【摘 要】
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本实验以东北林蛙(Rana dybowskii)为研究材料，利用毕赤酵母GS115真核表达系统构建东北林蛙皮肤抗菌肽重组表达体系，分析评价重组dybowskin-1ST对六种常见致病菌大肠埃希氏菌（E.
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本实验以东北林蛙(Rana dybowskii)为研究材料，利用毕赤酵母GS115真核表达系统构建东北林蛙皮肤抗菌肽重组表达体系，分析评价重组dybowskin-1ST对六种常见致病菌大肠埃希氏菌（E.coli）、绿假单胞菌（Paeruginosa）、肠炎沙门氏菌（S.enteritidis）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、肺炎克雷伯氏杆菌（K.pneumoniae）的抗微生物特性。
本实验采用TRIzol法提取蛙皮肤总RNA，RT-PCR技术扩增获得皮肤抗菌肽dybowskin-lST基因，目的基因与His6双链连接为His6-dybowskin-lST，将其克隆至质粒pPIC9K，获得重组质粒pPIC9K-lST。pPIC9K-l ST电转化入毕赤酵母菌GS115中，筛选高表达dybowskin-l ST重组菌株。甲醇诱导重组菌株表达上清液，SDS-PAGE电泳检测其目的肽dybowskin-1 ST的分泌表达。Ni-Agarose色谱柱分离纯化目的肽，HPLC鉴定其分离纯化效果。微生物活性检测结果显示，重组dybowskin-1ST对E.coli、P.aeruginosa、S.enteritidis、S.aureus、B.cereus、K.pneumoniae均有较好抗菌活性。
本研究成功构建了东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST真核表达体系，并获得了稳定表达。抗微生物试验结果显示用基因工程法体外表达的重组dybowskin-1ST对G+和G-细菌均具有较强的抑杀作用，表明东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST具有良好的广谱抗菌活性和潜在的研发价值。
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