【摘 要】
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目前,鹅肥肝(fatty liver)的研究主要集中在遗传和环境等方面因素,对其形成分子机理的研究还很缺乏。胆固醇转化为胆汁酸是体内胆固醇代谢的重要途径,通常情况下由胆固醇7α
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目前,鹅肥肝(fatty liver)的研究主要集中在遗传和环境等方面因素,对其形成分子机理的研究还很缺乏。胆固醇转化为胆汁酸是体内胆固醇代谢的重要途径,通常情况下由胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7αhydroxylase, CYP7A1)为起始的经典途径在胆汁酸合成中占主导地位。CYP7A1是胆固醇转化为胆汁酸经典途径的限速酶,它特异性存在于肝细胞微粒体内,属于细胞色素P450酶类,其表达水平的高低反映了胆汁酸合成的快慢。本研究以朗德鹅和溆浦鹅为试验材料,利用mRNA差异显示技术和荧光定量PCR技术,对两个品种之间、肥肝和普通肝脏之间差异表达基因进行了分离和鉴定,在鹅肥肝相关基因的的筛选中,通过mRNA差异显示发现了一条鹅肥肝相关基因片段表达序列标签(EST),进一步通过RACE等技术克隆出该基因的全长cDNA序列。经检索GerieBank,这个DNA片段与鸡的CYP7A1有93%的同源性。实时定量PCR结果证实了该基因超饲养过程中被显著抑制了。为了进一步研究CYP7A1在鹅肝脂肪代谢发生、发展中的作用,构建了CYP7A1原核表达载体pET-28(a)-cyp7al,在大肠杆菌BL21中通过IPTG诱导CYP7A1融合蛋白表达,并经Ni2+柱纯化,将其作为抗原免疫小鼠,制备鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,纯化抗体后,通过western blot方法在蛋白水平检测该基因在肥肝和普通肝中的表达情况,结果显示CYP7A1的表达水平在肥肝中被下调了。
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