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目的：通过蛞蝓抗大鼠支气管哮喘作用和对小鼠止咳化痰作用研究，探讨其抗支气管哮喘作用机制，筛选蛞蝓止咳化痰活性成分。建立以活性成分为指标的含量测定方法，为蛞蝓质量控制体系的建立及蛞蝓药材的综合利用提供实验依据。
方法：1.将40只SD大鼠随机分为6组，每组8只，分别为正常组、模型组、地塞米松组、蛞蝓高剂量组、蛞蝓低剂量组。除正常组外，其余各组于实验第1、8天腹腔注射10%OVA溶液1mL，第8天追加臀部皮下注射10%OVA溶液0.2mL致敏塑造支气管哮喘大鼠模型，正常组注射等体积生理盐水。第15天开始，将大鼠放于超声雾化箱，超声雾化喷入2%OVA生理盐水10mL激发3周，每次雾化30min，每日一次，正常组用生理盐水代替2%OVA，记录哮喘潜伏期。激发前1h，给予药物灌胃干预，给药剂量分别为地塞米松组1mg·kg-1、蛞蝓高剂量组92mg·kg-1、蛞蝓低剂量组23mg·kg-1、正常组给予同等体积生理盐水（给药体积0.01mL·g-1）。末次激发后，10%水合氯醛麻醉大鼠，按要求采集标本，采用ELISA法测定大鼠血清及BALF的LT、IL-4、IFN-γ含量；部分肺组织行病理切片，HE染色，观察肺组织结构及炎症浸润；采用免疫组化法测PTEN蛋白表达含量；采用RT-PCR法测肺组织中PTENmRNA含量；2.取48只昆明小鼠，分为6组，每组8只，分别为正常对照组、咳必清组、蛞蝓提取物高、低剂量组、多糖高、低剂量组，灌胃给药，给药剂量分别为咳必清50mg·kg-1、蛞蝓提取物高剂量300mg·kg-1、蛞蝓提取物低剂量100mg·kg-1、多糖高剂量组200mg·kg-1、多糖低剂量组50mg·kg-1、正常组给予等体积生理盐水。给药5天后以20%氨气引咳，记录3min内小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数；取48只昆明小鼠，分组及给药剂量同上，盐酸氨溴索组给药剂量为100mg·kg-1，给药5天后腹腔注射5%酚红，检测小鼠气管段酚红排泌量，初步筛选蛞蝓止咳化痰活性成分；3.采用显微鉴别法、薄层色谱法对蛞蝓药材进行定性鉴别；参照2015年版《中国药典》四部通则下“水分检测法”、“灰分检测法”、“浸出物检测法”检测不同产地蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物等相关项目；采用苯酚-硫酸比色法，对不同产地蛞蝓药材多糖含量进行测定。
结果：1.与模型组相比，地塞米松组、蛞蝓高剂量组均能延长大鼠哮喘潜伏期（P<0.05）；与正常组比较，模型组大鼠血清及BALF中LT、IL-4含量增加，IFN-γ含量减少（P<0.05）；与模型组比较，地塞米松组、蛞蝓提取物高组大鼠血清中LT、IL-4含量明显下降，IFN-γ含量上升（P<0.05）；地塞米松组、蛞蝓提取物高、低剂量组大鼠BALF中LT、IL-4含量明显下降，IFN-γ含量上升（P<0.05）；HE染色可见，正常组大鼠肺组织、支气管上皮结构完整，管腔内无炎症物质渗出，肺泡大小正常，无粘连，无炎性分泌物；模型组大鼠支气管上皮可见明显脱落坏死，支气管壁增厚，支气管周围炎性浸润严重，管腔变小，腔内炎症物质聚集，肺泡壁粘连增厚，肺泡数减少，肺泡腔内可见炎性分泌物；地塞米松组、蛞蝓高和低剂量组支气管壁轻度增厚，腔内炎性物质减少，支气管上皮无脱落坏死，肺泡壁粘连减轻；大鼠肺组织支气管PTEN蛋白表达免疫组织化学染色结果显示，正常组大鼠肺组织支气管周围PTEN大量表达，地塞米松组，蛞蝓提取物高剂量组PTEN蛋白表达减少，蛞蝓低剂量组、模型组肺组织PTEN蛋白表达呈弱阳性；PCR结果显示，与模型组相比，地塞米松组、蛞蝓高剂量组大鼠肺组织PTENmRNA含量增多（P<0.05）。2.与正常对照组相比，咳必清组、蛞蝓提取物组、多糖组小鼠咳嗽次数明显减少、咳嗽潜伏期延长（P<0.05）；与正常对照组相比，盐酸氨溴索组、多糖高剂量组小鼠酚红排泌量明显增加（P<0.05）；3.采用显微鉴别、薄层鉴别法对不同产地的蛞蝓进行定性鉴别，结果显示不同产地的蛞蝓性状特征，斑点位置、颜色均大致相同；不同产地蛞蝓各项检查项目符合规定；建立了采用UV法测定蛞蝓多糖含量测定方法，方法学考察结果显示该方法精密度、稳定性、重复性和加样回收试验均符合《中国药典》相关标准。
结论：1.通过建立支气管哮喘大鼠模型，考察蛞蝓提取物对支气管哮喘的治疗作用，结果显示蛞蝓提取物抗支气管哮喘效果显著，其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子平衡，上调PTEN表达有关；2.蛞蝓具有明显止咳化痰作用，初步确定蛞蝓的止咳化痰主要活性成分为多糖；3.建立了蛞蝓鉴别方法；制定了蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的参考限量；建立了蛞蝓多糖含量测定方法。
方法：1.将40只SD大鼠随机分为6组，每组8只，分别为正常组、模型组、地塞米松组、蛞蝓高剂量组、蛞蝓低剂量组。除正常组外，其余各组于实验第1、8天腹腔注射10%OVA溶液1mL，第8天追加臀部皮下注射10%OVA溶液0.2mL致敏塑造支气管哮喘大鼠模型，正常组注射等体积生理盐水。第15天开始，将大鼠放于超声雾化箱，超声雾化喷入2%OVA生理盐水10mL激发3周，每次雾化30min，每日一次，正常组用生理盐水代替2%OVA，记录哮喘潜伏期。激发前1h，给予药物灌胃干预，给药剂量分别为地塞米松组1mg·kg-1、蛞蝓高剂量组92mg·kg-1、蛞蝓低剂量组23mg·kg-1、正常组给予同等体积生理盐水（给药体积0.01mL·g-1）。末次激发后，10%水合氯醛麻醉大鼠，按要求采集标本，采用ELISA法测定大鼠血清及BALF的LT、IL-4、IFN-γ含量；部分肺组织行病理切片，HE染色，观察肺组织结构及炎症浸润；采用免疫组化法测PTEN蛋白表达含量；采用RT-PCR法测肺组织中PTENmRNA含量；2.取48只昆明小鼠，分为6组，每组8只，分别为正常对照组、咳必清组、蛞蝓提取物高、低剂量组、多糖高、低剂量组，灌胃给药，给药剂量分别为咳必清50mg·kg-1、蛞蝓提取物高剂量300mg·kg-1、蛞蝓提取物低剂量100mg·kg-1、多糖高剂量组200mg·kg-1、多糖低剂量组50mg·kg-1、正常组给予等体积生理盐水。给药5天后以20%氨气引咳，记录3min内小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数；取48只昆明小鼠，分组及给药剂量同上，盐酸氨溴索组给药剂量为100mg·kg-1，给药5天后腹腔注射5%酚红，检测小鼠气管段酚红排泌量，初步筛选蛞蝓止咳化痰活性成分；3.采用显微鉴别法、薄层色谱法对蛞蝓药材进行定性鉴别；参照2015年版《中国药典》四部通则下“水分检测法”、“灰分检测法”、“浸出物检测法”检测不同产地蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物等相关项目；采用苯酚-硫酸比色法，对不同产地蛞蝓药材多糖含量进行测定。
结果：1.与模型组相比，地塞米松组、蛞蝓高剂量组均能延长大鼠哮喘潜伏期（P<0.05）；与正常组比较，模型组大鼠血清及BALF中LT、IL-4含量增加，IFN-γ含量减少（P<0.05）；与模型组比较，地塞米松组、蛞蝓提取物高组大鼠血清中LT、IL-4含量明显下降，IFN-γ含量上升（P<0.05）；地塞米松组、蛞蝓提取物高、低剂量组大鼠BALF中LT、IL-4含量明显下降，IFN-γ含量上升（P<0.05）；HE染色可见，正常组大鼠肺组织、支气管上皮结构完整，管腔内无炎症物质渗出，肺泡大小正常，无粘连，无炎性分泌物；模型组大鼠支气管上皮可见明显脱落坏死，支气管壁增厚，支气管周围炎性浸润严重，管腔变小，腔内炎症物质聚集，肺泡壁粘连增厚，肺泡数减少，肺泡腔内可见炎性分泌物；地塞米松组、蛞蝓高和低剂量组支气管壁轻度增厚，腔内炎性物质减少，支气管上皮无脱落坏死，肺泡壁粘连减轻；大鼠肺组织支气管PTEN蛋白表达免疫组织化学染色结果显示，正常组大鼠肺组织支气管周围PTEN大量表达，地塞米松组，蛞蝓提取物高剂量组PTEN蛋白表达减少，蛞蝓低剂量组、模型组肺组织PTEN蛋白表达呈弱阳性；PCR结果显示，与模型组相比，地塞米松组、蛞蝓高剂量组大鼠肺组织PTENmRNA含量增多（P<0.05）。2.与正常对照组相比，咳必清组、蛞蝓提取物组、多糖组小鼠咳嗽次数明显减少、咳嗽潜伏期延长（P<0.05）；与正常对照组相比，盐酸氨溴索组、多糖高剂量组小鼠酚红排泌量明显增加（P<0.05）；3.采用显微鉴别、薄层鉴别法对不同产地的蛞蝓进行定性鉴别，结果显示不同产地的蛞蝓性状特征，斑点位置、颜色均大致相同；不同产地蛞蝓各项检查项目符合规定；建立了采用UV法测定蛞蝓多糖含量测定方法，方法学考察结果显示该方法精密度、稳定性、重复性和加样回收试验均符合《中国药典》相关标准。
结论：1.通过建立支气管哮喘大鼠模型，考察蛞蝓提取物对支气管哮喘的治疗作用，结果显示蛞蝓提取物抗支气管哮喘效果显著，其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子平衡，上调PTEN表达有关；2.蛞蝓具有明显止咳化痰作用，初步确定蛞蝓的止咳化痰主要活性成分为多糖；3.建立了蛞蝓鉴别方法；制定了蛞蝓水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的参考限量；建立了蛞蝓多糖含量测定方法。