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目的:
银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病。典型皮损为鳞屑性红斑及筛状出血,难以根治,常给患者身心健康带来严重的影响,是皮肤科重点疾病之一。微血管生成异常与银屑病的发生、持续存在及复发有密切关系。本课题以人真皮微血管内皮细胞HDMEC为模型,研究临床治疗银屑病的经验方凉血活血胶囊对微血管异常生成及相关基因Ang2表达的影响,明确其治疗银屑病血热证的作用机制,为临床治疗疾病提供理论指导。
方法:
(1)以鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)为模型观察凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的影响；
(2)采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(Phorbol-12-Myristate-13-Acetate,PMA)诱导的人真皮微血管内皮细胞株(Human Dermal Microvascular Endothelial Cells,HDMEC)异常增生模型,以CCK-8比色法测定凉血活血胶囊含药血清对其增殖的影响；
(3)采用transwell细胞迁移实验观察凉血活血胶囊含药血清对HDMEC迁移活性的影响；
(4)采用体外管腔形成方法观察凉血活血胶囊含药血清对HDMEC管腔形成能力的影响；
(5)采用RT-PCR方法检测凉血活血胶囊含药血清对HDMEC细胞Ang2mRNA表达的影响。
结果:
(1)与相同浓度的空白血清组相比,5％、10％、15％的凉血活血胶囊含药血清均在不同程度上抑制CAM血管新生(分别p<0.05,p<0.01)；
(2)凉血活血胶囊含药血清对HDMEC增殖也表现出一定的抑制作用(分别p<0.05,p<0.01)；
(3)凉血活血胶囊含药血清均可抑制HDMEC的迁移(p<0.01)；
(4)凉血活血胶囊含药血清可显著抑制HDMEC的管腔形成(p<0.01)；
(5)RT-PCR方法检测中,在mRNA水平上,给药前单纯bFGF或PMA诱导,HDMEC细胞Ang2 mRNA表达较对照组(未诱导组)增多(分别p<0.01)；无诱导组、bFGF诱导组、PMA诱导组中,不同浓度的凉血活血胶囊含药血清在一定程度上抑制HDMEC细胞Ang2 mRNA表达(p<0.01,p<0.05)。
结论:
本研究成功制备了鸡胚绒毛尿囊膜模型及模拟了银屑病微血管异常生成的细胞模型,观察到凉血活血胶囊含药血清可抑制CAM血管新生、对异常HDMEC的增殖、迁移、微血管管腔形成、内皮细胞相关基因Ang2 mRNA的表达均有不同程度的抑制作用,提示凉血活血胶囊作用于血管异常生成环节,可能是其临床治疗银屑病的作用机制之一。