【摘 要】
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贮精能力是指精子进入输卵管后能保存在贮精腺中,母鸡持续产受精蛋的时长,它是母鸡繁殖性状中的一个重要性状。若母鸡的贮精能力高,则会增加输精间隔、减少输精对母鸡的应激、减少人工成本。本研究以欣华鸡B、C、D三品系(共889只)为实验对象,揭示了欣华鸡贮精能力的变异及部分高、低贮精能力母鸡的生理差异。首先测定三系的贮精能力、选留贮精能力高的后代并分析三系之间及各系内的贮精能力差异情况;其次采集D系中高、
【基金项目】
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国家自然科学基金(32072707);
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贮精能力是指精子进入输卵管后能保存在贮精腺中,母鸡持续产受精蛋的时长,它是母鸡繁殖性状中的一个重要性状。若母鸡的贮精能力高,则会增加输精间隔、减少输精对母鸡的应激、减少人工成本。本研究以欣华鸡B、C、D三品系(共889只)为实验对象,揭示了欣华鸡贮精能力的变异及部分高、低贮精能力母鸡的生理差异。首先测定三系的贮精能力、选留贮精能力高的后代并分析三系之间及各系内的贮精能力差异情况;其次采集D系中高、低贮精能力母鸡子宫阴道结合部(Utero vaginal junction,UVJ)组织进行非标定量(Label-free)蛋白组学分析,筛选差异蛋白并寻找与高、低贮精能力相关的候选蛋白;最后检测候选蛋白在转录水平的表达情况并挑选HSPA4,检测其在翻译水平的表达,同时检测基因多态性,并探究其与贮精能力性状的关系。主要结果如下:1.为探究B、C、D三系的贮精能力,完成了三系的贮精能力测定、高贮精能力母鸡后代的选留及以下7个指标的统计:最长受精天数、受精蛋数、有效受精天数、最大连产受精蛋数、受精率1(17天内受精率)、受精率2(最长天数内受精率)、受精率3(有效天数内受精率)。发现除了受精率2、受精率3,其它指标在B、C、D间均存在显著差异(D>C>B,P<0.05)。2.通过计算各系各指标的重复力来研究反映贮精能力指标的稳定性及其遗传规律。发现多数指标在各系中的重复力处于0.20~0.60之间,其中受精蛋个数、最大连产受精蛋数的重复力较大处于中等偏上水平(接近0.60),表明可以考虑用这两个指标来评判贮精能力。同时发现各指标在各系内个体间存在不同程度的变异,结合重复力,我们可以得出B、C、D三系的贮精能力性状具备遗传改良潜质。3.使用Label-free蛋白组学方法,构建D系高、低贮精能力母鸡UVJ组织的差异蛋白表达谱,寻找差异蛋白。本次共得到153个差异显著的蛋白,60个在低贮精能力组中上调,93个在高贮精能力组中上调。GO分析结果显示差异蛋白主要富集在应激反应、细胞对应激的反应、有机物分解、细胞分解代谢、蛋白质的分解代谢等生物过程。主要的通路有:过氧化物酶体增殖物激活受体、细胞的衰老、细胞黏附分子、过氧化物酶体、药物代谢-其它酶。确定的候选蛋白有HSPA4、IFIT5、BF2、TMEM173、ACSL4、ANXA7、LGALS2,它们可能与SST保存精子有关。4.为了检测挑选的候选蛋白在转录水平是否有差异,在高、低贮精能力母鸡UVJ组织中检测7个候选基因的m RNA表达量。结果显示:其转录水平表达差异情况与蛋白组结果一致。同时利用Western-blot检测HSPA4蛋白的表达量,结果显示:高贮精能力组HSPA4蛋白相对表达量有高于低组的趋势,但未达到显著水平(P=0.062)。5.利用设计引物的方法对鸡的HSPA4和IFIT5全长及上游2k bp序列进行分段扩增,并采用DNA混池测序方法检测SNPs,在HSPA4基因上发现81个,IFIT5基因上发现20个。挑选HSPA4上的5个SNPs与贮精能力性状进行关联,其中g.17853192A>C和g.17864249A>G这两个位点与最大连产受精蛋个数显著关联(P<0.05)。综上所述,本次研究利用不同指标来评判欣华鸡B、C、D(共889只)三系的贮精能力,这些指标多数具有中等重复力(0.3~0.6),说明该性状具有遗传选育价值。同时通过Label-free蛋白组学筛选到了与贮精能力相关的候选蛋白,并在转录组水平对HSPA4等7个基因进行验证,结果与蛋白组数据一致。最后,在HSPA4基因上发现两个SNPs与最大连产受精蛋个数显著关联。本研究为贮精能力性状的基础研究以及该性状的遗传改良提供宝贵的参考材料。
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