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目的： 观察艾灸肾俞穴延缓衰老效应，探索长期艾灸肾俞穴的安全性，通过检测p16基因DNA甲基化水平的变化，以阐释灸法延缓衰老的作用机理，为艾灸肾俞穴延缓衰老的临床运用提供科学证据。 方法： 先将20只12月龄雄性SD大鼠随机分为24月龄对照组（自然衰老组）、艾灸组。并择时另购两批大鼠作为12月龄对照组、18月龄对照组，与24月龄对照组、艾灸组大鼠同时取材。12月龄对照组、18月龄对照组分别作为壮年对照组、早衰对照组，与24月龄对照组作为对照组不进行干预，艾灸组在12月龄时采用温和灸单侧肾俞穴（左右穴位交替进行艾灸）每日1次，每次灸20min，连续艾灸12月。实验结束后采用ELISA法检测大鼠外周血肾功能指标尿素氮(Blood UreaNitrogen，BUN)和血清肌酐(Creatinine，Cre)，硫代巴比妥酸法(Thiobarbituricacid，TBA)法检测大鼠外周血丙二醛(Malondialdehyde，MDA)水平;采用实时荧光定量PCR技术(RealtimeQuantitativePCR，qRT-PCR)检测各组大鼠肾组织p16基因mRNA表达水平;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肾组织中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、P16免疫阳性。采用甲基化特异性PCR技术(Methylation specific PCR，MSP)的方法检测各组大鼠肾组织p16基因DNA甲基化情况。 结果: 1.在实验过程中，艾灸组大鼠死亡一只，最后纳入统计大鼠数量为9只(n=9)，24月龄对照组大鼠死亡2只，最后纳入统计大鼠数量为8只(n=8)，12月龄对照组与18月龄对照组没有死亡，最后纳入统计大鼠数量均为10只。12月龄组大鼠毛发色白，有光泽，精神状态饱满，活动敏捷。18月龄组大鼠毛色略欠光泽，但是精神状态饱满，活动敏捷。24月龄对照组大鼠毛发枯黄，卷曲，甚至打结，无光泽，精神状态不振，易激惹，同时出现活动减少，行动迟缓。艾灸组大鼠毛发色泽、精神状态及日常活动较24月龄对照组均表现出不同程度改善。 2.各组大鼠肾功能指标检测显示:与12月龄对照组大鼠比较，18月龄对照组大鼠、24月龄对照组大鼠血清Cre水平升高，有统计学差异(P＜0.05);与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠血清Cre水平降低，但没有统计学差异(P＞0.05)。与12月龄对照组大鼠比较，18月龄对照组大鼠、24月龄对照组大鼠血清BUN水平显著升高，有统计学差异(P＜0.01);与18月龄对照组比较，24月龄对照组大鼠血清BUN水平显著升高，有统计学差异（P＜0.01）;与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠血清BUN水平显著降低，有统计学差异（P＜0.01）。 3.与12月龄对照组大鼠比较，24月龄对照组大鼠肾组织SOD免疫阳性平均光密度值(Average Optical Density，AOD)(AOD=IOD/area)显著降低，有统计学差异(P＜0.01);与18月龄对照组大鼠比较，24月龄对照组大鼠肾组织SOD免疫阳性AOD值明显降低，有统计学差异（P＜0.01）;与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠肾组织SOD免疫阳性AOD值显著升高，有统计学差异(P＜0.01）。与12月龄对照组大鼠比较，18月龄对照组和24月龄对照组大鼠血清MDA水平显著升高，有统计学差异（P＜0.01）;与18月龄对照组大鼠比较，24月龄对照组大鼠血清MDA水平明显升高，有统计学差异(P＜0.01）;与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠血清MDA水平显著降低，有统计学差异(P＜0.01）。 4.与12月龄对照组大鼠比较，18月龄对照组大鼠与24月龄对照组大鼠肾组织P16免疫阳性AOD值显著升高，有统计学差异(P＜0.01);与18月龄对照组比较，24月龄对照组大鼠肾组织P16免疫阳性AOD值升高，有统计学差异(P＜0.01);与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠肾组织P16免疫阳性AOD值降低，有统计学差异(P＜0.05）。与12月龄对照组大鼠比较，24月龄对照组大鼠肾组织p16基因mRNA表达水平显著升高，且有统计学差异(P＜0.01);与18月龄对照组大鼠比较，24月龄对照组大鼠肾组织p16基因mRNA表达水平显著升高，有统计学差异(P＜0.01）;与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠肾组织p16基因mRNA表达水平明显降低，有统计学差异。 5.与12月龄对照组大鼠比较，18月龄对照组大鼠肾组织p16基因DNA甲基化水平未发生改变，24月龄对照组大鼠肾组织p16基因DNA甲基化水平降低，与24月龄对照组大鼠比较，艾灸组大鼠肾组织p16基因DNA甲基化水平升高。 结论： 1.艾灸肾俞穴可以改善自然衰老大鼠的一般状态。 2.长期艾灸肾俞穴不会造成大鼠肾功能的损伤，可通过降低大鼠血清BUN水平达到保护大鼠肾功能的作用。 3.艾灸肾俞穴可降低大鼠血清MDA含量、增加肾组织中SOD的蛋白表达水平，提高抗氧化的能力，延缓衰老。 4.艾灸肾俞穴可降低自然衰老大鼠肾组织P16蛋白的表达水平以延缓衰老。 5.艾灸肾俞穴可增加自然衰老大鼠肾组织p16基因DNA甲基化水平，降低p16的转录水平以延缓衰。