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目的
以生物活性为向导,从中草药白花蛇舌草水溶性提取物中寻找神经保护成分,为开发白花蛇舌草神经药理作用做初步研究。
方法
采用以水为溶剂的提取方法从白花蛇舌草中提取出天然活性成分,利用硅胶反复柱层析方法分离纯化提取物;选用新生Wistar大鼠原代培养海马神经元的谷氨酸细胞毒性模型来筛选神经保护成分,借助于共聚焦显微镜结合钙荧光指示剂Flou-3-AM观察各筛选物对海马神经元[Ca<2+>]i的影响。
结果
经过对白花蛇舌草水提取物的不同溶剂萃取部位的筛选,发现乙酸乙酯部位和正丁醇部位对神经元细胞均有较强的保护作用。这两个部位+谷氨酸组细胞内[Ca<2+>]i与对照组比较均明显下降,且差异均有显著性。对乙酸乙酯部位进行进一步提取分离,分得两个单体成分(化合物Ⅰ与化合物Ⅱ)和一浅黄色粉末(混合物Ⅲ),经进一步研究发现不同浓度的两单体+谷氨酸组细胞内[Ca<2+>]i与对照组比较均明显下降:0.1、1、10μg/mL化合物Ⅰ+谷氨酸组细胞内[Ca<2+>]i与谷氨酸组相比分别降低了0.32±0.05,0.41±0.06和0.43±0.09,差异均有显著性(P<0.05);0.1、1、10μg/mL化合物Ⅱ+谷氨酸组细胞内[Ca<2+>]i与谷氨酸组相比分别降低了0.15±0.07,0.28±0.02和0.45±0.06,差异均有显著性(P<0.05)。化合物Ⅰ和化合物Ⅱ经进一步鉴定为齐墩果酸和熊果酸。
结论
白花蛇舌草水提液的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位均具有神经保护作用;乙酸乙酯部位分离得到的具有神经保护活性两个化合物,经鉴定为齐墩果酸和熊果酸。