测柊叶和阔叶箬竹叶中9种有机氯农药残留量,从外源性毒性成分角度评价其安全性:然后采用最大给药量1日内给药2次,观察给药后14d内小鼠的生理状况、体重变化,于14天后检测各组小鼠血清中天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、肌酸激酶(CK)、血肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)等指标,并观察各组心、肝、脾、肺和肾的病理变化,研究柊叶和阔叶箬竹叶的急性毒性。
  3.利用急性酒精中毒小鼠模型,记录各组小鼠醉酒数、死亡数、醉酒和醒酒时间评价柊叶和阔叶箬竹叶的解酒效果,并分别采用顶空气相色谱法和Elisa法对具有解酒作用的粽子叶组,小鼠酒后1h、2h和3h全血中乙醇浓度及肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)的含量进行检测,初步探讨其解酒机制。
  4.建立慢性酒精肝损伤大鼠模型,分别检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、丙二醛(MDA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肝脏中ALT、AST、AKP和胃髓过氧化物酶(MPO)、前列腺素2(PGE2)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量;计算大鼠肝脏指数,并观察大鼠肝脏和胃的病理切片,研究柊叶和阔叶箬竹叶的保肝、护胃作用;并分别采用RT-PCR和Western Blot法,检测肝脏NF-KB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,对其保肝的相关机制进行初步探讨。
  结果:
  1.柊叶与美人蕉的药材性状较为相似,但柊叶的叶片稍长:阔叶箬竹叶上表面无毛,下表面密被毛茸,而淡竹叶上下表面均有稀疏的毛茸。美人蕉区别于柊叶的显微特征在于美人蕉有显著的细胞裂隙和棕色块;淡竹叶的栅栏组织与海绵组织过主脉,阔叶箬竹叶不过主脉。在环己烷-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶1)展开剂下,Rf值为0.086~0.195处,美人蕉有两个明显的蓝色荧光斑点区别于棒叶;在环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(13∶6∶1∶0.7)展开剂下,Rf值为0.545~0.774处淡竹叶有3个红色斑点区别于阔叶箬竹叶。
  2.除网店购买的2批阔叶箬竹叶中铜元素超出规定值近100倍外,所有样品中铅、镉、砷、汞的含量均小于《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》的规定;而所有样品中α-BHC、β-BHC、γ-BHC等9种常见有机氯的农药残留量均符合《中国药典》规定:阔叶箬竹叶(网店)组给药30min后,部分小鼠出现安静,怠动,大便稀溏等现象,给药4h后,3只小鼠出现死亡,其余给药组小鼠未见异常。各给药组小鼠血清中ALT、AST、BUN、AKP、CRE、CK水平均在正常值范围内,各组心、肝、脾、肺和肾的病理切片也均未发现异常。
  3.柊叶具有较好的延长小鼠醉酒时间和缩短醒酒时间的作用,且低剂量效果较好,阔叶箬竹叶对延长小鼠醉酒时间和缩短醒酒时间效果不明显:除柊叶中剂量组外,其余各组小鼠给酒后1h和2h的血中乙醇浓度均高于模型组,以柊叶低剂量效果最为明显;各组小鼠给酒后1h、2h和3h肝脏中ADH的含量均高于模型组,除柊叶低剂量组外,其余各组小鼠给酒后1h、2h和3h肝脏中ALDH的含量均高于模型组。
  4.柊叶和阔叶箬竹叶均可以降低慢性酒精肝损伤大鼠血清中IL-6、IL-8、TGF-β、TNF-α和MDA的水平,也能显著降低肝脏中ALT、AST水平和降低胃中MPO及升高PGE2、SOD水平,柊叶和阔叶箬竹叶均能降低肝脏中AKP的水平;柊叶和阔叶箬竹叶能减轻慢性酒精肝损伤造成的肝脏炎症细胞浸润、肝细胞点状坏死和肝脂肪变性,减轻胃炎症细胞浸润、腺上皮细胞空泡变性和粘膜出血、水肿;阔叶箬竹叶低剂量组能够极显著性降低大鼠肝脏中NF-κB mRNA的表达水平(P<0.01),阔叶箬竹叶中剂量组和柊叶低剂量组能够显著降低大鼠肝脏中NF-κB mRNA的表达水平(P<0.05);柊叶和阔叶箬竹叶低剂量组能够极显著性降低大鼠肝脏中NF-κB p65蛋白表达量(P<0.01),阔叶箬竹叶中剂量组能够显著性降低大鼠肝脏中NF-κB p65蛋白表达量(P<0.05)。
  结论:
  1.明确了柊叶与美人蕉,阔叶箬竹叶与淡竹叶性状、显微和薄层特征,为柊叶和阔叶箬竹叶的品种鉴定提供科学依据。
  2.除网店购买的2批阔叶箬竹叶外,其余样品较为安全。
  3.阔叶箬竹叶解酒效果不明显,而柊叶具有较好的解酒作用,其机制可能与提高肝脏中ADH和ALDH的活性,加快乙醇的代谢,从而降低小鼠血中乙醇浓度有关,发挥解酒的作用。
  4.柊叶和阔叶箬竹叶具有抗酒精性肝损伤作用,其机制是与降低血清IL-6、IL-8、TGF-β1、TNF-α、MDA和肝脏中ALT、AST、AKP水平,以及抑制NF-κB mRNA和蛋白的表达有关,从而发挥抗酒精性肝损伤作用;柊叶和阔叶箬竹叶具有抗酒精性胃损伤作用,其机制是通过降低血清IL-6、IL-8、TGF-β1、TNF-α、MDA和降低胃中MPO及升高PGE2、SOD水平有关,从而发挥抗酒精性胃损伤作用。
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