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明胶是医药、食品工业和化工等行业中重要的原材料,因此寻找安全可用的无污染明胶资源已经成为当今世界的首要问题。中医传统中胶类中药有补虚、止血的功效,现代研究也发现其有补血和止血的双向调节作用,由高原独有的牦牛皮制成的牦牛皮胶具有绿色环保、营养丰富、机械性能优良等优点,因此牦牛皮胶有着巨大的开发前景。
本文通过研究牦牛皮胶对环磷酰胺致贫血小鼠的红系血象参数、脾脏结构、脾脏淋巴细胞及骨髓基质细胞等的影响,对血小板活化作用的影响。确定了牦牛皮胶发挥补血和止血作用的主要组分和最佳给药剂量和给药时间,初步探讨了牦牛皮胶对血液红系细胞及骨髓有核细胞的影响,对血小板活化作用的影响。
主要结论如下:
1、采用腹腔注射环磷酰胺80mg/kg,连续给药4天的方式成功建立再生障碍性贫血模型。模型小鼠体质量、外周血象及胸腺系数显著降低,脾脏系数显著升高;脾脏切片发现,红髓和白髓的界限模糊,脾脏淋巴细胞减少。牦牛皮胶给药后发现,小鼠贫血状况得到明显改善,逐渐趋近正常小鼠。其中2g/kg/d牦牛皮胶给药组给药7、14、21天,红细胞数、血红蛋白、红细胞比容、平均血红蛋白量及平均血红蛋白浓度显著升高(P<0.05),脾脏淋巴细胞增多,白髓与红髓的界限变清晰;给药14天时牦牛皮胶各剂量组能显著提高贫血小鼠的红系血象参数。确定牦牛皮胶最佳的给药剂量为2g/kg/d,最佳给药天数为14天。
2、不同组分的牦牛皮胶给药后,牦牛皮胶0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分可显著升高贫血小鼠的外周血象、胸腺系数、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力、骨髓有核细胞的数目及增殖能力(P<0.05),降低脾脏系数和EPO含量(P<0.05),提示牦牛皮胶的小分子组分是起补血作用的主要有效部位。
3、体外测定不同组分的牦牛皮胶对脾脏淋巴细胞增殖的影响,发现牦牛皮胶0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分能促进活化后的脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05),可发挥增强免疫的功效。
4、体外测定不同组分的牦牛皮胶对骨髓基质细胞的影响,发现牦牛皮胶可通过影响骨髓基质细胞的周期、粘附和迁移能力达到促进骨髓基质细胞增殖的作用,其中0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分能显著促进骨髓基质细胞粘附和迁移(P<0.05),使得更多的骨髓基质细胞进入分裂期。
5、通过对不同组分的牦牛皮胶给药后的小鼠出血和凝血时间、血清中P-选择素的表达量及大鼠PRP中GpⅠa/Ⅱa、GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的含量,CD62P活化率的测定,发现各牦牛皮胶给药组P-选择素的表达量、GpⅠa/Ⅱa、GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的含量均有增加(P<0.05)。其中牦牛皮胶0.1-0.22μm组分能显著提高大鼠PRP中GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的表达水平(P<0.05),促进了血小板活化早期的颗粒内容物释放,各牦牛皮胶给药组中血小板活化所依赖的颗粒膜蛋白(CD62P)的水平均显著提高(P<0.05)。因此,认为牦牛皮胶0.1-0.22μm组分通过促进血小板活化,加速血小板粘附-变构-释放-聚集的过程来引起血小板聚集。
本文通过研究牦牛皮胶对环磷酰胺致贫血小鼠的红系血象参数、脾脏结构、脾脏淋巴细胞及骨髓基质细胞等的影响,对血小板活化作用的影响。确定了牦牛皮胶发挥补血和止血作用的主要组分和最佳给药剂量和给药时间,初步探讨了牦牛皮胶对血液红系细胞及骨髓有核细胞的影响,对血小板活化作用的影响。
主要结论如下:
1、采用腹腔注射环磷酰胺80mg/kg,连续给药4天的方式成功建立再生障碍性贫血模型。模型小鼠体质量、外周血象及胸腺系数显著降低,脾脏系数显著升高;脾脏切片发现,红髓和白髓的界限模糊,脾脏淋巴细胞减少。牦牛皮胶给药后发现,小鼠贫血状况得到明显改善,逐渐趋近正常小鼠。其中2g/kg/d牦牛皮胶给药组给药7、14、21天,红细胞数、血红蛋白、红细胞比容、平均血红蛋白量及平均血红蛋白浓度显著升高(P<0.05),脾脏淋巴细胞增多,白髓与红髓的界限变清晰;给药14天时牦牛皮胶各剂量组能显著提高贫血小鼠的红系血象参数。确定牦牛皮胶最佳的给药剂量为2g/kg/d,最佳给药天数为14天。
2、不同组分的牦牛皮胶给药后,牦牛皮胶0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分可显著升高贫血小鼠的外周血象、胸腺系数、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力、骨髓有核细胞的数目及增殖能力(P<0.05),降低脾脏系数和EPO含量(P<0.05),提示牦牛皮胶的小分子组分是起补血作用的主要有效部位。
3、体外测定不同组分的牦牛皮胶对脾脏淋巴细胞增殖的影响,发现牦牛皮胶0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分能促进活化后的脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05),可发挥增强免疫的功效。
4、体外测定不同组分的牦牛皮胶对骨髓基质细胞的影响,发现牦牛皮胶可通过影响骨髓基质细胞的周期、粘附和迁移能力达到促进骨髓基质细胞增殖的作用,其中0.1-0.22μm及0.1μm以下的组分能显著促进骨髓基质细胞粘附和迁移(P<0.05),使得更多的骨髓基质细胞进入分裂期。
5、通过对不同组分的牦牛皮胶给药后的小鼠出血和凝血时间、血清中P-选择素的表达量及大鼠PRP中GpⅠa/Ⅱa、GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的含量,CD62P活化率的测定,发现各牦牛皮胶给药组P-选择素的表达量、GpⅠa/Ⅱa、GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的含量均有增加(P<0.05)。其中牦牛皮胶0.1-0.22μm组分能显著提高大鼠PRP中GpⅡb/Ⅲa和GpⅣ的表达水平(P<0.05),促进了血小板活化早期的颗粒内容物释放,各牦牛皮胶给药组中血小板活化所依赖的颗粒膜蛋白(CD62P)的水平均显著提高(P<0.05)。因此,认为牦牛皮胶0.1-0.22μm组分通过促进血小板活化,加速血小板粘附-变构-释放-聚集的过程来引起血小板聚集。