【摘 要】
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问荆（Equisetum arvense L.,Equ.）是一种民间常用的植物药,含有多种黄酮成分。目前对于其黄酮的系统药理效应研究较少。本课题以本实验室分离的问荆总黄酮（Total Flavonoids of Equ.,ETF）为材料,研究问荆对脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激因子、炎症因子、内质网应激因子的影响,并从CYP450s和相关核受体途
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问荆（Equisetum arvense L.,Equ.）是一种民间常用的植物药,含有多种黄酮成分。目前对于其黄酮的系统药理效应研究较少。本课题以本实验室分离的问荆总黄酮（Total Flavonoids of Equ.,ETF）为材料,研究问荆对脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激因子、炎症因子、内质网应激因子的影响,并从CYP450s和相关核受体途径探讨其作用机制,主要研究结果如下:1.ETF的提取和分离纯化纤维素酶法提取ETF的最佳工艺:酶浓度0.52%、时间51 min、温度49℃、料液比25:1、乙醇浓度80%。D-101树脂纯化得51.76%的总黄酮。2.ETF对LPS肝损伤小鼠的保护作用（1）对肝脏的影响:通过腹腔注射LPS建立小鼠急性肝损伤模型,通过检测脏器指数、肝功能和组织病理切片,评价ETF对肝脏的作用。结果显示:ETF可显著降低肝损伤小鼠的肝脏器指数;可显著降低小鼠血清中AST、ALT和ALP活性;且能有效减缓肝组织的病变情况。（2）对氧化应激及炎症因子的影响:使用试剂盒法测定各组小鼠肝脏中各因子表达情况。结果显示:ETF升高LPS小鼠肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性,降低丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（i NOS）等自由基含量;显著下调肝脏中白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α等促炎因子基因和蛋白表达,上调抗炎因子IL-10蛋白表达。（3）对内质网应激影响:使用荧光定量PCR（RT-PCR）和Western-blot法分别检测各因子的基因和蛋白表达情况。结果显示:ETF下调半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和葡萄糖调节蛋白（GRP）-78基因及蛋白表达,抑制内质网应激。3.ETF对LPS小鼠肝脏CYP450s和相关核受体的影响（1）对CYP450s的影响:分别使用“鸡尾酒法”检测体外酶活力,RT-PCR和Western-blot法分别检测CYP450s基因和蛋白表达情况。结果显示:ETF能抑制CYP1A2和2E1 m RNA和蛋白表达及酶活力;诱导CYP2D22和3A11基因和蛋白表达及酶活力。（2）对核受体的影响:使用RT-PCR和Western-blot法分别检测核受体的基因和蛋白表达情况。ETF上调组成型雄烷受体（CAR）和孕烷X受体（PXR）基因和蛋白表达;显著下调芳香烃受体（Ah R）蛋白表达。以上结果揭示问荆总黄酮对LPS诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其保肝机制可能与影响CYP450s的表达及酶活力有关。
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