【摘 要】
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目的研究枸杞中拟除虫菊酯类农药残留ELISA快速检测的方法。 方法 （1）以间苯氧基苯甲酸（PBA）为半抗原，分别用碳二亚胺、羰基二咪唑法偶联牛血清蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）制备免疫
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目的研究枸杞中拟除虫菊酯类农药残留ELISA快速检测的方法。 方法 （1）以间苯氧基苯甲酸（PBA）为半抗原，分别用碳二亚胺、羰基二咪唑法偶联牛血清蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）制备免疫抗原（PBA-BSA）和检测抗原（PBA-OVA）。 （2）用制得的免疫抗原 PBA-BSA 免疫 Balb/c 小鼠，四次免疫后选择效价最高、对 PBA 识别能力最强的小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞在聚乙二醇（PEG4000）作用下融合，经竞争抑制 ELISA 筛选及有限稀释法进行亚克隆，分离阳性细胞株，获得稳定分泌抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株，采用腹水诱导法大量制备单克隆抗体并经纯化后测定小鼠腹水抗体亚型及其效价。 （3）分别采用ELISA法和GC-MS/MS法测定农药与枸杞样本中拟除虫菊酯类农药含量，对比抗体酶联免疫法与仪器分析法测定拟除虫菊酯类农药残留量的异同。 结果 （1）采用碳二亚胺法与羰基二咪唑法分别将 PBA 与载体蛋白 BSA 同 OVA偶联，得到浓度为6.25 mg/mL的PBA-BSA与PBA-OVA偶联物各10 mg，经SDS-PAGE凝胶电泳显示，PBA-BSA与PBA-OVA抗原均偶联成功。 （2）将PBA-BSA偶联物免疫小鼠，获得分泌抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株，分别为2E9-A5-F5、1G7-F6-D1、1G7-F6-G4。选择 1G7-F6-D1 接种小鼠生产抗体，所产抗体亚类为IgG 1，抗体效价为1∶256000。 （3）采用ELISA法和GC-MS/MS法对比分析拟除虫菊酯类农药残留含量。ELISA法检测到枸杞中菊酯类农药残留总量为0.5809 mg/kg；GC-MS/MS法测得枸杞中农药残留结果为氯氰菊酯0.0753 mg/kg，氰戊菊酯0.0792 mg/kg，溴氰菊酯0.0854 mg/kg，三种农药残留总量为0.2399 mg/kg，采用单克隆抗体ELISA法检测菊酯类农药残留较GC-MS/MS 法检测菊酯类农药残留量高，可能是由于单克隆抗体 ELISA 法检测到的是所有具有间苯氧基苯甲酸结构的菊酯类农药，GC-MS/MS法仅检测到指定的菊酯类农药残留量。 结论 枸杞中菊酯类农药单克隆抗体作为一种广谱性抗体，可以同时检测母核含有间苯氧基苯甲酸的所有拟除虫菊酯类农药，为该类农药的快速检测奠定了基础。
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