TaqMan技术快速定量检测血清中人巨细胞病毒的感染

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人类巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染非常普遍,大多数呈临床不显性感染或潜伏感染.但在免疫力低下的特殊人群,如孕妇、婴幼儿、移植受体、肿瘤患者中,会引起严重后果.它是引起孕妇流产和新生儿先天畸形、发育迟缓的主要病原体.该课题采用实时TaqMan技术建立了快速定量检测血清中的人巨细胞病毒(HCMV)感染的反应体系.该体系在HCMV保守性的Major IE exon4基因区段设计了一对引物和一条Taqman探针,在LightCycler及Rotor-Gene定量检测仪上平行检测HCMV-DNA.试验证明,以PCR模板浓度来定义,敏感性达到10<2>拷贝/μ L,线性范围为10<2>~10<8>拷贝/μ L.该体系具有很好的稳定性,在不同检测仪器上的定量结果具有一致性,可以相互比较,不仅可取代现用的定性方法,更克服了以前的定量方法缺乏统一标准,在不同试验室结果不同的缺陷.应用该方法与ELISA法对40例临床婴幼儿患者血清同时进行HCMV检测,结果显示TaqMan法与ELISA法相关性不高,前者更适于HCMV感染早期的定量检测,提示该法可应用于无症状或轻微症状的病患以及AIDS患者等免疫力低下人群的HCMV检测,尤其可用于孕妇及新生儿筛查,有助于优生优育,在HCMV疗效监测和评估中也有良好的应用前景.
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