论文部分内容阅读
目的： 乳腺癌是一个世界范围内严重危害妇女健康的恶性肿瘤，在女性恶性肿瘤中其发病率和死亡率均居首位。全世界每年约有130万妇女发生乳腺癌，50万妇女死于乳腺癌，目前，世界乳腺癌发病率仍呈不断上升趋势。尽管我国为乳腺癌低发国家，但是在我国一些大城市乳腺癌均已跃居在女性恶性肿瘤的首位，而且，发病呈不断上升趋势。乳腺癌已经成为人类健康的重大威胁。 乳腺癌的发生和发展与许多基因和蛋白质的表达密切相关，是一个复杂的多步骤过程。近几年来，全基因组关联分析(GWAS)迅猛开展[27]。其中最为著名的是Easton等[28]由英、美等国组成的科研小组于2007年发表在《Nature》上的一项研究，研究者首先运用全基因组关联策略分析了390例家族性乳腺癌和364例健康对照人群，找到了12711个初步相关的SNP;接着在3990个病例和3916个对照中检测了这些SNP，并最后通过21860个病例和22578个对照的研究，发现了30个有意义的SNP。在以上3个阶段的研究中，有5个位点的P值始终小于10-7。其中4个位点对应的基因分别是MAP3K1、FGFR2、LSP1、TNRC9(或者LOC643714);而第5个位点位于8q24，尚无明确的基因对应。其中有3种基因参与调控细胞的生长，而与癌症关联最大的是成纤维细胞生长因子受体Ⅱ(FGFR2)。研究表明，大约有1/6的妇女携带2个有缺陷的FGFR2基因副本，这些人罹患乳腺癌的风险比其他人高40-60％，她们终生都有患乳腺癌的可能性。这些新的易感位点，有的与乳腺癌风险候选基因相关，有的则完全无关，新位点为乳腺癌发生的致病通路提供了新的研究角度，揭示了之前被忽略的潜在通路。 本研究主要分析了乳腺密度与乳腺癌易感基因FGFR2 rs2981582、TNRC9rs3803662及rs12443621、LSP1 rs3817198这些异常基因和位点的相关性，探讨乳腺癌的遗传背景及发病机制，旨在从生物学机制方面对女性乳腺癌病因学进行探讨，同时调查黑龙江地区女性乳腺癌遗传及其相关危险因素情况。为乳腺癌的三级预防提供线索，并为乳腺癌高危人群筛查和防治提供理论依据。 方法： 1、收集所有参与实验患者外周血，提取DNA，根据Easton通过全基因组相关研究发现并发表于2007年Nature的与乳腺癌发病相关的基因FGFR2、TNRC9、LSP1基因的4个SNP位点分别设计1对PCR引物和Taqman探针，进行实时荧光PCR扩增，对各位点进行分型。 2、采用病例-对照组的方法，对105例乳腺癌患者和382例健康妇女进行研究，分析年龄等一般情况对乳腺癌患病风险的影响及FGFR2 rs2981582、TNRC9rs3803662及rs12443621、LSP1 rs3817198基因型分布、采用logistic回归分析计算，用OR值及CI值进一步估计并阐明位点SNP与乳腺癌发病风险之间的关系。 3、根据美国放射学会(American College of Radiology)提出的第四版乳腺影像报告和数据系统(BI-RADS)对X线透过乳腺组织衰减总的描述，乳腺的致密程度可分为:脂肪型、少量腺体型、多量腺体型、致密型。本研究共采集乳腺癌病例组图像99例、健康对照组图像220例。并采用logistic回归分析病例-对照组乳腺密度的差异，用OR值及CI值进一步估计并阐明乳腺密度与位点SNP之间的关系。 结果： 1.病例-对照组比较分析一般情况对乳腺癌发病风险的影响 本研究共获得有效样本487例，其中乳腺癌病例105例，对照例382例。病例组与对照组的平均年龄相似，分别为51.28±11.29岁和49.91±4.02岁，无统计学意义(P=0.134)。病例组的初潮年龄小于对照组(P=0.022)，有统计学意义，初潮年龄早增加乳腺癌发病风险。本次研究中未发现绝经年龄与乳腺癌的发病风险性有关(P=2.291)。哺乳情况，病例组的母乳喂养史较对照组时间短(P=0.00)，有统计学意义;无母乳喂养史者增加乳腺癌发病风险(P=0.009)。生育史，病例组分娩数少于对照组(p=0.03)，有统计学意义;无生育史者增加乳腺癌发病风险(P=0.006)。本研究中，流产史的有无及流产个数与本研究中人群乳腺癌的发病风险不相关(P=0.4,P=0.976)。 2.FGFR2 rs2981582、TNRC9 rs3803662、TNRC9 rs12443621以及LSP1rs3817198基因型与乳腺癌易感性分析 2.1 本研究共收集487例样本，在正常对照组中，FGFR2 rs2981582 A、TNRC9rs3803662 T、TNRC9 rs12443621 G以及LSP1 rs3817198 C等位基因频率分别为0.67，0.495，0.219和0.166;在病例组中等位基因频率分别为0.79、0.395、0.176和0.104。 2.2 FGFR2 rs2981582、TNRC9 rs12443621两个多态位点的基因型频率分布在病例组和对照组之间差异均有统计学意义(P值分别为0.006，0.017)。结果显示与TNRC9rs12443621野生型纯合子相比，变异型杂合子(AG)和变异性纯合子(GG)均与乳腺癌的发病危险性相关（AG基因型OR=2.017，95％CI=0.910-4.471;GG基因型OR=2.684，95％CI=1.318-5.463），其变异基因型可显著增加乳腺癌的患病风险。对于FGFR2 rs2981582，与其野生纯合子相比，变异型杂合子和变异性纯合子均与乳腺癌的发病危险性不相关并作为保护因子降低中国黑龙江地区女性乳腺癌的发病风险。(GA基因型OR=0.444，95％CI=0.262-0.752; AA基因型OR=0.579，95％CI=0.342-0.983)。采用多因素Logistic回归对年龄、初潮年龄、绝经年龄、哺乳史、生育史进行调整计算TNRC9 rs12443621变异基因型致乳腺癌的发病风险性，结果TNRC9 rs12443621多态性与乳腺癌危险性之间有统计学意义，其变异基因型可显著增加乳腺癌的患病风险（AG基因型的调整OR=0.621，95％CI=0.075-5.129; GG基因型的调整OR=1.569，95％CI=0.233-10.556）。 2.3 TNRC9 rs3803662、LSP1 rs3817198两个位点的基因型分布在病例和对照组间均没有统计学差异(P=0.408，0.116)，与乳腺癌的发病不相关。 3.乳腺密度与乳腺易感基因SNP的相关性分析 3.1 共获得乳腺癌病例组图像90例，健康对照组图像229例，其中乳腺癌组脂肪型8例、少量腺体型27例、多量腺体型51例、致密型4例;病例组脂肪型8例、少量腺体型101例、多量腺体型114例、致密型6例。 3.2 病例对照组乳腺密度差异对乳腺癌发病风险的影响，根据两组独立样本的秩和检验，得出x2值为4.4530，P值为0.0348＜0.05,差别有统计学意义，乳腺密度的增加，乳腺癌的发病风险增加。 3.3 FGFR2 rs2981582的变异型纯合子AA基因型能降低乳腺密度(P=0.0092，95％=0.334-0.926)。采用多因素Logistic回归对年龄、初潮年龄、绝经年龄、哺乳史、生育史进行调整计算显示基因FGFR2rs2981582的变异型纯合子AA基因型仍有统计学意义(P=0.0154，95％ CI=0.294-0.893)。 结论: 1、病例-对照组的一般情况研究中，初潮年龄早、未哺乳及哺乳时间短、未生育及分娩数少与乳腺癌的发病风险相关，本研究中绝经年龄、流产史与乳腺癌的发病风险无相关性。 2、TNRC9 rs12443621基因的多态性可增加中国黑龙江地区女性罹患乳腺癌的危险性，其可作为检测中国黑龙江地区妇女乳腺癌易感性的重要生物标志物。 3、FGFR2 rs2981582基因的多态性作为保护因子可降低中国黑龙江地区女性乳腺癌的发病风险。 4、乳腺致密度增加中国黑龙江地区女性罹患乳腺癌的发病风险。 5、FGFR2 rs2981582AA基因型可以降低中国黑龙江地区女性乳腺密度。