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海洋微生物作为活性代谢产物的重要来源,近年来已成为国际上的研究热点。在这些海洋微生物中,海洋真菌是发现结构特异、具有生物活性的天然产物的重要源泉。随着研究的深入,越来越多的来自海洋真菌的活性产物不断被发现。
YS4108菌(Phoma herbarum)为本实验室采用多种活性追踪方法分离得到的一株海洋真菌,从其菌丝体中提取分离到一种多糖YCP,具有较高的免疫促进作用,可作为肿瘤治疗的辅助用药进行开发。
本文对YS4108产生抗肿瘤多糖YCP的发酵条件进行了研究,确定了最佳摇瓶发酵条件为:28℃,1000 mL摇瓶装液量400 mL,初始pH6.0,转速120 r/min,发酵时间为七天。在此条件下,YCPc(YCP粗多糖)产量为110 mg/L。在摇瓶试验的基础上,对该菌发酵生产YCP做了初步的放大研究(10 L生物反应器、400L种子罐和4000 L发酵罐)。结果表明4000 L发酵罐生产YCP的适宜工艺条件为:4000 L发酵罐计料2500 L,加入消泡剂0.2%(V/V),初始pH6.0~6.2,温度27~29℃,通气量1:0.5,搅拌速率60 rpm,罐压0.05 Mpa,发酵时间80h左右。在此条件下,YCPc产量为257 mg/L,约为摇瓶发酵的2.3倍。同时,通过中试放大,我们得到了YS4108菌工业化生产的生长过程曲线、基质消耗曲线、pH变化曲线、YCP粗品随时间变化的曲线,为进一步深入研究打下基础。
本文还对海洋真菌YS4108发酵产物进行了初步的研究。将YS4108发酵液(约80L)用乙酸乙酯进行萃取,得到粗浸膏34g。然后用硅胶柱层析、凝胶层析(Sephadex LH-20)和HPLC等分离方法对粗浸膏进行分离。总共分离到5个化合物,运用MS、NMR等波谱方法对其中的4个化合物进行了结构鉴定,其中化合物2首次在真菌中分离得到。