【摘 要】
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猪链球菌病（Porcine Streptococcosis）是严重危害养猪业的重大传染性疾病之一,主要引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎等症状,同时它也是一种人畜共患病,极大威胁着公共卫生安全。疫苗接种是我国目前控制此病的重要手段,但由于猪链球菌的血清型众多,且各型之间缺乏交叉保护作用,能预防多种血清型感染的疫苗开发难度较大。目前已有的灭活疫苗一般只能保护同源猪链球菌的感染,而传统方法筛选的天然弱毒疫
【基金项目】
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国家重点研发计划（2017YFD0500204）；
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猪链球菌病（Porcine Streptococcosis）是严重危害养猪业的重大传染性疾病之一,主要引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎等症状,同时它也是一种人畜共患病,极大威胁着公共卫生安全。疫苗接种是我国目前控制此病的重要手段,但由于猪链球菌的血清型众多,且各型之间缺乏交叉保护作用,能预防多种血清型感染的疫苗开发难度较大。目前已有的灭活疫苗一般只能保护同源猪链球菌的感染,而传统方法筛选的天然弱毒疫苗又存在潜在的毒力返强的危险,因此亟需开发安全有效的新型疫苗来防控多种血清猪链球菌的感染。本实验室前期工作构建的猪链球菌Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19突变株,是在2型强毒株SC19的基础上敲除了荚膜多糖（CPS）和毒力相关因子分泌型核酸酶A（Ssn A）,并突变了溶血素（SLY）的353位点使其丧失溶血活性,从而得到的弱毒菌株。由于该菌株没有荚膜包裹,其内部潜在的通用型抗原得以充分暴露,因此可能具有针对不同血清型猪链球菌感染的交叉保护作用,具有开发为通用型疫苗的潜力。因此,本研究首先评估了Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19突变株对细胞的毒性和对小鼠的致病力,然后用该菌株制备的弱毒疫苗及灭活疫苗分别免疫C57小鼠,随后从体内和体外角度分析了这两种疫苗对猪链球菌2型和9型的保护效果。研究结果如下:（1）Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19突变株的生长特性与SC19相似,但对A549细胞的毒性无明显毒性,且腹腔注射4×10~9CFU的突变株仍未造成小鼠的发病和死亡,说明Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19突变株对C57小鼠的致病力显著下降。（2）用该突变株作为弱毒疫苗免疫小鼠,诱导了显著的体液免疫和细胞免疫,并产生了具有显著调理活性的抗体。小鼠攻毒实验发现,弱毒疫苗抑制了2型猪链球菌SC19感染引起的炎症反应、组织损伤和死亡,保护率为100%;同时也降低了9型猪链球菌感染引起的炎症反应和组织损伤,特别是降低了血脑屏障的损伤和脑膜炎的发生率,最终保护了50%的小鼠免于死亡。（3）将该突变株经甲醛灭活并添加弗氏不完全佐剂进行乳化,免疫小鼠后,诱导了显著的体液免疫和细胞免疫,并产生了具有显著调理活性的抗体。小鼠攻毒实验发现,灭活疫苗抑制了2型猪链球菌SC19感染引起的炎症反应、组织损伤和死亡,保护率为75%;同时也降低了9型猪链球菌感染引起的炎症反应和组织损伤,保护率为100%。综上所述,本研究通过对细胞的毒性实验和对小鼠的致病性实验证明了Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19突变株的毒力显著下降,并通过一系列的免疫保护实验证明该菌株制备的弱毒疫苗和灭活疫苗具有较好的免疫原性,可刺激机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫,并产生了具有调理活性的抗体,可交叉保护不同血清型猪链球菌的感染,因此Δcps/ssna-msly（P353L）-SC19具有开发为通用型弱毒疫苗或灭活疫苗的潜力。通过上述研究,有助于为猪链球菌通用型疫苗的开发提供实践依据。
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