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朱砂，为硫化物类矿物辰砂族辰砂（HgS≥98％），是一种常用中药矿物药。近年来，朱砂的药理作用和安全性之间的关系受到广泛的关注，虽然取得了一定的研究进展，但是朱砂中的汞在机体内的吸收、代谢、药理和毒理机制尚不十分清楚。血液是机体运输氧气、营养物质和代谢产物的重要媒介，血液中蛋白质被认为是运载药物到组织器官的有效载体。因此，研究朱砂在血液中的汞结合蛋白质，有利于理解朱砂在机体中的代谢、转化和药理毒理机制。为此，本文主要采用色谱分离技术、量子化学计算方法和细胞分子生物学实验方法，对朱砂中汞在大鼠血中的结合蛋白、可能性结合位点的结合方式及汞-人血清白蛋白复合物对神经小胶质N9细胞的影响开展相关研究。主要研究结果如下:
从血浆和红细胞中分离纯化分别得到16个和2个含汞蛋白质组分。其中，3个血浆含汞蛋白质组分经高效体积排阻色谱检验发现其分子量分布均一，且被胰酶酶解-液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)方法鉴定为血清转铁蛋白。
Hg2+能与转铁蛋白铁离子结合位点的氨基酸残基发生相互作用，但其稳定性低于Fe3+。Hg2+在人血清白蛋白Asp249位点处形成五配位，在Cys34位点处形成四配位，且Hg2+在Asp249位点形成的复合物比Cys34稳定。另外，Hg2+与转铁蛋白和人血清白蛋白的结合常数分别为1.7×10-3和6×10-4M。
2ng/mL MeHg-HSA和15ng/mL HgCl2-HSA能显著激活N9细胞，即促进细胞增殖，增加NO和细胞Ca2+的水平，抑制IL-1β和TNF-α的释放;2μg/mLMeHg-HSA和15μg/mL HgCl2-HSA对N9细胞具有细胞毒作用，显著降低细胞活力，增加IL-1β和TNF-α的分泌，且上述作用主要通过ERK/MAPKs和STAT3信号通路实现。
本论文系统分析了朱砂灌胃后在血液中的汞结合蛋白质，在量子化学理论水平上研究了Hg2+与2种主要汞结合蛋白质的结合方式，并探索了2种主要的汞-人血清白蛋白复合物对神经小胶质N9细胞的生物效应。这些研究结果有助于理解朱砂在机体中的代谢机制，并为进一步研究朱砂的生物效应及其作用机制提供理论依据和技术支持。
从血浆和红细胞中分离纯化分别得到16个和2个含汞蛋白质组分。其中，3个血浆含汞蛋白质组分经高效体积排阻色谱检验发现其分子量分布均一，且被胰酶酶解-液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)方法鉴定为血清转铁蛋白。
Hg2+能与转铁蛋白铁离子结合位点的氨基酸残基发生相互作用，但其稳定性低于Fe3+。Hg2+在人血清白蛋白Asp249位点处形成五配位，在Cys34位点处形成四配位，且Hg2+在Asp249位点形成的复合物比Cys34稳定。另外，Hg2+与转铁蛋白和人血清白蛋白的结合常数分别为1.7×10-3和6×10-4M。
2ng/mL MeHg-HSA和15ng/mL HgCl2-HSA能显著激活N9细胞，即促进细胞增殖，增加NO和细胞Ca2+的水平，抑制IL-1β和TNF-α的释放;2μg/mLMeHg-HSA和15μg/mL HgCl2-HSA对N9细胞具有细胞毒作用，显著降低细胞活力，增加IL-1β和TNF-α的分泌，且上述作用主要通过ERK/MAPKs和STAT3信号通路实现。
本论文系统分析了朱砂灌胃后在血液中的汞结合蛋白质，在量子化学理论水平上研究了Hg2+与2种主要汞结合蛋白质的结合方式，并探索了2种主要的汞-人血清白蛋白复合物对神经小胶质N9细胞的生物效应。这些研究结果有助于理解朱砂在机体中的代谢机制，并为进一步研究朱砂的生物效应及其作用机制提供理论依据和技术支持。